Автореферат (1154376), страница 4

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 4)

Пример представлениярезультатов по определению распределения частиц дисперсной фазы по размеру срасчетом среднеквадрати́ческого отклонения представлен на рис. 2.108%6Рисунок2. Распределениеразмерувсуспензиичастицинсулинаподляподкожного введения (n=7, X ± SD).42010размер частиц, мкм100Распределение частиц дисперсной фазы по размерам в суспензии НовоМикс 30 ФлексПен 2При определении значений счетной концентрации Сn составляющие θ:погрешность измерения коэффициента ослабления зондирующего излучения161=0,5 %; погрешность измерения длины рассеивающего объема 2=0,02%;погрешность измерения диаметра частиц 3=0,7%: θСn= 1,4[12 + 22 + 432]0,5= 2,1%.Приопределениизначенийобъемнойконцентрациисоставляющиеθ:погрешность измерения коэффициента ослабления зондирующего излучения1=0,5%; погрешность измерения длины пути lрассеивающего объема 2=0,02%;погрешность измерения диаметра частиц 3=0,7%; CV=1,4[12+22 + 32]0,5=1,2%.При определении значений массовой концентрации Сm составляющие θ:погрешностьизмеренияCVинеисключеннаясистематическаяпогрешностьплотности вещества : Сm=1,4(12 + 22 + 32 + 2)0,5=2%Неисключеннаясистематическаяпогрешностьзначенийфункциираспределения частиц по размеру определяется аналогично неисключеннойсистематической погрешности измерения размера частиц и составляет θ≈1%.Суммарную стандартную неопределенность (uс) вычисляют по формуле: =√∫=1( 2 2) () .

Приопределенииразмерачастицuс =1,2‒0,12%;счетнойконцентрации u с=2,2%; объемной концентрации uс=1,1%;массовой концентрацииuс=1,2%;значений функции распределения частиц по размерам uс=1,2‒0,12%.Расширенную неопределенность(U) рассчитывают по формуле: U = k· uC.Такимобразом, при определении размера частицU=3,3%; счетной концентрации UCn=6%;объемной концентрацииUCV=3%; массовой концентрации UCm=3,5%; значенийфункции распределения частиц по размерам Uf(D)=3,3%.2. Методы статического и динамического светорассеяния в контролекачества различных фармацевтических объектовНапримереразличныхфармацевтическихобъектов(растворовфармацевтических субстанций, жидких лекарственных форм, бактериальныхштаммов, биологически активных пептидов, минеральных вод) по показателям«описание», «подлинность», «чистота» нами проведена оценка целесообразностисочетания методов статического, динамического светорассеяния и оптическоймикроскопии для контроля их качества.17Суспензии.

Согласно требованиям НД, подлинность суспензий инсулина‒аспарта(НовоМикс Пенфилл®, ФлексПен®) для подкожного введения 100ЕД/мл («НовоНордикс А/О», Дания) определяют, оценивая размер и форму кристаллов методоммикроскопии: длина основной части кристаллов должна находиться в пределах 1‒20 мкм. Однако применение метода оптической микроскопии для оценки размераи формы кристаллов в суспензии оказалось неприемлемым в связи сограничениями технических характеристик оптического микроскопа.

В то жевремяполученныенамигистограммыдифференциальногообъемногораспределения частиц по размерам с применением анализатора дисперсностиMasterSizer позволяют оценить ЛП по исследуемому показателю качества (рис. 3).Рисунок 3.Гранулометрический анализобразцовсуспензийНовоМикс Пенфилл® (1,3)и ФлексПен® (2,4) дляподкожного введения(n=7, ±SD):1 – серия FT 63521;2 ‒ серия FT 69976;3 –серия FT 63444;4 ‒серия FJ 30093.Посколькунеправильнаягеометрическаяформа частиц можетбытьисточником погрешностей при определении размера частиц методом статическогосветорассеяния,тооценкаинтегральныххарактеристикдисперсностианализируемого ЛП («лазерное светозатемнение», obscuration=1 − ), «объемная0концентрация», «удельная площадь поверхности») дает возможность полногоописания физико‒химических свойств дисперсной системы (табл.1).Таблица 1. Интегральные характеристики дисперсности суспензий инсулина‒аспартата разных серий для подкожного введения.ИнтегральныеЛекарственный препарат и номер серии (n=7, X ± SD)характеристикиНовоМикс Пенфилл®ФлексПен®дисперсности18лазерное затемнение(1-I/I0)объемнаяконцентрация,Cv %удельная площадьповерхности, см3/гFT 63521FT69976FT 63444FJ 300930,219±0,010,277±0,010,233±0,010,197±0,010,0033±0,0010,0040±0,0010,0040±0,0010,0022±0,0010,99±0,100,99±0,180,94±0,181,31±0,18Анализ графических и табличных материалов позволяет констатироватьстатистически значимые отличия в свойствах дисперсности образца ФлексПен®серии FJ 30093 от других серий ЛП:в меньшей объемной доле частиц дисперснойфазы и бóльшей удельной площади, приводящей к агрегации частиц; на кривойраспределения наблюдаются две размерные группы ‒ 7мкм и 15мкм.LALLS‒метод показал бóльшую объективность в сравнении с другимиоптическими методами в связи с возможностью статистической оценки всейанализируемойпробы,атакжеанализаинтегральныххарактеристикдисперсности.

