Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 17
Текст из файла (страница 17)
1псиЬасе сЬе пихппе оп а гос)с!п8 р1асСопп Еог 10 пшшсез ас 4'С. 7. АзЫ Тпсоп Х-100, РЫазе, апд К(зсазе со йе сиЬе со Йпа1 сопсепсгадопз оЕ 196, 5 Сз8/ш1, апд 5 Ссц/ш1, гезресдче!у, апд сопдпие СЬе шсиЬадоп зч)СЬ гос(с!п8 Еог апойег 10 пзшиСез аг 4 С. 8. Кешоче сЬе шзо1иЫе деЬг!з Ьу сепсппа8ассоп ас 3000о (5000 грзп !п а 5огчаП 55-34 госог) Еог 30 зппипез ас 4"С. СоПесс йе ягрегпасапс (сеП 1узасе) из а ЬезЬ сиЬе. 1с пзау Ье песеяагу со раза сЬе знрегпасанс сЬгонВЬ а 0.45-рт 61сег со ргечепс с!о8рдп8 ос сЬе геяп допп8 рнп6садоп о( сЬе ро!уЬЬсЫзпе-са88ед ргосезп. Ргогосо( 7: Риггугсаг(оп о) Н|Тг(г(ггсе-щ8ег( Ргогет| Ьу ГпггпаЬ|1|гег( Хгаг АЬ|огрг(оп СЬгопгаго8гарЬу 15.47 Рог|Т|са1соп оТ1!се Ро!уЬ|51сйпе-1ацкег! Рго1есп 9. А1)о|ч СЬе Ъ|пйп8 ЪиТГег аЪоче СЬе геяп Со г(га)п Со СЬе Сор оТ йе со1шпп.
10. 1пппейасе1у 1оа|1 сЬе се)1 1уаасе (5(ер 8) опсо йе со1шпп. Аг()иас йе йо|ч гасе со 10 со1ип|п чо!шпеа рег Ьоиг. %п аГПп(су гег(пг |чП! сур|саПу Ъ|п|1 -8 — |2 п|8 о( ргосе|п рег гп(Пйсег о( геяп. ТЬе атоип| о( ро!ум|с|йпе-са88ед рго|е!и ргог)исег) (и Е. соП |чП! чагу |!ерепйп8 оп йе |аг8е| рго|е(п, Ьис Ь (| суркаПу |и сЬе гап8е оГ | — |о т8 оГргосе|п рег |оо п|1 оГсеП си1сгае. 11. |Сгаа!с сЬе со1шпп сч(сЬ 6 со1шпп чо)шпеа оТ Ь|пйп8 Ъийег (рН 7.8). 12. чС(аа!с йе со1ип|п ччЬЬ 4 чо1шпеа оТ сча|Ь ЪиТТег (РН 6.0).
Сопбпие |чааЬгп8 йе со1шпп ип6! йе А,„„оу сЬе Посч(Ь|ои8Ь 15 <0.01. 1 3. Е1ше |Ье Ьоип|1 ргосе!и чйй 6 чо)игпе| оГ 10 п|м ппЫаго1е е106оп ЬиТТег. Со)1есс 1-сп! Тгас- сюпа Тгоп| йе со1шпп, апг) п|оп(сог йе А, оГ еасЬ Тгассюп. 14. Кереас 5сер 13 ияп8 ипЫаго1е е1шюп ЬиТТега сопса!п(п8 !псгеаяп8 сопсепсга6опа оТ |пп'- |1аго1е (|.е., 50 п|М, 100 гпм, ап|1 150 тм ипЫаго1е). АЬегпаичесу, |сисе |Ье рго|е|п иг|пц а гопипиоы агайепс о( тсгеаяпа ипЫ||о|е сопсеп|гаиоп поп| |О п|м |о |ОО тм. Мог| Нааса88е|! ргосета чпП е1те Ъес|чееп 50 п|м апг( |00 гпм ппЫаго!е.
