Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Аз а пе8акгче сопкго1, скапзЕогт аоо1ЕЕопа! се1!з оЕ к!ле загпе зкка!п оЕ Е. со0 зч!ЕЬ ЕЬе епзрку ехркез° юп чеслок. 4. 5сгееп ЕЬе !капа(огшапгз Ъу со1опу ЬуЬгЫгхагюп апс!Еог гезгг5скюп епхугпе апа1уяз, о!18опис1еогЫе ЬуЪг!тхаг(оп, ог с)!гесс РХА зесрлепсе апа1уяз оГ р!аяпЫ ппшргерагайопз (р1еазе зее СЬаргег 12, Ргогосо1 3). Ор6гглыа6окл оГ йе 1пе!еле(1оп оГ Тагде( Рго(езп Ехрге85!оп Мапу акис)!ез ро!пс го йе пирог!апсе оГ ЕЬе гасе о( се11 ВгоччгЬ оп Гоге!Вп ргоге!п ехргезз!оп. Рог !Ьлз геазоп, В !з ипроггап! Ео аппп!гог йе пшпЪег оГ Ьасгег!а лпоси1акес1 (пко йе 8гоччкЬ шее)1- шп, ЕЬе 1еп81Ь оГ кипе се!18 аге Вгоччп Ье(оге шс)иск(оп, апе( кЬе с(епягу со ччЬЫЬ се!18 аге Вгоъчп а(гег !пе)исг!оп. Очег8го мгЬ ок соо гарЫ 8гоччй сап очек!паз) ЕЬе Ьас!ег!а! зупйекк аррагагиз апс) ргопюсе ГоппаВоп оГ лпс!ияоп Ъойез.
5. Рекегпипе йе оргппиш сопййопз Гог йе Епс)исг!оп оГ гаг8ес ргогелп ехргезяоп, ччЬкЬ ь с1 г(чеп Ъу кЬе с(оччп-ге8и1аг!оп оЕ кЬе с1 гергеззог ргокеш, еЬЬег Ъу ап лпсгеазе ш сегпрегашге ок Ьу йе ргезепсе оГ ггурсорЬап. рог а йзсызюп оЕ Еаскогз йак аЕЕесс !пйиск1оп, р1еазе зее ЕЬе поле ко 5кер 8 зп ркокосо! 1. ЪЧНЕН (35!!ч!С А ТЕМРЕКАТ()КЕ-1МРЕЗС1ВЕЕ 5У5ТЕМ а. 1поси1а!е 1-ш1 си!гигез оГ ЕВ шейшп сопка(шп8 йе арргорг!аге апг!Ьюккз чч!ЕЬ 1 ог 2 со!оп!ез оГ Е. соВ (саксу(и8 йе с!ь857 а11е1е) сопкалпш8 кЬе ешргу ехргезяоп чессог, апс1 1 ог 2 со!ошез сопкалпш8 йе гесошЬлпапс ехргезяоп чесгок.
1псиЪаге йе си1ьлгез очегпл8Ь! а! 30'С. 1пс1ие)е аз роя!!че сопкко1 ап ехркезяоп чеяок епсосВп8 а ркогею оЕ Ьпозчп яхе. Ь. 1поси1аке 10 ш1 оГ ЕВ кпейшп соп!аш(п8 апВЬюйс !и а 50-ш1 Г(аз)с чч!!Ь 50 р! оГ ап очаги!ВЬЕ сиЬиге. Сколе !Ье си!гиге го !Ье шЫ-!о8 рЬазе о(8голчгЬ (Аз,„= 0.5-1.0) а! 30 С. с. Тгапз(ег 1 ш! оГ еасЬ ип!пе(исес( си11ше (лего-кипе а!био!) го ш(сгоГи8е киЬез. 1гпгпейаге!у ргосезз ЕЬе гего-гппе а1!с)иогз аз с(езсг!Ьес) !и Ыерз 6 апс) 7. й 1пе(исе ЕЬе кемпа!пе)ек оГ еас!л си1гиге Ьу зЬЕТЕ!п8 ЕЬе шсиЬаВоп Секпрегакше ко 40'С. Ргосеес) го 5кер 6.