Результаты исследования могут иметь значение при выявлениизависимости между дисперсностью ЛП и его биодоступностью.Настойки. Для контроля качества настоек Календулы и Пиона уклоняющегося попоказателю «Описание», регламентирующего отсутствие осадка и взвешенноговещества, применяли методы DLS и LALLS (рис. 4).Кривые объемногораспределения свидетельствуют о существовании 6мкм размерной группыобъемной концентрации 10% в образце настойки календулы и 30мкм размернойгруппы объемной концентрации 7% в образце настойки пиона уклоняющегося.Механизм образования дисперсной фазы в исследуемых образцах обусловленнеконтролируемым появлением субмикронных частиц в настойках, получаемых изЛРС.

Об этом свидетельствуют размерные группы 160нм ‒ 220нм в обоих образцахпо данным метода динамического светорассеяния (см. рис. 4.1 и 4.3).Методы DLS и LALLS можно применять при контроле качества ЖЛФ,получаемых из ЛРС, на протяжении всего срока годности. Изменение видагистограммы объемного распределения, вызванное появлением размерных группбóльшего диаметра, свидетельствует об окклюзии или абсорбции БАВ насубмикронных частицах дисперсной фазы.19Рисунок 4.Гистограммыраспределения частицдисперсной фазы поразмерам в настойкахКалендулы и Пионауклоняющегося(n=7,140,9112100,908%интенсивность, n.106 (Cnt/s)«Календулы настойка»0,89640,88200,8710размер частиц, нмX ± SD).1 и 3 ‒ по даннымDLS‒метода(вединицахинтенсивности);2 и 4 ‒ по даннымLALLS‒метода(вдолях % от общегообъемачастицвсистеме).100размер частиц, мкм100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 3001214122,4102,282,0%интенсивность, n.106 (Cnt/s)«Пиона уклоняющегося настойка»2,61,8641,621,401,21100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300размер частиц, нм10100размер частиц, мкм34Это также имеет значение, учитывая влияние на фармакокинетику ЛП pe ros.Результаты контроля дисперсности настоек лазерными методами подтверждаютих необходимость при контроле качества ЖЛФ наряду с методами прямогоизмерения.БактериальныештаммынапримереEscherichiacoli.Намиизученаспособность клеток штамма E.

Coli K‒12 как бесплазмидных, так и с F‒подобными плазмидами pAP22-2 и pAP42,маркированными включением в ихструктурутранспозоновTn1иTn9,формироватьполицеллюлярные(«надклеточные») формы. В настоящие время одним из наиболее перспективныхметодических подходов к изучению распределения клеток бактерий по размерам иформе является малоугловое рассеяние лазерного излучения (рис.5).На рисунке 5 А максимум численного распределения клеток — порядка 2мкм, объемного — менее 1 мкм, что соответствует безплазмидным единичнымклеткам.

Объемная доля их мала (около 7%).Гистограмма распределения поразмеру клеток изогенных вариантов штамма С600, содержащих F‒подобныеплазмиды, свидетельствуют о присутствии полицеллюлярных форм двухразмерных группы с максимумами 15мкм и 100мкм;в размерной 100мкм группеобнаруживаются очень крупные частицы небольшого числа(см. рис. 5В).20816А2845,80101001210,010100размер частиц, мкмразмер частиц, мкм12,920С8,7доля частиц, %4В12доля частиц, %доля частиц, %110100размер частиц, мкмРисунок 5.Распределение бактериальных клеток и «надмолекулярных» ассоциатовштаммов C600 (А), C600pAP22-2: Tn1 (В) и C600pAP42:Tn9 (С) в логарифмическойфазе роста по объему (1) и числу (2) (n=5).

Концентрация суспензий:108 клеток в мл.При анализе численного распределения клеток штамма C600pAP42:Tn9 вдиапазоне от 3 до 100 мкм (см. рис. 5С) обнаружены две размерные группы смаксимумами 15 мкм и 40 мкм. Их численная и объемная доли растут, чтосвидетельствует о выявлении клеточных ассоциатов.Присутствие F‒подобных плазмид в клетках E. coli является существеннымфактором образования полицеллюлярных («ложно многоклеточных») форм упрокариот.

Характер влияния плазмид на формирование полицеллюлярных формE. coli связан с их генетическими особенностями и синтезируемыми под ихконтролем специфических поверхностных образований (конъюгативных пилей).Это может служить фактором повышенного риска возникновения антимикробнойустойчивости и неблагоприятного развития инфекционного процесса в организмечеловека и животных.Биологическиактивныепептиды.Широкоиспользуемымметодомвисследованиях агрегации биологически активных пептидов в мономерном иагрегатном (олигомерном) состоянии является динамическое светорассеяние.DLS‒метод дает возможность провести экспериментальный анализ существующейсвязи между размерами агрегата пептида, его биологической активностью иэффективностью интернализации. Нами исследована дисперсность образцовсинтезированных и природных биорегуляторных пептидов на основании анализагистограмм численного и объёмного распределения по размеру частиц в растворахпептидов.

Биорегуляторы выделены экстракцией физиологическим раствором(Т=40С) из измельченных тканей печени крыс. Содержание белка во фракциях21супернатанта печени крыс (СПК)после центрифугирования определяли по%уравнению Кристиана – Варбурга: С (мг/мл) =Е%см · Аbs280 ‒ Есм · Аbs2603Методом DLS контролировали размер агрегатов в растворах СПК следующихразведений (мг/мл): 2·10-4; 1·10-3; 1·10-2; 1·10-1 (рис. 6).

Характеристики

Список файлов диссертации