Диссертация (1154515), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Однако всеболее распространенным явлением становится развитие устойчивости многихвозбудителей ИМП к действию множества различных групп антимикробныхпрепаратов, а в последние годы такая тенденция заметно усилилась, чтообусловленообширным,чрезмерным,нецелевымилинеобоснованнымиспользованием антибиотиков широкого спектра действия (Paschke et al., 2010;Barber et al., 2013; Cosgrove et al., 2015). Поэтому устойчивость микроорганизмов61к антимикробным препаратам является проблемой глобального масштаба,требующей незамедлительного вмешательства с целью нахождения путей еерешения.Развитию антибиотикорезистентности среди возбудителей ИМП, включаяE. coli, Klebsiella spp., Proteus spp.
и Pseudomonas spp., способствоваловозникновениепреимущества,защитныхсредимеханизмов,которыхобуславливающихнаибольшеезначениеселективныеимеетпродукциявозбудителями БЛРС (Sharifi et al., 2015; Upadhyay et al., 2015). Образование этихферментов детерминировано плазмидными генами, что и обеспечивает быстрыйгоризонтальных перенос данного признака и увеличение числа резистентныхштаммов.Настоящая работа представляет собой попытку изучения спектра основныхвозбудителей ИМП, циркулирующих на территории города Багдад (Ирак) и ихособенностей по сравнению с данными, представленными в мировой литературе.Оценка микробного пейзажа возбудителей ИМП позволила установить, чтоиз 200 идентифицированных штаммов в 92,5% случаев выделялись возбудители,относящиеся к семейству Enterobacteriaceae, среди которых ведущая роль впатогенезе принадлежала штаммам E.
coli. Частота встречаемости возбудителейдругих систематических групп была низкой, поскольку Pseudomonas spp.выделялась из 6%, а Acinetobacter baumannii – всего из 1,5% образцов.Для удобства оценки зависимости проявления ИМП все пациенты былиразделены на шесть возрастных групп. Было установлено, что наиболее частоданные заболевания регистрировались у лиц в возрасте от 17 до 46 лет спреобладанием в возрастной группе 27-36 лет.Анализ проявления ИМП в зависимости от пола пациентов показал, чточастота встречаемости этих заболеваний была выше у женщин, что обусловленоособенностями анатомического строения их мочевыделительной системы, а такжеособенностями гормонального статуса в связи с использованием контрацептивов.Однакоупациентовввозрасте57-66летслучаиИМПумужчинрегистрировались в 2 раза чаще, чем у женщин, что, вероятно, связано с62возрастными изменениями предстательной железы и функционального состояниямочевыделительной системы.Оценкаспектрачувствительностивыделенныхштаммовусловно-патогенных бактерий показала, что большинство из них характеризовалисьустойчивостью к большинству используемых для лечения ИМП антимикробныхпрепаратовразличныхаминогликозиды,групп,нитрофуранывключаяицефалоспориныфторхинолоны.Изпоколения,IIIвсехисследуемыхантибиотиков наибольшая активность была отмечена для IPM и AK, к которымбыли чувствительны все выделенные штаммы бактерий и, следовательно, онимогут рассматриваться в качестве препаратов выбора для эффективнойэтиотропной терапии ИМП.Устойчивость большинства клинических штаммов E.
coli к цефтазидимупозволилапредположитьнамихспособностькпродукцииБЛРС.Сиспользованием фенотипического метода «двойных дисков» данное свойствобыло изучено у 111 штаммов E. coli. Полученные результаты позволилиустановить, что из 61 штамма E. coli, проявивших устойчивость к цефтазидиму,способность продуцировать БЛРС установлена у 57 штаммов.Успех лечения ИМП у пациентов, от которых выделены штаммывозбудителей с множественной лекарственной устойчивостью, зависит отправильного выбора препарата с учетом антибиотикограммы возбудителя.Оценивая чувствительность штаммов E.
coli, продуцирующих БЛРС, кантимикробным препаратам, установлено отсутствие активности в их отношениицефалоспоринов II и III поколения, а также показана низкая активность котримоксазола, препаратов хинолонового и пенициллинового ряда и гентамицина.ВсеисследованныештаммыE.coliхарактеризовалисьвысокойчувствительностью к имипенему и амикацину, а также в отношении большинстваиз них проявили активность нитрофурантоин и тобрамицин.Большинство клинических штаммов E.
coli, выделенных от больных спризнакамиИМП,характеризовалисьмножественнойустойчивостьюкантимикробным препаратам, что и определило дальнейшее изучение механизмов63их резистентности. С использованием ПЦР была проведена детекция гена ctx-m,который детерминирует синтез БЛРС. Было установлено, что из 57 штаммовE. coli, для которых фенотипическим методом была установлена способность кпродукции БЛРС, данный ген был обнаружен только у 36 штаммов.
