Диссертация (1154515), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Развитие устойчивости бактерий к действию часто используемыхантибактериальных препаратов (Ho et al., 2016).39Таким образом, проведенный нами анализ спектра чувствительностивыделенныхусловно-патогенныхбактерийпозволилустановить,чтобольшинство из них характеризуются множественной резистентностью кантибиотикам и антимикробным химиотерапевтическим препаратам. ВысокийуровеньустойчивостипредставителейсемействаEnterobacteriaceaeкцефалоспоринам III поколения и к комбинированному препарату амоксиклавупозволил предположить наличие у данных микроорганизмов БЛРС.3.3.
Определение наличия БЛРС фенотипическим методом и выборпрепаратовПриопределениичувствительностикантимикробнымпрепаратампредставителей семейства Enterobacteriaceae важным является обнаружениепродуцентовБЛРС,посколькубактериями,цефалоспоринамилечениеII-IVзаболеваний,поколениявызванныхявляетсятакимиклиническинедостаточно эффективным. Поскольку предварительная оценка позволилаустановить, что при ИМП в большинстве случаев от больных выделялисьбактерии E.
coli, то БЛРС были определены для штаммов этих микроорганизмов.Первоначальный скрининг устойчивости к цефалоспоринам показал, что 65штаммов E. coli (58,5%) проявили устойчивость к цефтазидиму, которыйсчитается маркером БЛРС.Использование метода «двойных дисков» позволило установить, что из 111идентифицированных клинических штаммов E. coli способностью продуцироватьБЛРС обладали 51,4% изолятов (табл. 3.3.1 и рис.
3.3.1).Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о невозможностииспользованиябета-лактамныхантибиотиковгруппыпенициллиновицефалоспоринов для лечения заболеваний, вызванных штаммами - продуцентамиБЛРС.40Таблица 3.3.1 - Частота индикации E. coli, продуцирующих БЛРСКоличествоштаммов E. coli,абс. / %111 / 100Количество штаммов E. coli, продуцирующих БЛРС, абс. / %первоначальный скринингфенотипический подтверждающий тест65 / 58,557 / 51,4БЛРСБЛРСРис. 3.3.1 - Выявление продукции БЛРС с помощью метода «двойных дисков».Анализ частоты встречаемости среди пациентов штаммов E. coli,продуцирующих БЛРС, позволил установить, что 39 штаммов (68%) быливыделены от женщин, а 18 штаммов (32%) – от мужчин (рис. 3.3.2).
Полученныерезультаты согласуются с данными, представленными в работах (Selvakumar,Jasmine, 2011; Briongos-Figuero et al., 2012; Thaden et al., 2015).Выявление бактерий E. coli, вырабатывающих БЛРС, из образцов мочипациентов с ИМП также отмечается и в других работах ученых из разных стран,включая Францию (Garrec et al., 2011), Испанию (Briongos-Figuero et al., 2012),Соединенные Штаты Америки (Thaden et al., 2015), Корею (Han et al., 2015),Мексику (Alcántar-Curiel et al., 2015) и Иран (Sedighi et al., 2015).4132%68%мужчиныженщиныРисунок 3.3.2 - Распределение штаммов E.
coli, продуцирующих БЛРС, в зависимости от полапациентовПоскольку большинство выделенных от больных штаммов E. coli проявилиустойчивость к антибиотикам ряда цефалоспоринов, которые часто применяютсядлялеченияИМП,представлялоинтересопределитьспектрнаиболееэффективных препаратов в отношении продуцентов БЛРС.
Было установлено, чтовыделенныеклиническиехарактеризуютсяразличнойштаммыстепеньюE.coli,продуцирующиечувствительностикБЛРС,тестируемымантимикробным препаратам (табл. 3.3.2). Наибольшая чувствительность этихштаммов была отмечена для антибиотиков ряда карбапенемов (имипенем),аминогликозидов(амикацинитобрамицин)ипредставителярядахимиотерапевтических препаратов группы нитрофуранов (нитрофурантоин)(χ2 = 208,9; p < 0,05). Для данных штаммов был показан высокий уровеньустойчивости к антибиотикам ряда цефалоспоринов (цефокситин, цефтриаксон,цефотаксим, цефтазидим).
Чувствительность к антибиотикам пенициллиновогоряда была незначительной и составила 33% для пиперациллина и 25% дляампициллина, однако 58% штаммов были чувствительны к комбинированномупрепарату-амоксиклаву. Низкая эффективность в отношении штаммов E. coli,продуцирующих БЛРС, выявлена и для представителей ряда хинолонов ифторхинолонов – налидиксовой кислоты и ципрофлоксацина, а также длякомбинированногосульфониламида-ко-тримоксазола.Выделенныештаммы42E. coli, продуцирующие БЛРС, характеризовались множественной лекарственнойрезистентностью, поскольку проявляли устойчивость к 10 препаратам (67%),относящимся к пяти группам антимикробных лекарственных средств.Таблица3.3.2-СпектрчувствительностикантимикробнымпрепаратамE. coli, продуцирующих БЛРСГруппа антибиотиковАнтибиотикКарбапенемНитрофуранСульфониламидХинолоны ифторхинолоныIPMFSXTCIPNAAKTOBGMAMCPIPAMPFXCAZCTXCROАминогликозидыПенициллиныЦефалоспориныКоличествочувствительныхштаммовабс.%571004477162817301221571004579213733581933142515260000712Количествоустойчивыхштаммовабс.%0013234172407045790012213663244238674375427457100571005088Полученные результаты согласуются с данными, приведенными в работах(Sharma et al., 2012; Poulou et al., 2014; Alcántar-Curiel et al., 2015; Degnan et al.,2015; Eshetie et al., 2015; Han et al., 2015; Salvatore, Resman-Targoff, 2015; Sedighiet al., 2015).
