Диссертация (1154661), страница 8
Текст из файла (страница 8)
8).24215634Рис. 8. Структуры синовии больного ПГА: 1 – веретенообразные;2 – мелкоглыбчатые;3 – трещины крупные; 4 – трещины трехлучевые (сеть); 5 – токсические бляшки, морщины;6 - «раздвоение» фацииМетод краевой дегидратации синовиальной жидкости. Методкраевой дегидратации заключался в замедленном фазовом переходежидкокристаллических структур (систем «липид-вода», «липид-белоквода») в кристаллическое состояние. Сформированные кристаллическиеструктуры носят название изоморфоны, так как являются изотропными ихорошо видимы при обычной микроскопии.
При большем увеличении приизучении образцов в поляризованном свете можно наблюдать более тонкиеструктуры,которыезасчетихспособностиканизотропии(двулучепреломление) получили название — анизоморфоны.Методкраевойдегидратациибиологическихжидкостейосуществлялся следующим образом: в ячейки стеклянной тест-картынаносилось по 20 мкл СМЖ, которые накрывались покровными стеклами.Дегидратация длилась медленно, в течение 3-4 суток. Испарение водыпроисходило через зазор между поверхностью тест-карты и покровного43стекла при температуре 25°С и относительной влажности 55-60%. Изучениеанизоморфонов проводилось с помощью поляризационного микроскопаDM2500 фирмы “Leica”.
На рис. 9 показаны примеры изоморфона ианизоморфона в СЖ.баРис. 9. Структуры синовиальной жидкости больного ПГА: а – изоморфон, х50(микроскопия в обычном свете); б – анизоморфон, х200 (микроскопия вполяризованном свете).Полуколичественный анализ состава изоморфонов и анизоморфонов(%) в аналитической ячейке проводили в СЖ каждого больного допроведения определенного вида лечения и спустя 6 мес. после завершениятерапии. Комплексная оценка структур СЖ больных проводилась последующей схеме (таблица 4).44Таблица 4Комплексная оценка структур синовиальной жидкости у обследуемых больныхразных групп (схема)МорфологическиепризнакиДо леченияЧерез 6 месяцев послелеченияГруппы больныхГруппы больныхСтруктуры в фации синовии (%)III III IV VIII III IV VМаркер артроза(веретенообразные)Маркер артроза в стадииформирования(мелкоглыбчатые)«Раздвоение» фацииТрещины крупные итрехлучевыеШтриховые трещины впромежуточной зонеТоксическиме бляшки,морщиныИзоморфоны синовии (%)Папоротникообразные(норма)СмешанныеПластинчатые(деструкция)Анизоморфоны синовии (%)Базисные (норма)ВторичныеДеструктивныеДеструктивные сполихромиейДеструктивные сполихромией ицентральной вставкой(микросферолит)Рентгеноспектральныймикроанализсиновиальнойжидкости.Электронно-зондовое изучение фаций синовиальной жидкости проводилосьвлабораториирентгеноспектральногомикроанализаВсероссийскогоинститута минерального сырья им.
Н.М. Федоровского (Москва) с помощьюрентгеновскогомикроанализатора«Суперзонд-8100»фирмы“Jeol”45(Япония), оснащенного тремя кристалл-дифракционными спектрометрами.Каждый спектрометр снабжен двумя кристалл-анализаторами, что позволяетпроводить количественный анализ от 5В до 924 с объемной локальностью внесколько кубических микрон. Разрешение прибора в режиме растровогоэлектронного микроскопа составляет 7х10-3 мкм. С электронно-оптическойсистемой микроанализатора состыкован полупроводниковый Si (Li) детекторInca Energy 400 (Oxford Instrument, Великобритания и многоканальныйамплитудный анализатор).Образцы синовиальной жидкости готовили на подложке из алюминиябез микровключений каких-либо неорганических элементов.
Для этого 0,02мл исследуемого материала наносили в виде капли на поверхностьалюминиевой фольги, предварительно обработанной спиртом.Состав и распределение химических элементов (Na, Mg, P, Si, S, Cl, K,Ca) в различных локусах фаций синовиальной жидкости исследовались вовторичных и обратно рассеянных электронах. Процентное содержаниехимических элементов определялось как по площади фации, так и вразличных ее локусах с помощью микрозондового исследования.