Поскольку внастоящее время известно большое число БЛРС, то, вероятно, остальные штаммыE. coli продуцировали другие виды ферментов, однако, данное предположениетребует дополнительных исследований.Помимо бета-лактамных антибиотиков в терапии ИМП находят широкоеприменение аминогликозидные препараты. Поскольку все исследованныештаммы E. coli были чувствительны к действию амикацина, генетическиедетерминанты резистентности были определены для 23 клинических штаммов ссочетанной устойчивостью к гентамицину и тобрамицину. С использованием ПЦРбыла проведена детекция гена aac(3)-II, обуславливающего синтез ферментаацетилтрансферазы,поддействиемкоторогопроисходитэнзиматическаяинактивация аминогликозидов. Наличие данного гена было установлено для 78%исследуемых штаммов E. coli.
Полученные результаты объясняют низкуючувствительность большинства штаммов E. coli к гентамицину и тобрамицину иразвитие к ним перекрестной резистентности у клинических штаммов бактерий,поскольку именно эти препараты являются основными субстратами для действияданного фермента.Эффективность взаимодействия возбудителя и макроорганизма обусловленафакторами адгезии. Для UPEC известно множество факторов адгезии, основнымиз которых являются пили I типа. С их наличием связывают способность бактерийприкрепляться к эпителиальным клеткам мочевыделительного тракта, чтообеспечивает развитие дальнейших патологических процессов в организмечеловека. Синтез пилей I типа детерминирован геном fimH, наличие которогобыло изучено у клинических штаммов E. coli.
Было установлено, что частотавстречаемости гена fimH у штаммов E. coli, выделенных от больных с ИМП, былавысокой и составила 63%.64От уровня адгезивной активности микроорганизмов зависит эффективностьвзаимодействия с клетками организма-хозяина. Изучение адгезивной активностиштаммов E.
coli, выделенных от больных с ИМП, позволило выявить еезависимость от наличия гена fimH. Так, 10 исследованных клинических штаммовE. coli, имеющих в составе генома данный ген, по показателям ИАМхарактеризовались как высокоадгезивные, а эталонный штамм E. coli АТСС 25922и клинические штаммы, лишенные этого гена, – как низкоадгезивные исреднеадгезивные.Процесс неспецифической адгезии является начальным пусковым этапом впроцессеформированиямикробныхбиопленок.Оцениваяспособностьклинических штаммов E. coli к процессу пленкообразования в условиях in vitro,было установлено, что она зависит от наличия гена fimH.
Показан линейныйхарактер накопления красителя как эталонным, так и клиническими штаммамиE. coli с максимумом через 72 ч культивирования и снижением – через 96 ч.Однако, интенсивность наращивания биомассы в первые сутки культивированиябыла в 1,16 раза выше у штамма E. coli № 92, несущего ген fimH по сравнению склиническим штаммом E. coli № 7, в геноме которого данный ген отсутствовал.С факторами адгезии бактерий связано взаимодействие не только склеткамимакроорганизма,ноисинертнымиповерхностямиизделиймедицинского назначения, которые находят широкое применение при проведениимероприятий по оказанию медицинской помощи и с которыми связано развитиекатетер-ассоциированных инфекций.
Изучая зависимость пленкообразующейспособности клинических штаммов E. coli от наличия гена fimH, былоустановлено, что через 24 ч культивирования в условиях in vitro штамм E. coli №92, несущий ген fimH, формировал на поверхности образцов уретральногокатетера многослойную микробную биопленку с интенсивно выраженнымэкзополимерным матриксом.
Процесс пленкообразования клиническим штаммомE. coli № 7, не имеющего данный ген, отличался меньшей интенсивностью,поскольку на поверхности образца уретрального катетера микробные клетки65формировали изолированные скопления, а экзополимерный матрикс был выраженнезначительно.Таким образом, проведенные нами исследования позволили установить, чтобольшинство выделенных штаммов условно-патогенных бактерий, вызывающихИМП, характеризовались множественной резистентностью к антимикробнымпрепаратам, которая у клинических штаммов E. coli была обусловлена наличиемгенов ctx-m и aac(3)-II. Ген fimH, обнаруженный у большинства клиническихштаммов E. coli, определял их высокий адгезивный уровень, а также обуславливалинтенсивный процесс пленкообразования в условиях in vitro как в лункахиммунологического планшета, так и на поверхности образцов уретральногокатетера.66ВЫВОДЫ1.
Из 200 штаммов бактерий, выделенных от пациентов Багдадскогоучебного госпиталя, в 92,5% возбудителями ИМП являлись представителисемействаEnterobacteriaceae,изкоторых55,5%(111штаммов)былиуропатогенные E. coli, 14% (28 штаммов) – Klebsiella spp., 11,5% (23 штамма) –Enterobacter spp., 10% (20 штаммов) – Proteus spp. 1,5% (3 штамма) – Morganellamorganii. Уропатогенные бактерии выделялись с большей частотой в возрастнойгруппе 27-36 лет (27,5%), а ИМП регистрировались чаще у женщин (57,5%).2. Большинство (59,3%) выделенных штаммов уропатогенных бактерийхарактеризовалисьантимикробнымвысокимуровнемустойчивостихимиотерапевтическимпрепаратам,кантибиотикамоднаковсеибыличувствительны к имипенему и амикацину.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