|пасеад о( ияп8 ипЫаго!е, |Ье Ъоипа ргосе|п сап Ье е!тед ияп8 Ъи((егс о( |Сесгеаяп8 рН (р!саге |ее сЬе рапе1 оп А$ТЕК(ЧАТГЧЕ РКОТОСО!.: ЕСССТГОН ОГ РОСУН15Т(О|ЬСЕ-ТАОСЕО РКОТЕГН5 ГКОМ МЕТАЪ АГГ(ЪС(ТУ СОШМЬ(5 (|51(ЧС ОЕСКЕА5(ЬСС РН). 15. Аааау йе Тгас6опа оТ (псегеас Гог |Ье ргеаепсе оГ |Ье ро1уЬ!56йпе-са8це6 ргосе|п Ьу апа1уг- т8 20-01 а1(с)иоса Ьу е1ессгорЬогеяа сЬгои8Ь а !Ооб 5(Э5-ро1уасгу1апс(ое Пе1. АЕТЕК(г(АТ!ЧЕ РКОТОСО14 ЕЕС2Т!О(с( ОГ РОГУН!5Т!О!ЫЕ-ТАССЕО РКОТЕ!Ы5 ГКОМ МЕТАЕ АГГ!М!ТУ СОЕС2МЬ(5 О5!ЬСС ОЕСКЕА5!ЫС рН А5 ап а!|егпасве со (тЫаго!е, ро!уЬ(ас(0(пе-са88ег( ргосе(па и|ау Ье емсег! Ггогп йе аП(п(су со!итп ияп8 а |епеа о( Ьи((ега оГ г(есгеаяп8 рН.
САОТСОН: Рсеаае аее Аррепг(|х С 2 Гог арргорла|е Ьапапп8 о( тагес(ась таг(гег( |ч||Ь <! >. АсЫ16опас Ма(ее!а!5 (о|ч РН е(иПоп Ьи((гч (РН 4.0) 20 гам |одвт рпоьрпа|е 500 гпя Г|аС! Г(ье рпогрпопс асЫ <!> |о |о|чег йе рН |о 4.0. Сча|Ь ЬиПег П (РН 5.5) 20 т|4 яЫ(игп рПоьрпаге 500 пгга ГгаС! Ме(Ьог( 1. Сапу оиг йе гпа|п рго|осо! СЬ|ои8Ь 5гер С 2.
2. ЧгааЬ йе со!ип|п сч(СЬ 6 чо!и пеа о( 'чСгааЬ Ьи((ег П (рН 5.5). 3. Е!исе СЬе Ьоипг) ргосе(п |М|Ь 6 чо!игпеа о( !осч рН е! исюп Ьи((ег (рН 4.0). СоПесс | -и|! ГгасПопа (гоп| йе о( еасЬ ГгагПоп. Гог СЬе ргеаепсе оГ йе ро!уЬ(аг(0(пе-Са88ег) ргоСе(п Ьу апа1улп8 20-8! и8Ь а 10% 505-ро!уасгу!агпЫе Пе!.
Рго1осо! 8 Риггйса6оп от Ехргеыед Рго1е~пь тгогп ! пс! ююп Восиеь т не гхккеьяон Ое | Окнсн Ркоте|85 Ат н|сн течет5 |н Е сои оГгеп геьи1ть ш йе Гогшат)оп оГ сутор!аяпк 8гапи1еь ог |пс1ияоп ЬосПеь сошроьет) оГ |пьо1иЫе а88ге8атеь оГ йе ехргеььет! рготеш. ТЬеье |пс1ияоп ЬосПеь сап Ье ьееп ьчтЬ а рЬаье-соптгая п|кгоьсоре апс! аге геасП1у ьерататет) Гтош шоы ьо1иЫе аттс) тт|етт|Ь|атте-Ьоиттт) Ьас|ена! рто|еи|ь аь т)еьсг)Ьет) ш йь рто|осо1.