На рис. 10представлен образец измерения спектров химических элементов в участкахзональныхструктурфацийсиновиальнойжидкости,вкоторыхпроизводилось определение процентного содержания неорганическихэлементов.46Processing option : All elements analyzed (Normalised)SpectrumNaMgSiPSClKCaZnTotalSpectrum 1Spectrum 2Spectrum 332.1428.0533.121.990.001.910.960.951.294.564.643.6014.3514.799.9133.4138.0339.293.392.212.169.2111.338.230.000.000.49100.00100.00100.00MeanStd. deviationMax.Min.31.112.6933.1228.051.301.131.990.001.070.191.290.954.260.584.643.6013.022.7014.799.9136.913.0939.2933.412.580.703.392.169.591.5811.338.230.160.280.490.00100.00Рис.
10. Фрагмент фации синовиальной жидкости. Процентное содержание химическихэлементов по площадям в различных зонах фации (спектры 1, 2, 3)2.4. Статистическая обработка результатов исследованияСтатистическая обработка полученных результатов проводилась спомощью стандартных пакетов MS Excel 2010 и Statistica 10. Достоверностьрезультатов определяли с помощью критерия Стьюдента. Отличия считалисьдостоверными при уровне значимости Р <0,05.Статистическую обработку результатов измерения концентрациихимических элементов методом РСМА проводили с применением системыLinK QX2000 фирмы Link Analytical Limited (Англия). Система состоит из47спектрометра энергетической дисперсии и ЭВМ, имеющей программноеобеспечение для ведения анализа и расчета концентраций элементов сучетом поправок ZAF.
Смысл ZAF-коррекции объясняется следующим:концентрацияисследуемогоэлементаопределяетсясравнениеминтенсивности аналитического сигнала от неизвестного образца и образцасравнения, состав которого определен. При нахождении концентрацийвозникает необходимость введения поправок (на атомный номер,поглощение и флуоресценцию), учитывающих различие во взаимодействииэлектронов и рентгеновского излучения с веществом неизвестного образцаи образца сравнения.Таким образом, в проводимых нами исследованиях использовалисьновые диагностические технологии и современное оборудование.48ГЛАВА 3.
МОРФОЛОГИЯ И СОСТАВ ХИМИЧЕСКИХЭЛЕМЕНТОВ ФАЦИЙ СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БОЛЬНЫХПЕРВИЧНЫМ ГОНАРТРОЗОМ ПОСЛЕ КОНСЕРВАТИВНОГО ИАРТРОСКОПИЧЕСКОГО МЕТОДОВ ЛЕЧЕНИЯВ данной главе представлены результаты морфологического анализафаций и морфонов (изо- и анизоморфонов) синовиальной жидкости 62больных ПГА после проведенной консервативной терапии, а такжеартроскопической санации полости коленного сустава.
При помощиэлектронно-зондового исследования (РСМА) состава химических элементовв краевой (т.е. аномально прочно связанной с органической составляющей)и центральной (не связанной с органической составляющей) зонах фацийСЖ, проведено сопоставление результатов до и после терапии.На данном этапе исследовалась СЖ 62 пациентов различной давностизаболевания.
Все пациенты предъявляли жалобы на болевой синдром как впокое, так и после физической нагрузки, на "стартовые", "ночные" боли, наснижение объема пассивных и активных движений, на крепитацию впораженных суставах.3.1. Системная организация и морфоны синовиальной жидкостибольных ПГА до проведения леченияПри исследовании фаций СЖ методом клиновидной дегидратации у 27больных первой, 22 больных второй, 13 больных четвертой группы долечения определялся маркер остеоартроза в виде веретеновидных структур,которые системно, с наличием радиальной симметрии, отдаленных друг отдруга относительно равными промежутками, заполняли промежуточнуюзону фации (рис.