А1йоиВЬ 42 — 45'С ь пзее( е!зезчЬеке ю йь кпаппа1 ко юасОчале йе ЬаскепорЬахе Х с1и857 8епе ргойпск, 40"С ь изей Ьеке ко гейпсе йе !пйпсгюп оЕ Ьеак зЬосЬ ргокеюз апе! Ео аПозч 8гоччгЬ оЕ ЕЛе ее11з ко сопОпие. ЪЧНЕЫ !)ЫХС А ТКкРТОРНАЬ)-!НР()С!ВЕЕ 5г5ТЕМ а. 1поси!аке 1-ш1 си1кигез оЕялрр1ешепкес( М9 апек)!шп лч(!Ь 1 ог 2 со1оп!ез оГЕ, соВ (саггулп8 ГЬе с! чч!1О-куре а!1е1е) сопка!п!п8 ЕЬе ешрку ехргезяоп ческог, апс1 1 ог 2 со1оп!ез соп!а!п!пц !Ье гесошЬлпап! ехргеззюп чес!ок. 1псиЪасе ЕЬе си1шгез очегп!8Ь! ас 37"С.
1пс1ш1е аз рояиче сои!го! ап ехргезяоп ческог епсойп8 а ргоке1п оЕ Ьпозчп яге. Ь. !посо!асе 1О гп! оГ зирр1егпепсес) М9 плесВшп лп а 50-ш! Г(аз(с зч(кЬ 50 )л! оГ !Ье очеги(ВЬ! си!гигез. Сгочч йе си1кшез ко йе шЫ-1о8 рЬазе оГ ВгоччкЬ (А „, = 05 — 1.0) а! 37'С. с. Тгапз(ег 1 гп1 оЕ еасЬ ипшс(псе<1 си!!иге (гего-г)ше а1!с)иог) го ш!сгоГи8е !иЬез. !пппесВасе1у ргосезз !Ье лего-!!ше а1(с(иокз аз с)езсг!Ьес( !и Ыерз 6 апс) 7. д.
!пс!исе сЬе гетпа!пс)ег оЕ еасЬ си1сиге Ъу ас)йпц тгурсорЬап со а 6па! сопсепсгасюп оГ 100 рцйп1 апс! сопппие спсиЬасюп ас 37'С. Ас чапоиз 6ше ро!пса с!иппц сЬе тпг1иссюп репос1 (е.ц., 1, 2, 4, апс1 6 Ьоигх), сгаихЕег! ш! оЕ еасЬ си1сиге со а писго6сце сиЪе, шеааиге йе А, „сп а хрессгорЬосошесег, апс) сепспЕице йе сиЪеа ас тпахипшп хреес) Гог 1 пипше ас гоопс сешрегасите сп а ш!сгоЕице. схешоче йе аирегпасапса Ьу аар!гас!оп. Кеаиарепс) еасЬ ре1!ет !п 100 р1 оГ 1х Юц це1-1оайпц ЬиГГег, апс1 Ьеас сЬе аашр1ех со 100'С Еог 3 пипи!ее. СепспГице сЬе сиЪех ас шахипшп хреег1 Еог 1 пиписе ас гоош сетпрегасите тп а иисгобтце апс1 хсоге йеш оп ке ип61 а!1 оГ йе аашр1ех аге со11ессес1 апг1 геас)у то!оасГ оп а це1.