ВНейу, сеПь ехргеьып8 Ь|8Ь !ече1ь оГ Гоге)8п рготе|п аге сопсепсгатет! Ьу сеп|НГВПат|оп апт) 1уьет! Ьу тпесЬапка! |есЬпи!иеь, ьошсаПоп, ог 1уьогуше р1иь т!етег8епть. ТЬе шс1ияоп ЬосПеь аге гесочегет) Ьу сеп|Нйт8аПоп ап|1 и"аьЬет) ьлтЬ ТН|оп Х-100 апс1 ЕРТА !Мага|оп е| а1. 1984) ог игеа (5сЬопег ес а1.
1985). ТЬе ригроье оГ йе |чаьЫп8 ыерь )ыо гетпоче аь пшсЬ ьо!иЫе, ат!Ьегеп| Ьастена1 рго|е|п аь роьыЫе Ггоп| йе а88ге8асес! Гоге)8п рго|еш. 1п |поы саьеь, ас!)иы)п8 йе тттаьЬ)п8 сопгППопь аПотчь |Ье 1ьо1ат)оп оГ |пс!ияоп ЪогПеь йат соп|а|п >9098 риге Гогет8п рготе)п. ТЬе шасеНа! ехтгастет) !гоп| йе ригтТ|ес! )пс!ияоп Ьот)у сап Ье пьес! сПгесПу аь ап апП8еп (Наг1оьч апс! Еапе 1988). То оЪ|а)п ю1иЫе, аст)че рготе)п, йе тчаьЬес! )пс1ияоп ЬосПеь аге ьо!иЪ|1|хес1 ап|1 |Ье |1епатигес! таг8е| рго|е|п 1ь йеп геГо1Пет!.
Чаноиь сопсППопь (е.8., 8иапп11пе НС1 )5 — 8 М], игеа )6 — 8 М), 5Р5, аП|аПпе рН, ог асетоп)тгПе/ргорапо1) шау Ье пьет) то ю1иЬ~1|хе йе )пс!ияоп ЬогПеь !Мать|оп 1987). Ойег шетЬос)ь ьисЬ аь раььа8е оГ сеП ьиьрепяопь тЬгои8Ь а ргепсЬ Ргеьь ог ьопкаПоп сап а1ьо Ье пьес! |о 1уье сеПь сои!а)п!п8 )пс1ияоп Ьот))еь. Рготешь ехргеььес! 1гош Т7 К1хА ро!уп|егаье честогып сеПь сопсаш|п8 р1.уь р1аьшнЬ сап Ъе 1уьет) Ьу тпетЬос!ь с!еьсг)Ьес) |и Рго|осо! 2. ЪЧ11Ь аП оГ йеье ргосе|1игеь, 11 1ь сгис)а1 то оЬ|а)п п|ахппшп сеП !уыып огт)ег |о оЬ|а)п )пс1ияоп ЬосПеып ЫцЬ у)е1Пь. ЕасЬ ргосеш тпау тес!шге а ьППЬПу |ИГегеп| ргосейпе, тгЫсЬ пшы Ье с!етегш)пет) ешр|НсаПу !р!еаье ьее М)тга!|1 ап|1 Кш8 1989).
