Диссертация (1151577), страница 10
Текст из файла (страница 10)
№ 7.Ткани матки обладали средним уровнем эхогенности, плоды обнаруживалисьна протяжении всего правого и левого рога матки. В полях зрения выявлялисьанэхогенная амниотическая жидкость, стенки плодной части плаценты, осевойскелет и биение сердца плода (Рис. № 6).Изучение влияния препаратов селена на морфофизиологию щитовиднойжелезы крольчих в периоды беременности (n = 3) и родов (n = 3) проведено навтором этапе эксперимента.На третьем этапе изучали влияние препаратов «Е-селен» и «Селенолин®»на гистофизиологию щитовидной железы и тиреоидный статус крольчих (n =3).На четвертом и пятом этапах эксперимента изучали морфологические ифизиологические эффекты, вызываемые, в щитовидной железе крольчихкомбинированным применением препаратов селена и йода в период «6 месяцев,эструс → 15 суток беременности» (n = 18).52Рис.
№ 7. Структура исследовательской части диссертационной работы,(количество суток с момента введения препаратов).Анатомо-гистологическиеметоды:определениемассытелаищитовидной железы крольчих, измерение диаметра длины и толщины долейжелезы. Материалом для гистологического исследования служили пробы и53щитовидной железы от половозрелых самок всех исследуемых групп.Гистологический материал фиксировали в 10% растворе нейтральногоформалинаижидкостиКарнуа,проводиличерезбатареюспиртоввозрастающей крепости и заливали в парафин.
Срезы толщиной 5-6 мкмокрашивалигематоксилиномМайераиэозином,углеводсодержащиебиополимеры выявляли по Хочкису, РНК ядрышек и цитоплазмы выявляли пометоду Браше (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996). Световую микроскопиюосуществлялиприпомощимикроскопаMicrosMSD500(Австрия),оснащенного цифровой камерой.При проведении гистохимических реакций нами проведена следующаяметодика: на предметные стекла наклеивали серию парафин – целлоидиновыхсрезов образцов ткани железы, взятых от животных разных функциональныхсостояний и, одномоментно, в соответствии с методикой, стѐкла погружали врастворы. Приготовление гистопрепаратов, исследование гистоструктурыщитовидной железы, морфометрию ее структур, статистическую обработкуполученных данных и их корреляционный анализ проводили в условияхкафедрыморфологии,физиологииипатологииФГБОУВПО«Оренбургский ГАУ».Цитологические исследования проб щитовидных железы (0,025 см3 для изготовления ультратонких срезов) начинали с фиксации в охлажденном2,5% растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН 7,4).После общепринятой подготовки и дегидратации, материал заключали в смесьэпон-аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) изготавливали срезы толщиной0,07-0,08 мкм, которые окрашивали 1% раствором толуидинового синего,приготовленного на 2,5% безводной соде.
Электронную микроскопиюпроизводили на микроскопе JEM – 7A (Япония). Получение ультратонкихсрезов и их электронную микроскопию осуществляли на базе лабораторииэлектронной микроскопии ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластическойхирургии Росздрава» (г. Уфа).54Морфометрические исследования цито- и гистоструктур щитовиднойжелезы, количественную информацию об объемах и других параметрахклеточных структур, их ядер, наружных диаметрах сосудов ГМЦР получалипри использовании винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ15150-69) и лицензионной программы «ТестМорфо - 4.0 ».
В процессегистереометрическихисследованийоценивалиудельныеплощадигистологических структур с помощью окулярных вставок: измерительныхлинеек, контрольных точек для работы по исчислению объема структур(Автандилов Г.Г., 2002). В отдельном образце ткани измерение каждогопоказателя осуществляли не менее чем в 10 полях зрения каждого объекта.Физиологические методы: определение концентрации общего Т3, Т4 иТТГ проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа сиспользованием наборов реагентов – «Т4 общий – ИФА - БЕСТ»; «Т3 общий ИФА - БЕСТ»; «Тироид ИФА - ТТГ» (Россия) на спектрофотометре MultiscanLabsystems (Финляндия). Исследование концентрации гормонов в сывороткекрови крольчих проводили на базе проблемной лаборатории по изучениюмеханизмовестественногоиммунитета«ОренбургскойГМА».Гематологическое и биохимическое исследование крови проводили нагематологическом (еMedoniс СА 620) и биохимическом (ERBA XL-200)анализаторах.
Определяли количество: гемоглобина; эритроцитов; лейкоцитов;общего белка; белка по фракциям (α, β, γ); АсАТ; АлАТ. Биохимический игематологический анализ крови проводили в лаборатории испытательногоцентра при ВНИИМС РАСХН.Химико-аналитическое исследование количественного содержанияселенавсывороткекрови,осуществлялиусовершенствованнымфлуориметрическим методом (Anipko V.V., Maryakhina V.S., Abramova L.L.,2011), на спектрофлуориметре SOLAR CM-2203. Сыворотку крови получалипутем отделения клеточных элементов крови на центрифуге EU Imtex CM-50при 8000 об/мин в течение 10 минут.
