Диссертация (1174246), страница 16
Текст из файла (страница 16)
При этом при тяжелых повреждениях печени, сопровождающихся высвобождением АсАТ из митохондрий, повышение ее активности в сочетании сувеличением активности АлАТ служит важным диагностическим и прогностическим критерием состояния печени [176].Учитывая роль печени в синтезе многих белков, таких как альбумины,транспортные белки, белки острой фазы, белков, участвующих в стрессорном ответе [74, 80, 231], для комплексной оценки протеинсинтетической функции намибыл выбран интегральный показатель – сывороточная концентрация общего белка. Кроме того, синтетическая и обезвреживающая функции печени оценивалисьпутем исследования содержания мочевины в сыворотке крови, так как синтез нетоксичной мочевины из токсичного аммиака осуществляется только в гепатоцитах [7].Принимая во внимание ведущие механизмы стрессорного повреждения гепатоцитов в виде нарушения микроциркуляции [254] с последующим развитиемгипоксии и ишемии тканей [180, 192], альтерации антиоксидантных механизмов иактивации проксидантных систем и перекисного окисления липидов [115, 185,231, 234.
264], нами были исследованы содержание вторичного метаболита перекисного окисления липидов – малонового диальдегида и активность фермента-113тивного звена антиоксидантной системы: каталазы, супероксиддисмутазы и интегрального показателя – общей антиокислительной активности непосредственно вгомогенате тканей печени.Исследование содержания МДА является стандартным методом определения интенсивности оксидативного стресса во всех биологических средах организма и гомогенатах тканей [74, 129, 137, 162, 215, 228].
При этом отмечается корреляция содержания МДА и других продуктов ПОЛ [74, 83, 215].Ограничение процессов свободнорадикального окисления и ПОЛ возможноблагодаря функционированию антиоксидантной системы, активность первичногоферментативного звена (СОД и каталазы) которой была изучена. СОД являетсясубстратзависимым ферментом, обрывающим каскад свободнорадикальных кислородзависимых реакций у аэробов с образованием перекиси водорода и молекулы кислорода. При этом перекись водорода в высоких концентрациях инактивирует СОД, а в низких – восстанавливает ее [7, 29, 97, 123].
В последующем образовавшаяся перекись водорода метаболизируется с образованием воды и кислорода высокоактивным ферментом каталазой, играющим главную роль в нейтрализации перекиси водорода в гепатоцитах, по сравнению с глутатионпероксидазой[246]. Следует отметить, что активация каталазы не требует энергозатрат. Приэтом совместная работа СОД и каталазы обеспечивает более эффективную защитуклеток от свободнорадикального окисления [57, 62, 83, 87, 97, 123]. Учитываямногоступенчатость работы антиоксидантной системы и трудоемкость определения каждого показателя, с целью комплексной оценки резерва антиоксидантнойзащиты нами была исследована ОАА – интегральный показатель, отражающийспособность противодействовать развитию свободнорадикальных реакций [3].Для подтверждения полученных результатов биохимических исследованийнами была проведена оценка макропрепаратов печени в виде вычисления индексов ее массы и гистологическое исследование микропрепаратов.
При этом, принимая решение о методологии гистологических исследований, мы исходили изтого, что в интактной печени физиологическая регенерация в основном происходит за счет деления октоплоидных ядер и формирования пула двуядерных гепато-114цитов с их последующим ацитокинетическим митотическим делением на две одноядерные клетки [8, 172]. Учитывая толщину срезов и размерность ядер гепатоцитов с различной степенью полиплоидии (тетра- и октоплоидные клетки) и возможности отсутствия в плоскости среза одного из ядер или его части, мы пришлик выводу, о необходимости объективизации наблюдений.
С этой целью на этапемикроскопирования препаратов было выполнено более 1000 микрофотографийцентральных и периферических отделов долек на увеличении х400. Данный метод, помимо ускорения морфометрического подсчета и объективизации исследования, позволяет задокументировать наблюдения, а также стандартизироватьошибку наблюдений.Корреляционный анализ исследованных показателей был выполнен намиисходя из мнения ряда авторов [37, 38, 93, 94, 99] о вариабельности корреляционных взаимосвязей при стрессорных воздействиях. При этом адаптационные эффекты нагляднее отражаются в изменении взаимосвязей между показателями, чемна изменениях самих показателей [38].Выполненный комплекс биохимических, гистологических и корреляционных исследований позволил достаточно адекватно оценить морфофункциональное состояние гепатоцитов в условиях стрессорных воздействий различной природы, силы и продолжительности, а также дать оценку эффектам семакса при еговнутрибрюшинном введении в различных дозах в вышеуказанных условияхстрессирования.Так, острое эмоционально-болевое стрессирование вызвало увеличение активности сывороточной АсАТ и интенсификацию процессов липидной пероксидации на фоне сохранной антиоксидантной системы.Принимая во внимание изолированное увеличение активности АсАТ, общеесодержание которой в организме больше, чем АлАТ, можно предположить внепеченочную причину данного увеличения [140] вследствие повышенной физическойактивности животных [175], в ответ на электроболевое воздействие.