ТЬе ргосет!иге 81чеп Ье1отг Ьаь Ьееп пьес) то ьо!иЬП)ге ргогепп)п Гпс1иыоп ЬосПеь апс! 1ь ат)ар!ее) Ггоп| Магыоп ет а!. !1984). Ъаг)оиь орПопь Гог геГо1сПп8 ю1иЪ|11ге|1 рготе)пь аге оитПпет) 1п |Ье рапе1 оп АОО1- Т!О!|1АЕ РКОТОСОЕ: КЕЕОЕОВь1С 5ОШВ1Е1т ЕО РКОТЕ1Н5 КЕСОЧЕКЕО ЕКОМ!|ь1СШ51ОН ВОО1Е5 а| |Ье еп|1 оГ й|ь рго|осо1. 15.49 Ртосого! 8: Риттуггаг!оп оГЕхртеяет) Ртогетх утот Гпе1их!ол Вог)гех 15.51 Чес1ог8 апд ВасГегса! Яга1п5 Е. соП се!Ь ехртеяпп8 йе ртосе!и оГ Висеть Огоът 1 !пег ос Е. со!г ее!Ь йас !саче Ьееп сгапхуогшег) Ьу апу ос йе пзесЬогЬ сп Ргососо!х С вЂ” 4 апа поъч ехргеыеь сЬе ргосесп оГ !исегехс ах !пс!ояоп ЬогПеа МЕТНО0 Ргерага11оп оГ Се11 ЕХ1гас1 1. СепсНГи8е 1 )пег оГ сЬе сеП си!сиге оГ Е.
со!с ехргеаа!п8 йе ргосеш оГ спсегеас ас 50008 (5500 грпс сп а 5огчаП О5А гогот) Гог !5 ппписеа ас 4'С гп ргесчег81сег1 еепсг!Ги8е ЬогПея ~ САСРОКТАМТ Ретсотш 5герх 2 — 4 аг 4'С. 2. Кешоче йе аирегпасапс апг! г)есегш!пе йе сче)8Ьс оГ йе Е, со1г' реПес, Рог еасЬ Вгапс (счес хче!8Ьс) оГ Е. га!Е агЫ 3 то! оГ СеП!уяа Ьссйег !. Веассарепг) сЬе реПес Ьу 8епс!е чотсехсп8 ог Ьу ас)гг)и8 сч)й а ро!ьЬег) 81ааа гой 3.
Рог еасЬ 8гаш оГЕ. го!Ь агЫ 4 Сс1оГ !00 шсчс РМ5Р апг) сЬеп 80 )с1 оГ 10 ш8йп! 1ухокуше. 5с!г йе виарепяоп Гог 20 ппписея ОгЛет соспа!!г ос ргосеахе шЬПЬЬогг тпау Ье аооег) ас сЬЬ хсер Ср!еахе хее Ргососо! с ). 4. 5с)гг)п8 сопПпиоиа1у, агЫ 4 си8 оГ г)еохусЬоПс аеЫ рег Вгаш оГЕ. со18 5. 5соге йе апарепяоп ас 3уоС апг) аПг П оссаяопаПу чч!сЬ а 81ааа той 'г)тЬеп сЬе 1уаасе Ъесошев чьсоия агЫ 20 )П оГ 1 ш8йп1 Р!х)аае 1 рег Вгаси оГ Е. со)г'. 6. 5соге с!се !уаасе ас гоопс сепсрегасиге пил Ь ь по 1оп8ег ч)асоиа 1-30 ппппсеа). Риг1Гсса6оп апг! ЪЧа51с1пе оГ 1пс!о51оп Вос11е8 7. РиНГу апг) счааЬ сЬе шс1ияоп ЪогПеа ияп8 опе оГ йе ГоПочч)п8 ссчо шес!согся МЕТНОО 1: РЕСОЧЕК Пх)СШ5!ОМ ВОО!Е5 05!!х)С ТГС!ТО!х) Х-100 ТЬе ГоПохч!п8 ргоседиге ь аг)арсег) Гуош Маппоп ес а1.
(!984). а. Сепспри8е йе сеП 1уаасе ас гпахппшп ареегс Гог 15 ш!ппсеа ас 4'С )и а ш)сгоГи8е. Ь. Гсесапс йе аирегпасапс. Кеаиарепг) с!се реПес гп 9 х о!шпеа оГ СеП 1уяа ЪпГГег 1! ас 4'С. с. Вгоге йе аиарепяоп Гог 5 пппШеа аС гоогп Сешрегагиге. д. СепсНГЬВе йе сиЬе ас тпахпппгп ареег) Гог 15 шсписеа ас 4"С !и а гпкгоГи8е, е. )3есапс сЬе аирегпасапс апг) вес гс аяг)е Сог йе пехс асер.
