Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Ь. Сепст|6лВе |Ье сцЬе ас 500д (2100 гртп |п а 5огчаП 55-34 гогот) Еог 5 ил|потех ас 4"С. СагеЕиПу сгапхЕег тЬе |шрегпасапс со а ЕгеаЬ шЬе. ТЬе ргосе|и оЕ |исегея саи Ье терагасегс Егоги сЬе ргосеахе Ьу соичеисюиа! сЬгогиасойгарЬу ог Ьу 505-ро|уасгу1ашЫе Ие! е1ессгорЬогеях. 1 Ргосе(их хесгесесс |и|о |Ье реир|аятхс храсе о( Е. сой саи Ье геагс((у ге(еахесс йоги се((х Ьу ояиоссс хЬосИ ах ~ ссехсг(Ьсхс |и 5сер 3. Тгеасгиеит о( Ьассеиа чч(сЬ Ьурегсои(с |ю|исюих сои|а|и|иВ ЕОТА И.е., сей (ухсх Ьийег! 3 сЬаийех гиегиЬгаие(сей |чай реггиеаЬ(3(су, аигс хиЬхегсиеис (исиЬасюи !и а Ьуросои(с хо(ис(ои (|.е., 0.| и|м ~ МВС1,3 сасьех реггиеаЬИ|тасюи о(сЬе сей |чай аи|1 ге1еахе о( согироиеисх Егот |Ье реир|аяи(с храсе (йома| | 1 аисс Нерре| С 966). Се((х Ьагчехсегс Егои| ехроиеийайу дгосч(ий си!(и тех аге итоге геасс((у хЬос(гесс ЕЬаи аге хса- 1 йоиагу сейя Тур|сайу, -43С о( сЬе соса| ргосе|и илам о( Е.
со(( ь хесгесесс |и|о сЬе реирйьгвс храсе. ТЬе рго- | се(их хесгесесс |исЫ|1е а иигиЬег о( ссеагассас!че еигугиеа ялсЬ ах а(Иа(сие рЬохрЬасаае, асЫ рЬохрЬасахе, (Сйахе, Ойахе, аиг| иис|еой|3е гиесаЬойпид еитуи|ея Весасье ргогеахех аге аЬо хесгесесс, сЬе сье о( а рго- ~ сеахе гсеЕ|с(еит Е, сой яга|и ог ЕЬе агЫ|сюи о( а ргосеахе |иЫЬИог сосЫай (р(еахе хее Ргососо| С 1, сойесЬег ъч((Ь, сЬе |0 гим Тг(яС( (рН 7 с ! Ьийег айег ЕЬе еЬос3| сгеасгиеис, гиау еиЬаисе |Ье у|е3|1 о( |и|асс МВР йляои рго- ! Се3ия 5ои|е (оге(Ви ргосе|гь аге иос сгаих(осасегс ей!с(еис(у |исо ЕЬе реир|аяи|с храсе аис|, ах а соихегсиеисе, аге иос (хо(асегс (и ЫВЬ у3еЫ Ьу сЬе ргосессигех гсехсг(Ьесс |и йь ргососо3. Весаихе ЕЬехе Ыяои ргосесих Веиегайу гегиа| и ассасЬесс со сЬе сусор(ахти |с иле и|Ьгаие, ЕЬеу сап иос Ье ей)с|еийу (хо(асесс Его и| сей х (ухесс Ьу юи|сайои. Еог СЬь геахои, |С ь а Воосс Ыеа Со г|е|еии|ие СЬе гс(хтг(Ьит(ои о( СЬе МВР йсхюи рго|е|и агиоий гс(йегеис сейи|аг Егасбоих (репр(ахт, сусор|аяи, ог и|егиЬгаие! (р1еахе хее Ргососо! 4!.
1Е аи ехргемегс ргосе|и 'ь Еоиисс амоссасегс чч(сЬ ЕЬе !ииег и|еи|Ьгаие, (ис1иссе 1% Тисои Х-| 00 |и ЬЬе се31 |чахЬ Ьийег оЕ 5|ер За Маоче. 1 ТЬе сье о( о|Ьег г|есегйеим сог хо|иЬ!Иаасюи ос Пыжи ргосе!их 'ь сйхсимегс |и Ргогосо| 4. Рго1осо! 7 Рипйса6оп о1 Нь6йпе-1ауес1 Рго1е~пь Ьу ! ттоЬ~! ~лед М2+ АЬюгр6оп СЬгогпа1одгарйу р огчньг|гл|нг гвлстз в|нгл т|снггч то А н|лмвкв ое твхнз|т|он мвтл|в апд |гапя6оп тета! сЬе1а|е соп|р1ехез, зисЬ гЬа| а рго|еш саггу)п8 ап ехрозед Нь-6 ге8$оп чч$11 Ь)пд со а геяп сЬаг8ед лч$|Ь д)ча!епс пк1|е1 юпз.
