Диссертация (1174301), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В качестве критерия положительной реакции с р53принимают, как правило, яркое окрашивание 10% и более ядер. При этомположительная реакция с р53 отмечалась в 11-16,7% НР [133, 159, 190], 20-37,5%SSA/P [133, 159, 190], 13,7-51,7% АТ [135, 146, 195], 25-64,7% ATV [135, 146,190, 195], 93,4% TSA [133]. В ряде исследований частота встречаемостиположительной реакции среди «аденом» составила 18-36%, однако отсутствиеданных о морфологическом типе исследованных образований затрудняет анализполученных результатов [97, 149, 156, 171]. Ряд авторов использует другиекритерии положительной реакции. Pap Z. с соавторами приняли окрашивание 10%клеток любой интенсивности, что значительно повысило долю положительноокрашенных образований (63% НР и 100% SSA/P, TSA, АТ, ATV).
Fu B. ссоавторами определили положительную реакцию как яркое окрашивание 30% иболее ядер и выявили ее в 25% TSA [66], Tsai J. H. с соавторами в своемисследовании выявили положительную реакцию в 16% TSA, однако приняли вкачестве критерия яркое окрашивание 50% и более ядер [182]. В одном изизученных нами исследований Nussrat F. L. с соавторами для оценки экспрессиир53 в классических аденомах использовали средний процент р53-позитивных34клеток (он составил 26,2% для АТ, 26,9% для ATV), однако авторы включили вподсчет окраску любой интенсивности [136].
В тоже время ряд авторов отмечают,что слабое ядерное окрашивание часто наблюдается в пролиферативномкомпартменте всех полипов и интактной слизистой оболочки [133, 143].Rubio C. A. с соавторами в своей работе высказывают предположение, что дляоценки процессов канцерогенеза в аденомах важно учитывать не только процентр53-позитивных ядер, но и количество очагов гиперэкспрессии р53 [156].Ngo N.-T. с соавторами в своем исследовании, помимо частоты выявленияположительной реакции, оценивают характер распределения окрашенных ядер вНР, SSA/P и TSA [133].
В большинстве НР и SSA/P р53-позитивные клеткирасполагались в нижней трети крипт, в TSA – диффузно на всем протяжениикрипт. Авторы отмечают, что TSA достоверно отличались от НР и SSA/P, а НР иSSA/P не отличались друг от друга ни по выраженности экспрессии р53, ни похарактеру распределения [133]. Pap Z. с соавторами в своем исследовании такжеоценивали распределение р53-позитивных клеток: во всех НР и SSA/P онирасполагались в нижней половине крипт, в TSA – диффузно, в АТ и ATVотмечалась более выраженная экспрессия в верхней трети крипт [143]. Нами былообнаружено лишь одно исследование, в котором было проведено сравнениехарактера экспрессии р53 во всех группах предопухолевых образований толстойкишки [143], однако включение в исследование всего 7 SSA/P и 3 TSAзначительно снижает репрезентативность представленной выборки.1.2.2.
Экспрессия bcl-2.Bcl-2 – белок из семейства BCL2, является протоонкогеном и антиапоптотическим фактором. Было показано, что bcl-2 контролирует выживаемость[49] и увеличивает продолжительность жизни клеток [173]. В интактных тканяхbcl-2 экспрессируется в тех случаях, когда апоптоз участвует в создании сложныхструктур или обеспечивает обновление клеток [127]. Гиперэкспрессия гена bcl-2наблюдается в клетках многих опухолей (В-крупноклеточная и фолликулярныелимфомы [17, 176], нефробластома [145], рак молочной железы [85], рак35предстательной железы [102], немелкоклеточный рак легкого [204], меланома[42]), в том числе колоректальных карцином [81, 144, 162], обеспечивая быстрыйрост опухоли и резистентность к противоопухолевой терапии [15].
Основнымимеханизмами, обеспечивающими гиперэкспрессию bcl-2 в опухоли являютсятранслокация t(14;18), приводящая к слиянию гена bcl-2 и промотора геновтяжелыхцепейиммуноглобулинов,перестройкаструктурыгенаигипометилирование [49]. Не меньшее значение играют и межмолекулярныевзаимодействия. Одним из важнейших модуляторов экспрессии bcl-2 вколоректальном раке является белок р53 [82]. Наличие реципрокных отношениймежду экспрессией bcl-2 и гиперэкспрессией р53 отмечались в ряде исследований[98, 144, 164], однако механизмы этого взаимодействия оставались неясными.Nakazawa K.