Кевиарепг) йе реПес сп !00 Сс1 оГ Н,О. Г. Пепюче !О-Сс! хапср1ек оГ сЬе аирегпасапс апг1 оГ сЬе геаиарепг)ег) реПес. М!х еас!с аашр1е гчПЬ !О Сс1 оГ 2х Я35 Ве1-1оаеПп8 Ьпйег апг) апа!ухе йе аашр1еа Ьу 51)5-ро!уасгу!агпЫе Ве1 е1ессгорЬогеяа со г)есегш)пе ччЬПсЬ ГгасПоп сои!а!па с!се ргосеш оГ !исегеас. д. 1Г песеыагу, ргосеег) чч!сЬ 5сер 8 со ао1цЬг1тхе йе псс1ияоп ЬогПея Ргососо! 8л Ригфсас(оп о) Ехргеллег( Ргосетз)лгогп 1пс)ил(оп Вог((ел 15.53 ) А001ТСО(ъ)АЕ РКОТОСОЫ КЕЕОЕ013ъсС 5ОСОВ! ССХЕ0 РКОТЕ1635 КЕСОЧЕКЕ0 ЕКОМ ~ СЬССЕ051О)ъс ВО01Е5 , Кепа(игасюп апг1 ге(о!йпц о( но)иЬ)1снед рго(е!п оссиг сапог)пц цгас1иа) гепюча! о( Вепасиппе аеепсн апсчог ( ссесегцепь.
О( песенн)су, СЫн (пчоЫеь ехрониге о( Ьус1горЬоЬ)с ген)опн о1 СЬе ргосе!п со но)чепС, а ргосенн ъчЫсЬ, ип(енн соп6(с)опн аге сагесиИу сопсгоИед, сап (еаза со СЬе Соггпас(оп о()пноЫЫе аПИецасен апилог но1- иЫе Ьис (пассйе спи)с)гпегю )и псапу сажею спин(6егаЫе ъчогИ 'ь гесси(ге6 со нирргенн Соипасюп о( СЬене о(3- ~ расЬъчау а88гецасеь апд СЬегеЬу а3(оъч ргосе)п гпопоисегн Со (оЫ )псо а И3у пасйе соп(оииасюп. ТЬе у)еЫ о( ас6че ргоСе(п ог о( ргосе(п ъч(СЬ СЬе па(юе нсгиссиге Верепссн оп гпапу Сассогн )пс)и6)пц СЬе н(хе, пигпЬег, апсс 6(нспЬисюп о( Ьуг3горЬоЬ(с агп)по аскЬ; сЬе пипсЬег о( гереас нсгиссиген )и 6ле ро)урерс)де; сЬе сопсепсга- ~ 6оп, рипсу, апд н(не о(СЬе ро(урерсЫе; СЬе рН апсс Ып!с нсгепесЬ о(СЬе ноЫепс; СЬе пигпЬег о(йни)ИС(е Ьопбн ! (и СЬе ию3еси1е; апд, ИпаПу, сЬе гаСе о( ге(оЫ)ие. Ген Пепега( В лЫеИпен аге ренн!Ые Ьесаине СЬе соийс)опн СЬас ргогпосе е6)с)епс ге(оИпе часу ъч(ссе)у Поил ргосе)п со ргосе3п.
