Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 180
Текст из файла (страница 180)
1977). 1п ч|чо, сЬеае ргосеша 6лпсбоп аа шЬ~Ь|сота оС ргосешз Ье!опцш8 со йе рапсгеа6с КЫаае аиретуатйу, посаЫу ап8)о8епш, а Ыоой-чеаае1-шйис)п8 апй еояпорЬу1-йепчей пеигосохш. ТЬе а|6пП|еа от сЬеае ргосеш 1пЛ)Ь~согк !ог сЬе)г саг8еь аге ап|оп8 |Ье ЫВЬеас оп гесо те! ( 1 — 70 1М) (Еее ес а1. 1989; !ог геч)елч, р1еаае атее Еее апй НаПее 1993).
ТЬе атсЬесура1 КЫаае шЫЬ|сог ь а Ьогае|Ьое-аЬарей пю1еси!е, сопсашш8 аечеп а1сегпасш8 !еис|пе-псЬ гереаса, 28 апй 29 геа)йиеа )п !ел8сЬ. ТЬе шЫЬ|сог аЬо сопсашв а 1аг8е пшпЬет о! суасешу! геяйиеа, аП ш |Ье гейисей сопи. ТЬе шсег!асе Ьеситееп пЬопис!саке апй йе ийиЬПог ь ипиаиаПу !аг8е апй епсоп|раяеа гея|1иеа 1осасей ш иш16Р1е йотпаша о! Ьой ргосеша. Ноитечег, |Ье епег8ебсаПу ипрогсапс сопсасса ЫчоЫе оп1у сЬе сагЬоху-сеппша) ае8тепс о! сЬе |пЬтЬКог апй сЬе сага!уск сепсег от пЬопис!еаае, шс1исПп8 а сгис)а! 1уяпе геяйие (КоЬе апй )3еьепЬоуег 1993, 1995, 1996; Рара8еог8)ои ес а1. 1997; сот геч)ечт, р!еаае аее НоЬ|ееп8е 1994).
Ргосе|п шЬ|Ь|сога о! КХаае йепчей Тгот аечега1 аоигсеа аге ао1й Ьу тпапу тапилассигега ипйетчагюгь сгайе патпек (е.8., КЫАяп, Рготпе8а; Рпте 1пЫЬ)сот, 5 Ргипе — |3 Ргипе). А!сЬоиВЛ йеае читу ш йе)г гецн)гетепс !от м1йуйгу! геа8епь, аП о! йети ВЬР!ау а Ъгоай арессгитп о! шЬ~Ьиогу ас6 п6еа а8а)пас К!4ааеа, Ьис йо пос |пЫЬП о|Ьег пис1еааеа ог ро!утпегааеа ог ш ч)сто стана)асюп туалета )е.8., р1еаае аее МигрЬу ет а1. 1995).
Весаые йе шЬ)Ысога йо пос !опп соча!епс сотр1ехеа лч)сЬ Крале, йеу саппот Ье чьей ш сЬе ргеаепсе о! йепашгапь тшсЬ аа 5Р5 апй 8иапЫше, лчЫсЛ аге сопипоп1у иаей со 1уае таттаПап сеП| ш сЬе ш|6а1 аса8еа о! ехсгас6оп о! К)4А. Но|чечег, сЬе |пЛ|Ь||ога сап Ье шс!ийе|1 ас аП аса8еа |Ьлпп8 анЬ- лет)иенс рип6са6оп о! К!4А, !пЬлЫсога гпгьс Ье гер1етаЛей аечега! сипел йипп8 сЬе рип6са6оп ргосейиге, япсе йеу аге геточей Ьу ехсгас6оп чйсЬ РЬепо1.
784 СЬаргет 7: Ехстасс(оп, Рит()гсас)оп, апг(Апа!уз(з оу тйИА7тот Еи)сатуос(с Се(!з Еу!ЕТНТЕРУВОСАВВОХАТЕ РсесЬу!ругосагЪопасе (РЕРС) )з изес1 сп пю1еси!аг с)ошпй со шас6часе стасе аспоппсз о(КХазез йас псау сопсапппасе зо1исюпз, 8!аяъчаге, ап6 р1аз6съчаге сЬас аге со Ье пзе6 (ог сЬе ргерагасюп о(ппс1еаг КХА ог псКХА (Репгпап ес а1. 1971; ъътййашзоп ес а1. 1971). РЕРС ь а !68Иу геасбче айсу!асш8 айепс сЬас с1езсгоуз сЬе епхугпассс ас6чйу о! КХазе сЬсейу Ьу есЬоху(огшу!асюп о! ЬсзсЫу1 Пгоирз (р!еазе зее Р!Пиге 7-7). С1аззъчаге апс1 р!аз6съчаге зЬоп!д Ье ПЕЙ чбй а зо1и6оп о! 0.19о РЕРС сп Н,О апс1 айоъчес$ со агапа сот 1 Ьоиг ас 37 С ог очегп(8Ьс ас гоогп сегпрегаспге. Кгпзе йе пепи зечега! сппез ълй РЕРС-сгеасе6 Н,О сЬеп аисос!аче йесп (ог 15 пиписез ас 15 ря (1.05 )с8!сш') оп Пс)п!6 сус!е. 1п ас(иеоъсз зо1исюп, РЕРС Ьуъ)го1ухез гарЫ!у со СО апс! ейапо1, ълсЬ а Ьа1ВЬЕе ш РЬозрЬасе Ьи((ег о! -20 псшпсез ас РН 6.0 апс$10 ппписез ас РН 7.0.