Соп|апппа6п8 рго|ешз сап Ъе гепючед чч!|Ь арргорпа|е |чазЬ!п8, апд |Ье рго|еш оЕ |п|егез| сап йеп Ье е!и|ед Ъу а зо1иЫе сотребп8 сЬе!а|ог. Весаизе Ее|ч патга1 рго|е)пз Ъ|п|1 лч)|Ь з!Вп)дсапг аЕВт6ез |о я|сЬ гпа|псез, Нь-6-1аЪе1е|1 рго|е|пз Вепега|ед Ъу гесогпЪ|пап| |есЬтс!иез сап Ье рипйе|$ зиЬз|ап6а11у $п а з)п81е з|ер Ьу тега1 сЬе!а|е аЕВпду сЬгота|о8гарЬу.
ТЬозе па|ига! ргосешз |Ьас |1о Ъ)пд со |Ьезе гпа|псез сап а!|поз| а!ччауз Ъе геточед ш а зесопд сЬгота|о8гарЬу з|ер. Мега! сЬе1а|е сЬготаго8гарЬу Ьаз Ъесогпе рори!аг Ъесаизе Ь ь Ьо|Ь ЫВИу еЕЕесг)че апд ге1а6че1у шзепя6че со ргорег ргосе!и Ео1йп8, юпк зггеп8|Ь, сЬао|горез, апд де|ег8епь $НосЬи1! е| а1. 1988). Веса|ье оЕ йе ЬЕВЬ ейк)епсу, ЫВЬ сарасду, сопсепггаг)п8 ро|чег, ап|1 зрее|1 оЕ |Ьь гесЬпи)ие, п зЬои1д Ье |ьед аз а Вгя (апд зоте|ипез оп)у) з|ер ш а ри66са6оп рго|осо1. То регЕогт тела! сЬе1а|е сЬгогпаго8гарЬу, йе рго|е)п оЕ )п|егез| п|из| Вгз| Ъе еп8$пеегед |о сопла)п а Н)з-6 зе|)иепсе )п ап ехрозед ап|1 ге1а6че1у Вех!Ые я|е, Еге|)иеп|1у Еоипд а| йе апппо ог сагЬоху! сегпппиз | Чап Кее|Ь е| а1.
1998). 1| сап Ье Ье1РЕи1 со р!асе опе ог глчо ц!ус|пе геядиез Ъег|чееп йе Н|з-6 зес)иепсе ап|1 йе гез| оЕ йе рго|еш. $)п)с)ие рго|еазе с)еача8е я|ез а1зо сап Ье шзег|ед |о а11о|ч гепюча! оЕ |Ье Нь-6 зег)иепсе аЕгег рипйса|юп $Р1еазе зее ТаЪ!е 15-3). Рго|еазез п|ау а1зо Ье изед |о деюгЬ рго|е)пз Его|п |Ье аЕЕ|п)гу |па|пх Ьу с1еачаве а| йе 1)п)сег/Н)з-6 |пзег|юп.
Соехргезяоп оЕ ап иптод!Елед рго|е)п оЕ |п|егея го8е|Ьег лч!|Ь а Нь-6- са88ед Ъ|пйп8 раг|пег сап а11о|ч $зо!аг!оп оЕ йе Ь)пагу соп|р1ех оп йе аЕВпду та|пх апд зе1ес6че е1и|юп оЕ йе па|и е лагос рго|е|п (Кохаза ап|1 Сд!п|ап 1995). ТЫз |пейод сап Ъе рагиси1аг1у еЕЕесг)че $Е йе глчо рго|е|пз сап Ъе д)ззос)агед Вепс!у якЬ йа| соп|ат)па6п8 ргосе)пз |Ьас Ъ|пд |о йе гпа|пх аге по| е1и|е|$ (р1еазе зее СЬар|ег 18, Рго|осо1з 2 апд 3).