с соавторами выявили, что в колоректальном раке р53 модулируетактивность bcl-2 на пост-транскиптационном уровне: стабилизация р53 приповреждении ДНК индуцирует процессинг первичной миРНК в предшественникмиРНК-1915, что приводит к снижению экспрессии bcl-2 и запуску апоптоза вповрежденной клетке [132].В то же время, Lindner A. U. с соавторами в своей работе подчеркивают, чтосложность взаимодействий анти-апоптотических (bcl-2, MCL1, BCL(X)L), проапоптотических (BAK, BAX) и BH3- (BID, BIM, PUMA) компонентов семействабелков BCL2 делает маловероятной возможность, что мутация или нарушениерегуляции одного из связанных с апоптозом белков является достаточной дляописания и оценки процесса апоптоза в опухоли [119].В большинстве исследований за положительную экспрессию принятоокрашивание 5% и более клеток [22, 81, 144, 164], при этом Baretton G.
B. ссоавторами отмечают, что во всех bcl-2 положительных аденомах было окрашеноболее 30% клеток [22]. Shanmugam C. с соавторами применяют более сложнуюсистемуоценки,основаннуюсложениипроизведенийинтенсивностиокрашивания (шкала от 0 до 4 баллов) и доли окрашенных клеток [162].Большинство авторов отмечают, что в интактной слизистой оболочке толстой36кишки отмечается слабая экспрессия bcl-2 в базальных отделах крипт, чтозащищает стволовые клетки от апоптоза [35, 64, 98, 162].Выявление достоверно более высокой экспрессии bcl-2 в аденомах посравнению с интактной слизистой оболочкой в 78-100% [22, 35, 64, 98, 164] (поданным Flohil C. C. с соавторами [64] в 14/15 АТ и 16/19 ATV) позволяет авторампредположить, что нарушение экспрессии bcl-2 является одним из раннихсобытий в канцерогенезе.
При изучении ткани аденом, прилежащей каденокарциномам,ShanmugamC.ссоавторамиотмечаютповышеннуюэкспрессию bcl-2 в 49% случаев [162]. В сочетании с незначительно повышенной[35] или не повышенной экспрессией bcl-2 в 80-100% НР [64, 71, 98], повышениеэкспрессии bcl-2 может быть причиной превращения гиперпластическогоэпителия в аденоматозный [110]. Bronner M. P.
с соавторами отмечают, что вовсех исследованных НР (n=5) экспрессия bcl-2 была более выраженная, чем вприлежащей интактной слизистой оболочке, но менее выраженная, чем ваденомах и аденокарциномах [35]. Также авторы отмечают более гетерогенныйхарактер реакции в НР по сравнению с аденомами и аденокарциномами.Данные об экспрессии bcl-2 в зубчатых образованиях в литературынемногочисленны и отрывочны. В изученных нами работах экспрессия bcl-2отмечается в 7-20% зубчатых аденом [43, 95, 99] (описанные исследованиявыполнены до или без выделения SSA/P и TSA в отдельные классификационныеединицы).Нами не обнаружено ни одной работы, посвященной сравнению уровняэкспрессии bcl-2 в группах, сформированных в соответствии с современнойклассификацией.1.2.3. Экспрессия бета-катенина.Бета-катенин является молекулой адгезии и транскриптационным фактором[189].
Мембранная экспрессия бета-катенина в интактной слизистой оболочкетолстой кишки связана с участием бета-катенина в формировании межклеточныхконтактов[134].Помимоадгезивнойфункции,бета-катенинявляется37транскриптационным фактором, отвечает за поддержание популяции стволовыхклеток и тканевого гомеостаза, ограничивает дифференцировку клеток и играетодну из ключевых ролей в канцерогенезе по пути аденома-карцинома, являясьцентральным компонентом канонического Wnt-сигнального пути [34]. Вотсутствии Wnt (сигнальный путь дезактивирован) цитоплазматический белокбета-катенинпостоянноразрушаетсяподвоздействиемAxin-комплекса,состоящего из белка Axin, продукта трансляции гена-супрессора опухоли APC,казеин-киназы 1 (СК1) и гликоген синтазы киназы 3 (GSK3). Работа СК1 и GSK3заключается в фосфорилировании терминальных отделов бета-катенина, что черезряд реакций приводит к разрушению бета-катенина в протеосомах и препятствуетпроникновению бета-катенина в ядро клетки [199].