Чгапп йе хашр!ех со гоотп 1еспрегасиге апс! 1оас) 0.15 О!35 о иппа Го!от!ц!па! си!сиге) ог 40 рц о! еасЬ аиарепяоп оп а 10% 8115-ро1уасгу1ашЫе це1. схии йе це1 аС 8 — 15 !г! сш ипт!1 йе ЬтотиорЬепо1 Ыие геасЬех йе Ъоиош оЕ йе гехи)ч!пц це1. цса!п сЬе це! сч!1Ь Соошаяце Вп11!апс В1ие ог я1чег, ог сатту оис ап ипшипоЫос со чтаиа!тхе сЬе !пс1исес1 ргосе!п (р1еаае хее Аррепйх 8).
Рог се11а ехргеаяпц сЬечегсог а1опе, по ййегепсе сп 11се ргосесп раиего аЬоиИ Ье песет! Ьепчееп ипсгапатогшесС Е. соБ се1Ь апет се1Ь сапушц сЬе егпрсу ехргеаяоп чессог. рог сеца ехргеаяпц сЬе гесогпЪспапс репе, а ргосесо о! йе ргес!1ссест гоо1есо1аг сче18Ьс аЬои!о Ьесоше чсяЫе ас аписе Вгое рошс аусег сит!асс!оп. 10.
Еагре-5са!е Ехрге88!оп оЕ !Ье Тагее! Рго!е!п Рог 1агце-хса!е ехргехх!оп апс) рип6сасюп оЕ сЬе сагцес ргосе!п, !поси1асе 50 пс! оЕ ЬВ сои- !а!п!пц ап6Ью6с ог хирр1ешептес) М9 гпейшп ш а 250-пс! Йах)с счИЬ а со1опу оЕЕ. соВ соп- са!п!пц йе гесошЬ!паис сопхтгисс. 1псиЬате йе си!сигеа очегшцЫ ас 30"С ог ас 37"С, техресссче)у. 1поси1асе 450 тп1 оЕ ЕВ р!иа ап6Ъю6с ог хирр1ешепсег! М9 шейшп сп а 2-!йег Ваа)с сч!1Ь 50-ш1 очегп!8Ьс си1сигех оЕ Е. соц сопсасшпц сЬе гесошЬтпапс р1аяпЫя !псиЬасе йе си1- тигеа сч!1Ь ац!сас!оп ас 30"С ог 37'С, гехреспче1у, ип61 йе си1сссгех Ьаче геасЬег1 йе тпЫ-1оц РЬаае оЕ цгосчСЬ ГА,„= 0.5-1.0).
1пс)исе СЬе сиЬиге ассогйпц Со ейЬег цтер 13 ог 14, ах аррторпате. 12. !пс)исе сЬе Е. соВ си!сиге сапушц йе с1ь857 а!1е1е Ъу йе асЫЬюп оЕ 500 ш1 оГ 1В шейшп Ьеасес) со 65'С. 1псиЬасе сЬе си1сиге ас 40"С Еог сЬе орсипшп типе регюс1 г1есегпипес1 !и сЬе ргелоиа хесс!оп. Ассегпассчесу, со11есс сЬе Ьассепа! се1Ь Ьу сепсгтуоцассоп ас 12,000е !8600 грос со а 5огчац 05А госог) Еог 5 шсписеа ас гоосп сешрегашге. ТЬео геаоареист сЛе ре11ес ш 500 гп1 о! 1.8 шеецшп счагшест со 40'С, апс! сосоЬасе сЬе си1шге ас 40'С Еог с1се оршпшп Ьше регсос! ссесегпстпес! ш 5сер 5. 13. !пг)исе йе Е.