Рипйса|юп сап Ье регЕогтед ип|1ег Ьой па||хе апд с!епа|ипп8 сопйпопз (е.8., |и Ъийегз соп|атш8 8 м игеа ог 6 м Виап|д)пе ЬудгосЫопде). Весаизе апу сЬе1а|ог сап )п|егЕеге лч)г!л гпе|а1 сЬе!а|е сЬгоп|а|о8гарЬу, Ъийегз |ьед Еог ех|гас|юп апд сЬготаго8гарЬу зЬои1д Ъе Егее оЕ ВЕЛТА ог ЕСТА. 5иЬпиПипо!аг сопсеп|габопз оЕ д)ГЬ)оГЬге)ло1 |пау по| ш|егЕеге з$8п!Всапг!у.
Хечег|Ье!езз, и )з ргеЕегаЫе |о изе ЬиЕЕегз сопла)п)п8 1 — 5 п|м оЕ а пюпойю1 якЬ аз $$-тегсаргоейапо! ог $$-тегсаргоасег)с ас|й ТЬе саг8ег рго|е)п ь е!и|ед Ъу а сЬе1а|ог зисЬ аз ип|дахо1е ог ЕЕ|ТА. Ет)дахо1е ь йе тоге зе1ес|п е е1иапс апд зЬои1д Ъе изед ччЬепечег роя|Ые.
ЕЕЕ!с!епг е)и|юп Ез |ляла11у асЫечед лч$|Ь 50-$00 гпм ип|дахо1е а| РН 7 — 8. ТЬе 1о|чез| ейесг)че сопсепсга- $5.44 Ргогосо! 7: Риг((ссас(оп оЕН(кг(с(1пе-саееег) Ргогетк Ьу 1тто(с!!слег( Л712" АЬкогрйоп СЬготасоегарйу 75.45 С!оп кЬ0010 Ье екгаЫ(кЬес( ик!па а!1пеаг угайепг оЕ 10 — 150 гпМ !сп(с(а201е. ЕРТА 1к споге ейес11хе, Ьпс Ь гпау япр )х(12' Егот йе Ь!ТА-ааагоке. 1п йск саке, йе Ь7!гс пшкс сЬеп Ье гетоуес( Еог псапу арр1капопк, е!йег Ъу йа1уяк ог Ъу а кесопс( сЬготасоагарЬ(с ксер.
ТЬе Ь7!2+ геяп сап Ье еаы1у гецепегасес) апс( гепкес) псапу сппек (р1еаке кее сЬе аг(йс!опа! ргососо1 ас йе епс( оЕ сЬ(к ргососо1). Весаике оЕ сь 1агае Ь!пйпВ сараспу, ак тпсЬ ак 20 пса оЕ гесопсЬ!пап! ргосе!и тау Ье риНВес1 оп а 25-т! со!игпп, ТЬе Ео!1оичпц ргососо1 гк ас(ар!ее( Егогп гпесЬос(к сопсг!Ьпсес1 Ъу Е!1(ос Кока (с)п!хегк!су оЕ Техак 5опсЬсеексегп Мейса1 Сепсег, Ра!!ак) апс( Тгп-СЬ!па Мепа 1п %с(с Топ!ск' цгоир ас Со!0 5рппц НагЪог ЬаЪогасогу. МАТЕК1АЕЬ СА!)Т1ОН: Р!еаке кее Аррепс!1х 72 сог арргорпасе Ьапс!!!па о( псасейа(к таг1сес) илсЬ <1>. ВоЕЕег5 апд йо1011оп5 Р!еаке кее Аррепйх 7 Еог сопсропепск о( к!ос!с ко!ис!опк, Ьийегк, апс) геаеепск.
О!!иге к!ос!с ко1игюпк со йе арргорпаге сопсепсгаоопк. Втг((пе Ьийег (рН 7.8) 20 псМ юйшп рЬоарЬаге 500 тМ ЬСаС1 !т(с(аго(е еlийоп Ьийег (рН 6.0) 20 тМ юйипс рЬокрЬаге 500 тм угаС1 Сгеасе а аепеа оу Еош е1ипоп Ьийегк сопсасп!па спсЫаго!е ас сопсепсгасюпк о(10 псм, 50 псм, 100 псм, апс! 150 гпм Ьу асЫЫО сЬе арргорпасе атоипс о( 3 м сгпЫаао!е со сеакЬ Ьийег (рН 6.0).