Гены, регулируемыепосредством Wnt-сигнального пути, остаются репрессированными белкамисемейства TCF/LEF. При связывании Wnt с трансмембранным рецептором и корецептором LRP5/6 приводит к фосфорилированию LRP5/6 и связыванию Axin сэтимкомплексом,фосфорилированиячтоприводитбета-катенинакипрекращениюегоAxin-опосредованногостабилизации.Бета-катенинаккумулируется в ядре, где образует комплекс с белками семейства TCF/LEF иприводит к активации экспрессии генов, регулируемых Wnt-сигнальным путем[124].Традиционно считается, что в CLA и колоректальном раке ядернаяаккумуляция бета-катенина является надежным маркером инактивирующеймутации в гене APC или активирующей мутации в CTNNB1 (гене бета-катенина).Важно отметить, что ядерное накопление бета-катенина может происходить и вотсутствии мутаций в генах APC/CTNNB1 и отражать генерализованноеповышение активности Wnt-сигнального пути [25] или быть следствием мутациив гене-супрессоре опухолевого роста MCC [70].
Кроме того, выявленозначительноеколичествобелков,обладающихантагонистическими/илимодулирующим действием по отношению как к Wnt-сигнальному пути [124].38В большинстве исследований положительной реакцией принято считатьналичие любого количества окрашенных ядер [67, 94, 159]. Однако Wu J. M. ссоавторами [194] полагают, что наличие единичных позитивных ядер в базальныхотделах крипт связано с существованием пула незрелых клеток-предшественниц,поэтому оценивали наличие ядерного окрашивание за пределами базальныхотделов крипт.Несмотря на признанную роль ядерной аккумуляции бета-катенина впроцессе трансформации аденома-карцинома, данные о ядерной экспрессии бетакатенина в CLA довольно противоречивы и составляют 19,6-100% [67, 94, 154,196, 198].
Опубликованные результаты в отношении активации Wnt-сигнальногопути в зубчатых образованиях также весьма противоречивы. Ряд авторовотмечают ядерное накопление бета-катенина в 50% НР [159], 12,5%-67% SSA/P[154, 159, 194, 196], 17%-41,6% TSA [66, 94, 196]. Другими авторами отмечаетсяотсутствие ядерной экспрессии бета-катенина в НР [67, 69, 94, 194, 196], SSA/P[67, 69, 94], TSA [67]. В своих исследованиях Wu J. M. с соавторами [194] иYachida S.
с соавторами [196] отмечают достоверно более высокий уровеньядерной экспрессии в SSA/P по сравнению с НР, другими авторами в своихисследованиях достоверной разницы не выявлено [67, 69, 94, 159]. Работы,посвященные сравнению CLA или TSA с другими группами предопухолевыхобразований, крайне немногочисленны – отмечается более высокий уровеньядерной экспрессии в CLA по сравнению с зубчатыми образованиями [67, 94, 154,196] и в TSA по сравнению с НР [94, 196]; при сравнении TSA с SSA/P Joo M. ссоавторами [94] отметили более высокий уровень экспрессии в TSA, другимиавторами достоверных различий выявлено не было [67, 196]Li L.
с соавторами оценивали ядерную экспрессию бета-катенина с помощьюселективных антител к разным доменам. При использовании антител к С-концумолекулы бета-катенина ядерная экспрессия была выявлена в 0% НР, 0% SSA/P,11,1% TSA, 35% CLA. При использовании антител к N-концу – в 0% дистальнорасположенных НР, 33,3% проксимально расположенных НР, 40% SSA/P, 0%39TSA, 17,5% CLA [114]. Авторы полагают, что выявленные различия могут бытьсвязаны c участием по крайней мере двух различных молекулярных форм бетакатенина в работе Wnt-сигнального пути. Эти результаты не сопоставимыполностью ни с одним из других исследований.Yachida S.
с соавторами [196] описывают два различных типа ядернойреакции: окрашивание 20-50% клеток слабой интенсивности, характерное дляSSA/P и TSA, и диффузное яркое окрашивание более 80% клеток, характерное дляSSA/P с дисплазией и CLA. На основании этого авторы полагают, что в процессеядерной аккумуляции бета-катенина в зубчатых образованиях задействованымеханизмы, отличные от инактивации гена APC в CLA.Лишь в одном из изученных нами исследований в качестве критерия дляоценки ядерной экспрессии использовано среднее количество позитивных ядер,составившее 4% в SSA/P и 22% в CLA [130].Ни в одном из изученных нами исследовании нет оценки ядерной экспрессиибета-катенина в разных гистологических типах CLA, сравнения экспрессии в TSAи в АТ или в ATV. Также в данных литературы отсутствует описаниераспределения окрашенных ядер.1.2.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