Причиной проявления множественной лекарственной устойчивости кантибиотикам могут быть следующие факторы.1.Выделение бета-лактамазы типа tem-1, являющейся наиболее частовстречаемым типом бета-лактамаз грамотрицательных бактерий, в частностиE. coli (Aziz et al., 2015).2.Эффективность действующего вещества антибиотика и численностьвозбудителя в организме (Tang, Stratton, 2006).3.Расположениегенов,обуславливающихразличныемеханизмырезистентности, на одной и той же плазмиде, что приводит к выработке БЛРС у43патогенов, вызывающих ИМП, и формированию множественной лекарственнойустойчивости (Jeong et al., 2005).4.Другие факторы, включающие чувствительность антибиотика к бета-лактамазам, способность антибиотика к проникновению через внешнююмембрану, доступность мишени действия антибиотика, наличие разных типовбета-лактамаз (Aiyegoro et al., 2007).Таким образом, было установлено, что большинство штаммов E.
coli,выделенныхотбольныхспризнакамиИМП,согласнорезультатамфенотипического теста, характеризовались способностью к продукции БЛРС.Следовательно, для лечения заболеваний, вызванных штаммами-продуцентамиБЛРС, необходимо учитывать антибиотикограмму, а препаратами выбора могутбытьантибиотикиряданитрофурановые препараты.карбапенемовиаминогликозидов,атакже44ГЛАВА 4.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ ДЕТЕРМИНАНТВИРУЛЕНТНОСТИ У КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ E. COLI4.1. Выявление генов устойчивости к антибиотикамВнастоящеевремяниодинизиспользуемыхстандартныхмикробиологических методов не позволяет определить наличие у возбудителяБЛРС в 100% случаев. Кроме того, в клетке бактерий может находитьсяодновременнонесколькодетерминантрезистентностикразличнымантимикробным препаратам.
Использование молекулярно-генетических методов,в частности полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяет определять не толькогены резистентности, но и классы ферментов, обеспечивающих устойчивость(Эйдельштейн, 2001).Определениегенаантибиотикорезистентностиctx-mпроводилидляклинических штаммов E. coli, частота выделения которых от больных с ИМПбыла самой высокой и для которых предварительно фенотипическим методомбыли определены БЛРС.
В качестве отрицательного контроля БЛРС использовалиэталонный штамм E. coli АТСС 25922. Результаты генотипической детекции генаустойчивости к антибиотикам ctx-m приведены на рисунке 4.1.1.Рисунок 4.1.1 - Результаты ПЦР-анализа образцов ДНК клинических штаммов E. coli наналичие гена ctx-m45Было установлено, что ген ctx-m, кодирующий БЛРС, размер которогосоставлял 590 пар нуклеотидов, обнаруживался у 63,2 % клинических штаммов E.coli, для которых предварительно было установлено наличие данных ферментовфенотипическимметодом(рис.4.1.2).Тетрахорическийкоэффициентсопряженности составил 0,67 (при p < 0,05).48,6%63,2%51,4%36,8%БЛРС -БЛРС +ctx-m +ctx-m -Рисунок 4.1.2 - Результаты определения гена устойчивости у клинических штаммовE.
coliТак как ген ctx-m кодирует БЛРС, относящиеся к функциональной группе2be молекулярного класса А, то для них характерна выраженная субстратнаяспецифичность, которая проявляется в способности расщеплять цефалоспориныIII–IV поколений наряду с ранними цефалоспоринами и пенициллинами (Bush etal., 1995). Полученные нами результаты согласуются с литературными данными,посколькувсехарактеризовалисьпоколенияклиническиештаммыустойчивостьюрасширенногокE.продуцирующиеcoli,представителямспектра, относящихсякБЛРС,цефалоспориновIIIоксиимино-b-лактамам-цефтазидиму, цефотаксиму и цефтриаксону. Кроме того, исследуемые штаммы E.coli были чувствительны к представителю карбапенемов-имипенему, а некоторыеиз них (26%) сохраняли чувствительность к цефокситину, принадлежащему ко IIпоколению цефалоспоринов и относящегося к подгруппе цефамицинов, что такжесогласуется с данными, приведенными в работе М.В.
Эйдельштейна (2001).46Аналогичные результаты получены ранее учеными из США (Doi et al.,2013), Бангладеша (Rashid et al., 2015), Ирана (Sharifi et al., 2015), Ливии (ElGarbulli et al., 2015) и Пакистана (Rahman et al., 2016). Высокая частотаобнаружения и степени экспрессии гена устойчивости к бета-лактамнымантибиотикам ctx-m, приведенная в том числе и в нашей работе, подтверждает тотфакт, что в настоящее время преобладающим генотипом БЛСР среди UPEC вЕвропе стал тип ctx-m, вытеснивший типы tem и shv (ECDC, 2014).Поскольку фенотипическими методами установлено наличие БЛРС у 57клинических штаммов E. coli, то, вероятно, 36,8% штаммов, у которых не былвыявлен ген ctx-m, продуцировали другие варианты этих ферментов, которых внастоящее время известно более 200, включая типы tem, shv, oxa и AmpC (Лагун,2012; Kaye, Pogue, 2015; Salvatore, Resman-Targoff, 2015).ДлялеченияИМПвклиническойпрактикеширокоприменяютантибиотики, относящиеся к группе аминогликозидов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