Тгйоп Х-700 170% и)и) И(акЬ Ьийег (рН 6.0) 20 гпМ юйит рЬоарЬаее 500 спМ Ь)аС! Епкугпек апг! ВцЕЕег5 РНаке Н тдlт)) (ухойте 7(Наке (7 тфт)) Се!5 Ро!уасгу1атсс)е ее) (707) сооса101пе 5Р5 <! > рог ргерагайоп о( Ю5-ро1уасгу!агпЫе ае1к икес) Ы сЬе керагапоп оу ргосеша, р)еаке кее Аррепйх 8. Сеп(гсЕще5 апс! Ко1огь 5огиай 55-34 го!юг ог ес)и(иа)епг прес!а! Ег1огргпеп$ СЬготагодгарйу со)итп факк ог роlургору(епе) 15.46 СЬарсег 15: Рхргезззоп о/ С1опед Сепез т ЕзсЬегкЬза со1з А/зо'-сЬагВед сЬготагоВгарЬу гез!л (е.В., РгоВопд, /пчзггоВеп; Нззугар, РЬагтас!а; Нзз.Взпд /!ез!и, НочаВеп; А/ТА-/з//гз-аВагозе, Ослеп) Снпепс1у, сЬе тнзс соттоп теса! сЬесасе а16пзсу знррогс Ь пап!оспасесасе (зззТА)-Сзз!зз-а8агозе, ачазсаЫе Егопз йе сарр!сея дезспЬед аЬоче. ОсЬег пзаспсез зчссЬ ййегепс ргнрегдез аге аЬо ачаз1аЫе.
А ргорпесагу Созз сЬе1асе (Та!оп) Ь за!д со Ьзпд Н!з-б-са88ед ргосезпз зчзй ЬзЕЬег а/6пзсу, апд зопзезчЬас Ь!8Ьег за!асс!ч!су, Ъш Ь саппос Ьс сопчеп!епс1у ге8епсгасед т йе 1аЬогасогу апд Ь сопзеВненс!у пшсЬ зпоге ехрепяче. /сос/апВ р/ас/огт 'с/ес(ог5 апг! Вас(егса! Яга1п5 Е. со1з се//з ехргезгдпд а ро/уЬззгзс/зпе-СаВВед ргосет (депегагед зп Ргососо/ 1, 2, 3, ог 4) МЕТНОЕг Ргерага(1оп оЕ 4!се )з41г+ АЕЕ1п1!у Со!опсп 1. Сепду зпчегс йе Ьосс1е оЕ ЬПг"-сЬаг8ед сЬгошасо8гарЬу геяп со пих сЬе з1иггу, апд сгапзЕег 2 пз1 со а ипаП ро!ургору1епе ог 81азз со1шпп. АПосч йе геяп со рас!с ипдег Вгач!су Яозч.
2. САзазЬ сЬе геяп зч!1Ь 3 со1игпп чо1шпез оЕ зсеп!е Н О. Опе со!шип чо1шпе зз еВшча1епс со сЬе чо1шпе оЕ йе зеп1ед Ьед ос геяп. 3. ЕссиЬПЪгаСе йе геяп зч!СЬ 3 со1шпп чо!шпез оЕЬзпсПп8 ЪиЕЕег (рН 7.8). ТЬе со1шпп !з позч геаду Еог изе зп 5сер 9. Ргерага6оп оЕ СеП Ех4гасЕ 4.
Кезизрепд йе сеП реПес (е.8., Егопз Ргососо! 1, 5сер 17) ш 4 гп! оЕ ЬзпсПп8 Ьи((ег (рН 7.8) рег 100 гп! оЕ сеП си1сиге. 5. АсЫ 1узогупзе со а Ппа1 сопсепсгадоп оЕ 1 пз8/ш1 апс1 !псиЪасе йе сеП зизрепз!оп оп ке Еог 30 пипшез.
5ечега! ргососоЬ нзе юшсадоп ог а ргепсЬ ргея со 1узе се1Ь Ьезоге аебпау рнп6садон о! сЬе ро!уЬ!зссд!пе-са8цед сиосет. ТЬе нзе оЕ 1узогуте, аз з1езспЪед Ьеге, ы зозпезчЬас пюге гергоднсзЫе апд ачойз сЬе сасас1уяшс 1узь сЬас сап ге1еазе тепзЬгапе ргосезпз апд ойег пю1есо!ез сЬас саше а88ге8асюп о! сЬе ро!усз!зс!д!пе-са88ед ртсет А 1МРОССТАЫТ Ргозеазе !пЫЬзсогз пзау Ье аддед, Ьнз до пог адд ЕОТА ог ойег сЬе)агогз, зчЫсЬ чд0 гезпоче йе Ы!з+ Егот йе асбпау геяп, дезсгоу!п8 1сз аЬ!!!Су со Ыпсс Ььдйпе. 6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