соВ си!шге саггуспц сЬе с1 аПе1е Ьу йе асЫ!с!оп оЕ сгурторЬап то 100 )тц!ш1. 1псиЪасе сЬе си1сиге ас 37'С Гог йе орсипшп сипе репос1 с)есепп!пес! !и йе ргеч!оих хессюп. 14. Айег йе !пс!исес1 се115 Ьаче цгосчп Еог йе ргорег !епцй оЕ сипе, Ьагчеас сЬе се115 Ъу сеп- сг!6сцас!оп ас 50008 !5500 грти ш а цогча11 бцА госог) Гог 15 пипи!ее ас 4 С апс1 ргосеес1 сч!1Ь а рипбсасюп ргососоЬ 15. ° Ргососо! 5 !Г йе ехргехаес1 ргосе!п !а а Еияоп сч!тЬ 81исасЬюпе 5-сгапаГегаае ° Ргососо1 6 !Е сЬе ехргеххес! Ргосеш !х а 6сяоп сч!1Ь гпа!сохе-Ь!пйпц ргосе!п ° Ргососо1 7 !Г йе ехргеахег) ргосеш сои!а!иа а ро1уЬ!51!йпе сац Рготосо! 3: Ехргеятоп о)г С!опегГ Сепех т Е. со!т !ух!пц йе Вас!ее)орЬаце )с рс Ргогпотег !5.29 Ехргеююп о1 5есге1ед Гоге~дп Рго1е~пь Быпд йе АПса! ~пе Рпоьрпа1аье Ргогпо1ег (рпоА) апд Язепа! 5ециепсе оа 5омг гхотннх, гхрохт то гни Ргяикльм~с ычск нлх лвчлнтлскх очег сопчепьопа1 ехргеаяоп гп йе сугоьоЬ ° Боте ргоке!пь гЬак аге ъ)е8гаъ)еъ) Ъу !пкгасе11и!аг ргогеаьез аге ьгаЫе ги гЬе репр1аяи (Та1тафе ес а1.
1980). ° 8оте рго[ешх кЬак аге !пасгп е ъчЬеп ргоь!псес) гпкгасе11и1аг1у аге асггче ъчЬеп ехроггей хесгег)оп тау а!!оъч гЬеги ко Ъе ргорек!у Ео!бек! (Сгау ек а1. !985). ТЬе р)гоА хуькет Ьаз Ьееп ихес) го ехрогг Ьшиап ерЫепиа! 8гоъчй Еаскок (ЬЕСР) шсо кЬе репр1аяп оЕ Е. со!1 (О)ъа ек а1. 1985). ТЬе ехроггес) ЬЕСР сои!а)пег) йе соггесг!у ргосеххес) аиппо Кегт!пик апк) поппа! Ъю!о8!са! аск!ч)гу, Епс1какш8 йак гЬе гЬгее ъ)!хи!Его Ьопъ)х оЕ ЬЕСр ъчеге соггеск1у Еопиед.
° Ргоге)пз аге ргок!осек! йаг ъ!о покЬаче ап аиппо-кегпппа1 икейюп)пе, япсе с!еача8е оссигь Ьекъчееп йе ы8па1 реркЫе апс) гЬе сойп8 хек)иепсе. ТЬе гъчо та)ог ргоЫеиъа епсоипсекес1 гп йе ехрогс оГ Гоге)8п ргокешх аге йак уге!сЬ аге оГсеп 1оъч, апъ) с!еача8е оГгЬе я8па! реркЫе гиау пок оссиг ог тау оссиг ак ап шарргорпаке роя!!оп ! кпап ег а!. 1990). ТЬеье ргойетыпау ьотекппеь Ъе гетеь!!ек! Ъу !паек!!п8 храсег апипо аснЬ Ьепчееп йе я8па! хеъ!иепсе с1еача8е яге апк! кЬе Гоге)8п ргокегп ог Ъу ияи8 Е.
со!1 хгга!пь кЬак очегехркея опе ог киоге оГ йе я8па! рергЫаье 8епея !п йРа ркососо1, ехрогк )х ассотр!1хЬеъ) Ьу Епяп8 йе сойп8 ьес!иепсе ко П1)А епсойп8 йе рЬоА я8па! рергЫе, ъчЬгсЬ )х с1еачеь) Ьу йе Ъаскепа1 ы8па! реркЫахе ах гЬе ргоке!п 1х ехрогкеь) кпко йе храсе Ьеичееп йе шпек апъ) опгек тетЬкапеь оГ Е.