Соиспюп неоне, Ьоъчечег, ьи88енсн сЬас И ъчоиЫ Ье Ьенс со енсаЬИеЬ а Ьан)с нес о( соп6)С)опн СЬа( ихппиыен сЬеплка3 пюсИ(са6оп о( апнпо асЫ нее сЬа)пю )пЫЬ((н рго(ео(унт, апй (и СЬе саяе о( сусоноИс ргосе(пЬ нирргеннен 1опиа6оп о( !псегило(оси(аг йеи(6ссе Ьопссн 6иг!пд рипйсасюп о( СЬе депасигесс ргосе(п. ТЬе ге(оИпе ргосенн сап СЬеп Ье орс)ил!ае6 Ьу егабиа))у гебис)пе сЬе сопсепсга6оп о( депасиппе аеепсн апй (ог ьесгесе6 ргосйпн, Ьу нЬПС)пе СЬе Ьа1апсе Ьесъчееп охЫ(а)пе апсс гебис!пд спой(спин ас чаг)оин н(аней ссиппн но(иЫИаа((оп ап6 гепа(игабоп (НЧи(6пц ап6 Р1исЫ~ип 3 994). Рог ссе(а)В о( ьечега) ргососо)н сЬас Ьаче Ьееп инесс еиссеннйл31у ъч(СЬ 636егеис ргосе)пю р1еаье нее Магнсоп (С 98л) апд 8игцень (3 996).
'Псе ьециепсе ос гесочегу, но)иЫИка(юп, апсс ге(оИп8 о( ехргеннесс ргоСе)п Сгогп !пс1сьюп Ьоб(ен 'ь йаПгаилгпес1 )и Бциге С 5-6. Напоин соиниегс)а) геноигсен аге ачаИаЫе (ог с1есегил)п)пц СЬе спенс арргорпасе ге(оЫ!пе нсгасееу (ог СЬе раг6си)аг ргосе(п ипс1ег нсибу (е.д., р)еноте нее СЬе ргососо1н апс1 геацепсн ргойссе6 ъч(СЬ сЬе Ргосесп Ке(оЫ(и5 КЬ, ачаИаЫе (гоги Ьлочаееп а( ъъччъч.почато.соил). А16лоиеЬ по ге(оЫ!пн псе(Ьос3 'ь рег(ес(, а СесЬп)ссие СЬаС у)е)сЬ ечеп а (еъч регсепс о( СЬе ехргеннед ргосе(п (и ап ассйе Соггп ъч)3! иниаИу ргочЫе епоиПЬ пласепа) (ог ниЬнессиепс Ь(осЬеинса( ехрепгпепсасюп. П 'ь о(сеп ронн)Ь)е со верагасе сЬе ге1о(с1есс ргосе(п Попс сЬе ип(о)й есс апс3 а88гедасе6 1оипн о( СЬе ро)урерсЫе Ьу це) ЯИга6оп сЬгогпасоцгарЬу (Вп ес а).
с 989). 1пгогтас1оп Рапе1х 15.55 ЕХРКЕ66!О!Х! ОГ СЕО!Х!Е0 СЕ!ъ!Е$ Ехргемюп оЕ с!опеъс депеа ь регЬарз сЬе 1аас агеа оЕ то!еси1аг с1ошпд сЬас гесаша аогпе чек!!де оЕ йе рюпееппд арсгП. Весаиае сЬе гоисеа Еог 'ьо!а6пд депеа апъс сРСъсАа аге поъч ао ъчеП-спарре6 апс! Ьесасье епкугпеа апс! геадепь оЕ ЫдЬ ъ!иадсу аге ачас!аЫе ас а1гпоас ечегу асер оЕ сЬе ъчау, с1опеь сап гьиаПу сгаче! Егот ргосеш со депе ш совсЕогс апъс ъчссЬ геаъопаЫе сопЕсъсепсе. Ноъчечег, сЬеге ь опе геддоп оЕ гпо1еси1аг с!отпд — ехргеяюп оЕ с!овес! депеа — оЕ ъчЬссЬ сгачедегыпиас Ьеъчаге. 6 1а а таке оЕ пшадеа ъчЬеге аиссея с!ерепъса оп сЬапсе апс! ехрепепсе псау Ье оЕ Пп!е Ьепе6с. 1с ь сЬе опе агеа сп псо1еси1аг с1ошпд ъчЬеге шчеапдасога сап ъсо ечегусЫпд регЕесс!у апс1 а66 аее сЬе ехрегсшепса Еад.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