11).49авбгРис. 11. Фация больного ПГА Р., 47 лет: а – цельная фация, x10; б – боковой фрагментфации в частично – темном поле, x60; в – фрагмент половины фации, x40; г – фрагментполовины фации синовии здорового человека (для сравнения), x40. Маркер остеоартроза– веретеновидные структуры (стрелки).Состав изоморфонов СЖ у всех больных первой и второй групп долечения был практически однотипным: в виде пластинчатого морфотипа 100% и смешанного - 18% (рис. 12). Известно, что пластинчатый морфотипявляется маркером деструкции. Форма пластины представляет собойтекстуру холестерина, являющегося формообразующим элементом мембранклеток. Массивная гибель клеток освобождает холестерин и в аналитическойячейке появляются пластинчатые изоморфоны.
В СЖ здорового человекаопределяются папоротникообразные и смешанные изоморфоны.50абвгРис. 12. Изоморфоны синовиальной жидкости больной В., 55 лет: а, б – пластинчатые, в –смешанный; г – папоротникообразный (норма, для сравнения). х100АнизоморфоныбольныхПГАпервойгруппыдоначалаконсервативного лечения были представлены деструктивными, т.е. не имеличетких контуров, с хаотическим расположением многих фрагментов, вкоторых могли проявляться слабовыраженные признаки полихромии.Отличительным признаком анизоморфонов СЖ больных второй группыявляласьвыраженнаяполихромия,котораяподчеркивалапризнакидеструкции.
В качестве примера на рис. 13 приводим типичныеанизоморфоны двух больных первой и второй групп.51абвгдеРис. 13. Анизоморфоны синовиальной жидкости: а, б - больной Л., 59 лет (первая группа) деструктивные с признаками полихромии, х400; в, г – больной Г., 67 лет (вторая группа) свыраженной полихромией и деструкцией; д, е – анизоморфоны нормы – дендрит,сферолиты (для сравнения), х400Феномен выраженной полихромии объясняется проявлением защитнойбиоминерализации, т.е.
«связывание» минеральной составляющей элементовраспада органических веществ, образующихся в процессе консервативного ималоинвазивного артроскопического лечения больных ПГА. «Высаливание»52органического детрита в результате медикаментозного вмешательства лишьна определенный период времени замедляет течение воспалительного идеструктивного процесса в суставе. При этом происходит изменение физикохимических свойств жидкой среды сустава за счет агрегации белковолипидных структур с минеральным компонентом, в основном, с ионамикальция и фосфора, которые при исследовании СЖ методом краевойдегидратации дают эффект полихромии в поляризованном свете.3.2.
Системная организация и морфоны синовиальной жидкостибольных ПГА спустя 6 месяцев после проведения леченияСпустя 6 месяцев после проведения лечения 62 больным первой, второйи четвертой группы при повторном исследовании СЖ морфологическиймаркер остеоартроза оставался практически без изменений.Спустя 6 месяцев после проведения больным первой группыконсервативной терапии состав изоморфонов несколько изменился:пластинчатый изоморфон отмечался в 100% случаев, смешанный – в 48%.Папоротникообразный вид изоморфона отсутствовал. То есть маркердеструкции являлся устойчивой структурой, но увеличение числа больных споявлением у них в СЖ смешанного изоморфона свидетельствовало онебольшом положительном эффекте консервативного лечения.
По составуанизоморфонов картина несколько изменилась: у большинства больных(57%) наряду с деструктивными анизоморфонами определялись и единичныедендриты, сферолиты (норма), что характеризовало положительный сдвигэффекта лечения.3.3. Результаты рентгеноспектрального микроанализа составахимических элементов в фациях синовиальной жидкости больных,после консервативной терапииРезультаты определения процентного состава химических элементов вкраевой и центральной зонах фаций СЖ у больных ПГА первой группы до ипосле консервативной терапии представлены в таблице 5 и 6. В качествепримера приводим фрагменты фации СЖ больного Ш., 67 лет, до лечения53(рис. 14, 15) в краевой и центральной зонах которой определялся спектрхимических элементов с помощью РСМА.Processing option : All elements analyzed (Normalised)SpectrumNaMgSiPSClKCaZnTotalSpectrum 333.121.911.293.609.9140.292.167.230.49100.00Mean33.121.911.293.609.9140.292.167.230.49100.00Std.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