со)8 ТЬе рЬоА 8епе епсок!еь гЬе а1)са!ше рЬоьрЬакаяе сотропепс !йе хате епхуте ихеь) со с)ерЬоьрЬогу)асе пцс1еЫ асЫх) оГ кЬе рЬоярЬаке ьсачеп8!п8 яухгет оЕ Е. со!1 апъ) Ех кергеюеь! ипс!ег сопйгюпь оЕ ехсеъх рЬохрЬаге. Ноъчечек, аъ рЬоарЬаке Ъесотеа 1иипш8 ш йе тейшп !!.е., ах йе Ьассепа1 си1шге епгегх кЬе 1а8 рЬаье оЕ 8гоъчй), йе 8епеь ги йе рЬо орегоп аге 8гас)па!1у !пъ)псеъ) го Ь18Ь 1ече!я ТЬе сопок)пепси оЕ кЬ)х ке8п1акюп Гог р)гоА ехргеьяоп ригроьеч аге гъчоГо1й р)гчк, а 8гак)иа! Ьи!1д ир оГ йе Гоке!8п ргоге!п иссака ги йе се11, !пяеас1 оГ кЬе аспге !пк!исгюп гЬаг осспкь ъч!кЬ окЬег ге8п1агек) ркоиюкег ьуькетя ТЬе ь1оъчег Ьш14 пр ъ!есгеакех йе сЬапсе оЕ очек1оайп8 сотропепгх оЕ йе Ьаскепа1 ехргехяои хуя сепг апк) гЬе Гогикакюп оЕ гпс!ияоп Ъойея 5есопс), йе 8гадпа! Ьш!д ир а!!оъчх гЬе ехргеххюп оЕ Гоге)цп ро!урербс1еа кЬаг т)8Ьк Ье гохкс гЕ !пк)псеъ) го Ь!8Ь 1ече1х очег а аЬогк регюс1 оГ кипе.
Ргогосо! 4: ЕхргезьЕоп оЕ БесгегегЕ Роге!Ко РгогеЕпз 15З! МАТЕК!АБ СА$7Т!О!л1: Р1еаье ьее Аррепг11х 72 Еог арргорг1а1е Ьапг111пе оЕ гпаЕепа1ь гпагЬег1 ъч!ЕЬ <1>. ВНЕЕеу5 апд по1оЕ1оп5 Р!еаье ьее Аррепг11х 7 Еог сотропеп1ь оЕ ь1осЬ ьо1ипопь, ЬиЕЕегь, апгЕ геаеепЕь. О1101е ь1осЬ ьо1ипопь Ео ЕЬе арргорпа1е сопсепЕгабопь. Соотаьь!е Вп!Вапг ВЕие ьгаЕп ог 5!Ечег ьгат Р1еазе ьее Аррепйх 8. Мкгопи1пепгь Еиьег7 гп 70х МОР5 ьа7737 37 гп81ХН,1„МогО, 4НгО 84 ш8 СоС1г ! 58 ш8 МпС1, 4Н,О 247 пз8 Н ВО, 25 ш8 Сп5О, !8 пь8 Хп50, 736зо1че ш а Впа1 л о! шпе оЕ 10 гп1 апг7 згег!1!ге Ъу 61ггаНоп.