ТЫз Ьудго!уз!з ь Пгеас1у ассе1егасес! Ьу ТгЬ апд осЬег агпшез, ъчЬссЬ сЬепые!чез Ьесоспе сопяппес$ !и сЬе ргосея. РЕРС сЬегегоге саппос Ъе гьед со сгеас зо!псюпз сЬас сопсасп сЬезе Ъи(сегз. 5аспр)ез о! РЕРС сЬас аге сгее о! пис1еорЬПез (е.8., Н,О апд есЬапоП аге рег(есс!у зсаЫе, Ьш ечеп япай апюппь о! сЬезе зо!чепь сап сагье согпр1есе сопчегяоп ог" РЕРС со сйейу!сагЬопасе. Рог сЬсз геазоп, РЕРС зЬоп16 Ье ргосессе6 а8ашзс гпо!а!иге. 5соге и побег япай айс)посз (и Игу сопей6опз апс$ аЬчауз айоъч сЬе Ьосйе со геасЬ ашЬ!епс сеспрегасиге Ьесоге орешп8 сс. АЫюиПЬ Н,О рипйес$ сЬгоийЬ ъчей-ша(псашес1, гпоъ)егп гечегзе-ояпояз зуяепь !з (гее ос КХазе (Ниапй ес а!.
1995), роог1у псашсаспес1 рипйса6оп зузсепь спау Ьесопсе сопсапппасес$ Ьу ппсгоЬса! ПгоъчсЬ. ТЬсз ясиапоп сопппоп! у осспгз ш 1аг8е сепсга!сае6 зузсепь чбсЬ гпапу спесегз ог р!Рспй апс$ зсога8е чаь сп ъчЬссЬ Н,О сап зсайпасе. 1п зисЬ сазез, сс шау Ъе песеяагу со Пепегасе РЕРС-сгеасе6 Н,О Ъу сгеасгпепс ъч!сЬ 0.196 РЕРС (ог 1 Ьоиг ас 37'С ап6 аисос1ачш8 уог 15 пипшез ас 15 ря (1.05 )сй)сш') оп Пс)и!с1 сус!е. ОсЬег Шез оЕ ОЕРС 1п аъЫПюп со геассш8 чбсЬ Ыз6йпе гез!диез ш ргосешз, РЕРС сап (огш айсай-1аЬПе асЫпссз ъчПЬ йе ппЫатю!е Нпй Х7 о! пира(ге6 риппез, гезп!6п8 ш с!еачайе о( йе 81усоятйс Ьопс( апъ$8епегабоп о! ап аПса1с-1аЬс! е аЬаяс ясе ((ог геч!еъч, р! еазе зее ЕЬгепЬег8 ес а1.
1976). Весаые о( пз ЬсПЬ геасбчйу ап6 зрессПсйу, РЕРС Ьаз Ьееп ъьес1 аз а сЬеписа( ргоЬе о( зесопбагу Япкгше ш РХА ап6 КХА (е.8., р1еазе зее Реаспе апс1 СПЬегс 1980; Негг 1985). Рпрасгед а6еп!ие гез!Пиеа аге ягоп81у геас6че (Ееопагс( ес а1. 1970, 1971) аз аге Ппашпе гез!Ппез ш Х-РХА (Негг 1985; )оЬппоп апд йкЬ 1985). А сйпппп6оп ш йе геас6ч!су о( риппез ълсЬ РЕРС сап сЬегесоге Ъе пзе6 со гпеазпге Ьспейп8 Ьесъчееп 7.-РХА апд зресгйс ргоСешз (Кпп1се1 ап6 Хогс1Ьепп 1986). Рго)7$еясз сп Е)61пВ РЕРС йепюча! ос РЕРС Ьу сЬеппа! Пейгас1ас)оп йепегасез япа1! ашоипь отесЬапо! апд СО, ъчЬкЬ сап шсгеазе йе юшс зсгеп8й ап6 1оъчег сЬе РН о! ипЬийеге6 зо1шюиз.