Исследование концентрации селена в55сыворотке крови проводили на базе института «Микро- и нанотехнологий» приФГБУ ВПО «Оренбургский ГУ».Статистическаяобработкаданныхрезультатовисследованийзаключалась в построении вариационных рядов, определении средних величинпоказателей вариации и проверке нормальности распределений полученныхданных при использовании программы «Microsoft Excel». Для оценки различийдвух групп показателей применяли критерий достоверности Стъюдента.Взаимовлияние морфометрических показателей гистоструктур выражали черезкоэффициенты парной корреляции, построение регрессионных уравнений(Автандилов Г.Г., 1990, 2002).Названия анатомических, гистологических и эмбриологическихструктур и образований приведены в соответствии с Международной(Парижской)анатомическойигистологическойноменклатурой,уточненной на международных конгрессах, а русские эквиваленты – по 4ой редакции Международной ветеринарной анатомической номенклатуры(Зеленевский Н.В., 2003).563.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1 Гистофизиология щитовидной железы ремонтных крольчих в условияхэндемичного по микронутриентам Оренбуржья и на фоне примененияпрепаратов селенаРемонтные крольчихи – половозрелые самки в возрасте шести месяцев,которые замещают собой, выбывших из основного маточного поголовья,кролематок.Ввозрастешестимесяцевукрольчихнаступаетморфофункциональная зрелость, что характеризует их готовность к реализациирепродуктивного цикла (плодоношение, лактация). На скорость становленияполовой функции самок влияет уровень развития эндокринного аппарата,щитовидной железы в частности.Таблица 3. Концентрации гормонов (ТТГ, оТ4, оТ3) и селена в сыворотке крови ремонтныхкрольчих.Исследуемые группыКонтрольнаяI - опытнаяII - опытнаяТТГ, мкМЕ/мл0,32±0,0050,21±0,005***0,20±0,005***оТ4, нмоль/л15,73±0,21824,01±1,057***17,57±0,571**оТ3, нмоль/л1,20±0,0171,63±0,055***1,83±0,052***Se, мкг/мл0,013±0,00040,041±0,0008***0,055±0,0012***Примечание: статистически достоверные отличия по сравнению с контрольной группойживотных ** (р≤0,01); *** (р≤0,001)ГормоныСкрининговый тест на гормоны щитовидной железы у ремонтныхкрольчих контрольной группы показал низкие концентрации оТ 4 и оТ3,при этом значение ТТГ не выходило за пределы физиологической нормы(табл.
3). Базовый уровень селена в сыворотке крови ремонтных крольчихконтрольной группы показал минимальную вариативность данногопоказателя в общей выборке (n=10).У крольчих первой опытной группы на 10–11 сутки с моментавведения препарата «Е-селен» было отмечено достоверное повышениеконцентрации оТ4 – на 52,6% (р≤0,001), оТ3 – на 35,8% (р≤0,001) ипонижение ТТГ – на 34,3%, относительно контрольных цифр.
Послезавершения биоассимиляции введѐнного препарата количество селенапревышало исходные данные более, чем в два раза (р≤0,001).57Во второй опытной группе во временнóм интервале 10–11 суток смомента введения препарата «Селенолин ®» тенденция к увеличениюсодержания тиреоидных гормонов в крови сохранялась, однако для оТ 4 онабыла менее выражена – 11,7% (р≤0,01), тогда как интенсивность приростаоТ3 была максимальной для всех групп – 52,5% (р≤0,001). Так жерегистрировали понижение уровня ТТГ – на 37,5% и увеличениенасыщенностикровиселеномболее,чемвтрираза(р≤0,001),относительно контроля.Гематологические и биохимические показатели крольчих опытных группбыли идентичны контрольной и прибывали в диапазоне референсных значенийнормы (табл.
4).Таблица 4. Основные гематологические и биохимические показатели ремонтных крольчихвсех исследуемых групп (n = 12).Исследуемые группыКонтрольI - опытнаяII - опытнаяHb, г/л100,0-150,0122,0±0,90128,0±1,20**131,0±0,90***Er, 1012/л4,0-8,05,9±0,066,1±0,04*6,2±0,01*9Leu, 10 л5,0-12,57,9±0,568,3±0,029,2±0,04*Общий белок, г/л54,0-83,062,2±0,5262,6±1,3163,2±1,40Альбумин, г/л27,0-46,039,0±0,3640,0±0,6841,2±0,14***АсАТ, ед./л14,0-113,063,4 ±1,0649,2 ±3,7247,5±2,17АлАТ, ед./л48,0-80,050,7 ±2,0951,6±3,0450,19±4,03Примечание: статистически достоверные отличия по сравнению с контрольной группойживотных * (р≤0,05); ** (р≤0,01); *** (р≤0,001)Показатель:НормаПри применении препаратов селена отмечали активизацию гемо- илимфопоэза,атакжеинтенсификациюпластическогообменахарактеризовавшуюся возрастанием концентрации альбуминов.У крольчих контрольной группы гистоархитектоника железыносила выраженный гетероморфный характер.
Фолликулы и тиреоидныйэпителий вариативны как по форме, так и по размеру. Сосудистое руслоинъецировано.Морфологическиеособенностиструктурщитовиднойжелезы, позволяли говорить о наличии в ней двух типов кластеров:нормофункциональных и с признаками гипофункции (Рис. № 8).58Реактивность структур каждого типа кластеров интерпретировалась отдельно,но с учетом морфологической общности тканей и информационных систем(сосуды, нервы) железы.51236А4БРис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