5гоге аг 4'С. 70х МОР5 ьаНь Еиьегу гп тгуисггоп тесугигп) 400 шлг 3НХ-пьогрЬо11по7ргорапезп!Еоп!с ас!с1 1РН 7 41 1МОР51 <! > 40 шМ Тпсше 1РН 7.41 0.1 шм Ре5О, 7Н,О 95 шМ ХН С1 2.8 гпм К,ВОа 5 ПМ СаС1, 2Н,О 5З шм МВС1,.6Н,О 0.5 м ХаС1 06зо!че 1п а 6па1 чо1шпе оЕ! 1Ьег, апсЕ згеп! гае Ьу 61папоп. АсЫ 10 01 оЕ ппсгопшпепп рег 1Ьег Ьеуоге озе. Хеигга! рЬоьрЬаге Ьиууег Е7 М7 Еиьег7 т тг7исггоп тег7гит) Ап еошшо!аг ппх оЕ 1 м Ха,НРО, апг7 1 м ХаН,РО„.
7х 5О5 Ве7-!оасЕгпе Ьиууег 5гоге 1х 5775 Ве1-1оайп8 Ьпб ег 1асЫп8 6пЬюЕЬгепо1 аг гоого гегпрегашге. АсЫ йгЬюгЬгеао! Егогп а 1 м згос1с !ыг ЬеЕоге гЬе Ьпбег Ь епес1 Еп 5гер 8. Се15 Р07уасгу7атЕгуе деl 7707'7 сопгат7пе 5О5 <!> Рог ЕЬе ргерага6оп оЕ 505-ро!уасгу1ашЫе Ве1з пзегЕ гп гЬе зерагагюп оЕ ргогешз, р1еазе зее Аррепйх 8.
Нос!е1с АС1415 апд О1фоппс1ео$141е5 Сепе ог СОХА ЕгаВгпепг оЕ тгегеьг Мее11а Епдиспоп теобит ! х МОР5 ьа!и 1Еог гесгре, р1еазе зее Вппеп ап6 5о1пгюпз аЬоче1 0.29о Елч7ч7 81псоье 029 о 1чг7ч7 сазапппо асЫз 1чааппп аыау с!па!1!у; Г)1РСО7 20 п87гп! ааеп1пе 0.5 Гг87пз! гуаапппе 0.1 м пешга1 РЬозрЬаге Ьопег 1Еог гесгре, р1еазе зее Вобегз апс1 5о1шюпь аЬоче1 СошЬгпе гЬе 1п8гейепп го а Впа! чо!шпе оЕ 1 16ег гп Н,О. 5гег61ге Ьу 61гга6оп апа згоге аг 4'С.
ТЬЬ!олч-РЬозрЬаге гпейшп, лчЬкЬ Ь пзег7 го гпс1псе сгапьспр6оп оЕ йе р7гоА ргопгогег, лчаз оп81па1- 1у Вечаореб аз а пшшпа1 за1ыпейшп Еог 1зогорк 1аЬе!ш8 1ХеЫЬагй ег а1. 19741. А11Ьоп8!ь йрпсоЬ го ргераге, гУаз шейшп сопз1згепг1у ргочЫез гЬе 168Ьеьйече1 оЕ 1пс1осгюп. 15.32 СБарсег !5: Ехргеььгоп о! С!олег! Бепеь гл ВьсЬепсЬса соП ЕВ адаг рlа!еь сопгаспспд 50 ПВ!т! агпргсг!!т ЕВ гпег!!ит спаса!и!пе 50 ссВГт! агпр!с!!!!и Сеп1гсЕщед аосте Во1огд 5огнаll С5А гогог ог едшна!епс 5огнаВ 55-34 госог ог едисна!епс йресса1 ЕоосргпепФ Вог!глВ снасег ЬаЯ АЕЫ111опа! Веацеп18 5гер 1 оГ СЬГь ргососо! гедшгеь СЬе геадепп 5сер 2 оГ СЬгь рго!осоl гедшгеь СЬе геадепп 5сер 3 оЕ !Ьсь ргососо! гедшгеь ЕЬе геадепсь 5сер 4 оГ ЕЬ!ь ргососоl гедииеь Яе геадепсь !!ьсесЕ и СЬарсег В, Ргососо! 7. !ГьсесГ гп СЬарсег 1, Ргососо! 7 7 ог 19.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