РЕРС сап сагЪохушейу1асе апра!ге6 абеи(пе гезЫпез ш КХА. шйХАз сЬас Ьаче Ьееп ехрозеъ$ со РЕРС аге сгапз1асед чпй гебпсес) е(йс(епсу ш сп чпго ргосеш-зупсЬеялп8 зузсегпз (ЕЬгепЬег8 ес а1. 1976). Ноъчечег, сЬе аЬ)йсу о( РЕРС-сгеасед КХА со гогш РХА-КХА ог йХА-КХА ЬуЬгЫз 6 пос зегюиз!у агуессе6 ип!ея а 1аг8е ггасс(оп о( сЬе раппе гез!Пиеа Ьаче Ьееп гпо6!Пей О !! / С вЂ” СНа — СНз С Стъа СНз !! О Р)С$)КЕ 7-7 5!тес!иге о! Р1еСЬ 1 госагЬопаге 7 86 СЬартег 7: Ехтгасгтоп, Ригт)>саттон, аи>$ Аиа1уяя о) тК)чЕА )го>и Еи)сагуо6с Се11я $9$$)СЕЕАБЕ 61 ° Хис1еаяе 51 ы а Ьеас-ясаЫе ехсгасе11и1аг епхутпе (М, = 29,030) яесгесет! Егош йе Еттпцття Аярегц>1(ия огугае.
ТЬе шасше епкуше Ь ц!усояу1асе6 ап6 сопсатпя пчо йяиИЫе ЬгЫцея апд а с1сьсег оЕ йгее 7пт' юпя сЬас Ппе йе Ьаяе оЕ сЬе ас6че с!ей апд аге тес)и(ге6 Еог епгушас)с асс(ч(су. ВосЬ сЬе анино асЫ яес)пенсе ап>$ йе сЬгее-йшепяопа1 ясгисшге оЕ пис1еаяе 51 аге )сполчп (1и>ашасяи ес а1. 1991; 5ис)с ес а!. 1993), ап6 йе цепс епсойпц пис1еаяе 51 (иисО) Ьая Ьееп с!опе6 (Ьее ес а1.
1995). ° $)пс$ег сонй6опя оЕ ЫцЬ юшс ясгепцсЬ (0.1 — 0.4 м ХаС1) ап6 1отч РН (РН 4.2) апд тп сЬе ргеяепсе оЕ 1 шм Хвл', пис(саяе 5 $ децгабея я(пц1е-ясгапйед РХА ап>$ КХА чбсЬ ЫВЬ ярес(6с(су (Авдо 1966). ТЬе сЫеЕ ргобисся оЕ йе геас6оп аге У нтопопис1еосЫея, и>Ь(сЬ аге цепегасе6 Ьу сЬе свисс>сед ас6оп оЕ ехо- ап>$ епт)опис1ео!убс ас6лпея (ЯияЬЫо ап>$ Апт(о 1982).
Мо>1егасе аптоипь оЕ пис!саяе 51 тл11 с1еаче ас япц1е-астап>$ес! пк1ся лп 6ир!ех РХА (Веаг>1 ес а1. $973; Маг6п-Вегсгаш $981) Ъис ч61! пос гесоцв(ке япц1е-Ьаяе-ра(г пияпассЬея (Я!Ьег ап6 1оеЬ 1981). Хис! еаяе 5 $ сап с1еаче я(пц!е-ясгапбе>$ РХА ипйег сопйбопя сЬас лчои!6 Ье еп6ге1у ипассерсаЫе со тпапу епкутпея, Еог ехашр)е, $098 ЕоппатпЫе, 25 тпм ц!уоха1, 3098 яи(Еох(6е (РМ5О), авс1 3098 ЕоппашЫе (Саяе ап>$ Ва1сег 1975; Нинон ап>$ Же>шит $975). ° Хис! еаяе 51 ь (вЬ(Ь!се6 Ьу РО;,', 5' пЬопис!еос(дея ап>$ >$еохупЬопис!ео6>)ея, пис1еояЫе спрЬоярЬасея, с(стасе, апт) ЕРТА.