Таким образом, может наблюдаться «нецитолитическое» увеличение активности АсАТ, такназываемая «адаптивная ферментемия» [45, 81].115Увеличение содержания МДА без изменения активности антиоксидантныхферментов может объясняться высокой чувствительностью данного биомаркералипидной пероксидации на ранних стадиях ее развития [73], тогда как для изменения активности антиоксидантной системы требуется большее количество времени и накопление субстрата.Морфологические изменения, наблюдаемые в печени в виде расширениякапиллярной сети с признаками дезорганизации балочной структуры паренхимы ибелковой дистрофии по гидропическому типу, более выраженными в центральном и промежуточном отделах дольки, могут объясняться стрессиндуцированнымперераспределением кровотока вследствие быстрой активации автономной нервной системы [13] и нарушением проницаемости клеточных мембран вследствиеих липидной пероксидации [85]. При этом преимущественная локализация поражений в центральных отделах дольки обусловлена функциональной и морфологической гетерогенностью гепатоцитов [117, 118], в частности, большей чувствительностью гепатоцитов данной зоны как к гипоксическому, так и токсическомупоражению вследствие худшей оксигенации.
Преимущественная локализация митохондрий и процессов метаболизма липидов в данной зоне в условиях оксидативного стресса также способствует активации ПОЛ [175]. Кроме того, высокаяконцентрация АсАТ обнаруживается также в центролобулярной зоне, и ее повреждение способствует большему увеличению активности сывороточной АсАТ[175, 242].Наблюдаемое снижение синтетической функции печени, проявившеесяснижением относительного количества многоядрышковых клеток во всех отделахпеченочной дольки, и снижение репаративных процессов преимущественно вцентролобулярных отделах, вероятно, объясняются активацией гипоталамогипофизарно-надпочечниковой оси с продукцией глюкокортикоидов, обладающих катаболическим эффектом.Следовательно, острое эмоционально-болевое стрессирование приводит кразвитию как адаптивных, так и патологических реакций у животных.116Введение пептида во всех использованных дозах нивелировало стрессиндуцированное повышение активности АсАТ до значений интактных животныхи, кроме того, в дозе 150 мкг/кг снизило активность АлАТ.
При этом на процессыПОЛ пептид оказывал неоднозначный дозозависимый эффект. Так, при введениисемакса в дозах 50 и 450 мкг/кг стресс-индуцированное повышение концентрацииМДА в гепатоцитах нивелировалось до значений интактных животных. Доза пептида 150 мкг/кг увеличивала содержание МДА, доза 5 мкг/кг имела аналогичныйэффект на фоне увеличения активности СОД и ОАА. Однако однозначно трактовать увеличение содержания МДА под действием указанных доз пептида какнегативный фармакологический эффект препарата не представляется возможнымв связи с известной ролью МДА сигнального мессенджера, влияющего на экспрессию генов, регулирующих глюкозоиндуцированную секрецию инсулина[261].
Учитывая методику эксперимента и стресс-индуцированное увеличениеконцентрации глюкозы в крови [199], нельзя исключить адаптивный эффект данных доз препарата. Кроме того, в пользу вышеназванного эффекта дозы 5 мкг/кгпрепарата может свидетельствовать увеличение общего антиоксидантного потенциала гепатоцитов на фоне неравномерного увеличения активности СОД и каталазы и увеличения содержания МДА. По мнению некоторых авторов незначительное повреждение тканей вследствие ПОЛ [223] и относительный избыток перекиси водорода, полученной в результате деятельности СОД и выполняющейфункции вторичного мессенджера в реакциях модификации белков [43, 218], также могут стимулировать адаптивные процессы.При морфологическом исследовании гепатопротекторный эффект препаратаподтверждался нормализацией структуры паренхимы, уменьшением распространенности и степени выраженности признаков гидропической дистрофии, а в дозах450 и 50 мкг/кг – восстановлением синтетической функции печени, что подтверждалось относительным увеличением количества многоядрышковых гепатоцитов.Таким образом, в условиях острого эмоционально-болевого стресса, препарат оказывал стресс-лимитирующее регулирующее адаптивное влияние на состояние гепатоцитов, что согласуется с ранее полученными данными об эффектах117препарата, а именно значительным сокращением количества поврежденныхнейронов при их кратковременной инкубации в среде, содержащей перекись водорода [16, 116], улучшением выживаемости нейронов в условиях глутаматнойтоксичности вследствие удлинения латентного периода развития отсроченнойкальциевой дизрегуляции [18].
Кроме того, в ряде исследований нейропротекторный эффект препарата был обусловлен его антигипоксическим и нейротрофическим действием через регуляцию уровня экспрессии нейротрофических факторовза счет связывания с соответствующими рецепторами на клетках нервной системы[39].Эмоциональныйиболевойкомпонентывразвитиистресс-индуцированных реакций могли ингибироваться стресс-лимитирующим действием семакса за счет анксиолитического [76, 127, 238] и анальгетического [21, 112,78] эффектов.Наряду с данными центральными эффектами препарата представляетсявозможным и его периферическое действие. В частности, в настоящее времянакоплен значительный объем информации о механизмах рецепции меланокортиновых пептидов, идентифицировано 5 типов их рецепторов (MC1R – MC5R) иустановлено их распределение в тканях и клетках.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