Нолчечег, П Ь ясаЫе тп 1отч сопсепсга6опя оЕ 6епасигапся висЬ ая 5Р5 ог шеа (9>оцс 1973). Рог Ьлгйег ш(оппа6оп, р!еаяе яее ЯпяЬЫо ап>$ НаЬи)са ($986), Ргаяег апд Е.олч (1993), ап6 С(се апс( 5Ьап1саг(1995). ЕХО(ЧЕ)СЕЕАйЕ 9(!1 Вхопис!еаяе С>П (СЬаяе апс$ К(сЬагбяоп 1974а,Ь; СЬаяе апс$ На!ел $981) Ь а япц1е-астана-ярес>6с РХаяе сЬас Ьубго1укея 6епасиге6 РХА, я(пц!е-ясгапбе6 гец(опя ехсепйпц Егош йе сепптпл оЕ 6ир!ех РХА, ап6 6(яр1асе6 я(пц1е-я!ганс)е6 гец(опя. ТЬе епкуше а!яо ехсьея рупппйпе дипегя ш ч(сто Етош (Л~-!ггайасес$, н(с)се6 с1оиЫе-ясгапде6 РХА. Ехопис1еаяе Ч$$ йцеяя Ьо>Ь 5' апс1 3' епбя оЕ я(пц!е-ясгавде6 РХА ш а ргосеялче ЕаяЬюп, ечепсиа1- 1у у(е1йпц яЬогс, асЫ-яо!иЫе оццопис1еосЫея 2-25 вис1еосЫея ш 1епцсЬ (СЬаяе ап>1 К(сЬагбяоп $974Ь). Весатье сЬе епхутпе ге1еаяея о1>цовис!еосЫея гасЬег сЬап шопопис!еосЫея, 6 саппос Ье ияед со ргобисе Ыивт-епт)ед шо1еси1ея оЕ доиЫе-ятгавйес) РХА (СЬапцая ав6 'члти $975).
Вхопос!саяе л>$$ сопяяся о( пчо яиЬишь (М, = 10 500 ап6 54 000) епсо>$ес$ Ьу сЬе хяеА ап>$ хяеВ цепея оЕ ВясЬег>с)иа соВ (9>а1ея ес а!. $982) апс$ пе(сЬег гес!шгея пот ь шЫЬ(се6 Ьу йча1епс сасюпя. ТЬе епхутпе Ьая Ьееп ияед Еог яечега1 ригрояея ш ню1еси1аг с1опшц: ° То е(>т тасе рптегя)тот сотр(е>е>Е РСКя (11 ес а1. ! 99 $ ). ТЬ(я ргорегсу сап Ье ехсгеше1у ияе6л! и>Ьеп саггушц оис пш1сьсер РСКя шчо)чшц яесрлеп6а! вайс(оп оЕ с$(ЕЕегепс яеь оЕ оццопис)еос(6е рпшегя.
А)сегпабче шесЬот(я оЕ гешоч)пц ргппегя !ей очег Егош ргечють ашр1$6са6оп ясеря ге1у оп РЬуяса1 яерагасюп, тчЬ(сЬ сап Ье сшвЬегяоше ъчЬеп >$еа1шц ллсЬ тпапу яаптр1ея, ог >Ии6оп, тп тчЬ!сЬ а яша(! а!1>)иос оЕ опе РСК Ь сгапяуегге>$ со йе пехс. ТЬ>я 1апег тпейос( лчог)ся лче11 пюяс оЕ йе шпе, Ьис П Ь пос гесошшеттбед >Е аЬяо!исе1у с1еап яерага6оп Ь тес)и(ге6 Ьепчееп опе РСК апс( сЬе вехс.
° Ая а яиЬя6гиге Еаг иис1еаяе 51 аи>$ тииц Ьеаи иис!еаяе ти аиа)уя(я о)' сце я>гас>иге о) РХА-ИХА ЬуЬп>Ея (Вег1с апд 5Ьагр 1978; 5Ьагр ес а1. 1980). Ртцея6оп оЕ йе ЬуЪгЫ ллсЬ ехопис!еаяе 9>П у!е16я а РХА ясгап6 лчЬояе 1епцсЬ тя ет)шча1епс со сЬе янп ос йе ехопя ап>1 шсгопя сотпр1 етпепсагу со йе ргоЬе. Ву сон>галс, йцея6оп лч(сЬ пис1еаяе 51 ог ттшпц Ьеав вис!саяе цепегасея Егацшепся оЕ РХА сЬас аге ес(шча1епс тп 1епцсЬ со сЬе шйчЫиа! ехопя. Ехопттс1еаяе 9>П Ьая Ьееп сье6 со шяоье ргоЫетпя тп саяея лчЬеге йцея6оп оЕ шКХА-РХА ЬуЬпй у(е16я апоша)оия Ьапй ш сопчепбопа! пис1еаяе 51 апа)уя(я (СЬаяаацпе ап>$5сЬлчагтх $992).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
