Автореферат (1145715), страница 4
Текст из файла (страница 4)
4, «Б»). Однако при действиипропранолола и 2,5-ДМП снижение частоты НМ не было достоверным и продолжалоотличаться от контрольного уровня (рис. 4, «А»).Рис. 4. Частота НМ в клетках КМ (М±SE,%) самцов линии СВА после совместногодействия стрессоров – 2,5-ДМП «ДМП» (А) или иммобилизации «ИММ» (Б) иблокаторов стресс-гормонов метирапона «М» и пропранолола «П». «К» - контрольноевоздействие. Знаком плюс «+» - обозначено сочетанное воздействие двух факторов.Суммарно в экспериментах было использовано 66 самцов. Достоверно различающиесягруппы: «*» – p<0,05; «***» – p<0,001, ANOVA.Воздействия самих блокаторов (пропранолол или метирапон) не приводили кгенотоксическому эффекту на клетки КМ (рис.
4.).Таким образом, показано, что в возникновении генотоксического эффекта через 22 часапосле однократного воздействия 2-часового стрессора (2,5-ДМП или иммобилизации)принимают участие как глюкокортикоиды, так и катехоламины, причем последниедействуют через β-адренорецепторы. Фармакологический блок оси ГГН (воздействиеметирапоном) приводил к более выраженному протекторному эффекту, чем ингибированиеβ-адренорецепторов (воздействие пропранололом), что может быть связано спреобладающей ролью глюкокортикоидов в генотоксическом эффекте острого стресса.114. Изучение протекторного влияния ХСО при действии 2,5-ДМП.
Поскольку былопоказано, что хемосигналы самок-одиночек (ХСО) могут препятствовать гормональнымэффектам 2,5-ДМП (рис. 3.), было решено проверить, могут ли они препятствовать ивозникновению нарушений митоза в клетках КМ самцов мышей. В качестве источникаХСО использовали смесь подстилки 10-ти самок одиночек. Исследовали эффект отпредварительного 24-часового воздействия ХСО с последующим 24-часовым воздействием2,5-ДМП («предХСО+ДМП»), а также – эффект от одновременного 24-часовоговоздействия обоими хемосигналами («ДМП+ХСО») (рис. 5.).
Данные эффекты сравнивалис 24-часовым воздействием 2,5-ДМП, ХСО или контролем.Эксперимент был проведен в двух независимых повторностях. В обеих повторностяхэксперимента были обнаружены три следующих эффекта. Во-первых, был повторен эффектувеличения частоты НМ (в 2,1 раза, по сравнению с контролем) при 24-часовом действии2,5-ДМП. Во-вторых, было обнаружено, что одновременное действие 2,5-ДМП и ХСО«ДМП+ХСО» приводило к полному подавлению эффекта 2,5-ДМП и снижению частотыНМ до уровня группы «ХСО», который в первой повторности был даже ниже контрольного.В-третьих, было выявлено, что предварительное 24-часовое воздействие ХСО приводило кподавлению эффекта 2,5-ДМП и снижению частоты НМ до значений, не отличимых отконтрольных (рис. 5.).
При этом можно отметить, что, хотя частота НМ в группе«предХСО+ДМП» и переставала отличаться от контрольных значений, она все равно былавыше, чем в группе «ХСО» и «ДМП+ХСО».Рис. 5. Частота нарушений митоза (НМ)(М ± SE,%) в клетках КМ самцов мышейлинии СВА при действии 2,5-ДМП«ДМП», хемосигналов самок-одиночеклинии CBA «ХСО», а также ихсочетанного действия: «предХСО+ДМП»– 24-часовое воздействие ХСО, послекоторогоначинали24-часовоевоздействие ДМП; «ДМП+ХСО» –одновременное предоставление обоиххемосигналов на 24 часа. «К» - животныеконтрольной группы. Суммарно былоиспользовано 56 самцов («*» – p<0,05; «**»– p<0,01; «***» – p<0,001), ANOVA).Таким образом, было показано, что предоставление ХСО препятствовало возникновениюгенотоксического эффекта 2,5-ДМП как при предварительной экспозиции, так и приодновременном воздействии, причем в последнем случае наблюдалась полнаянейтрализация эффекта 2,5-ДМП.
Кроме того, в первой повторности был обнаружен эффектснижения частоты «спонтанных» нарушений митоза при действии ХСО в 2,1 раза, посравнению с контролем (рис. 5.), однако во второй повторности частота НМ междугруппами не различалась.5. Изучение влияния 2,5-ДМП и ХСО на активацию обонятельных луковиц (ОЛ)самцов мышей. Поскольку на гормональном уровне эффект 2,5-ДМП при одновременномдействии ХСО уже полностью подавлен (что видно из рис. 5.), то взаимное перекрываниепутей действия 2,5-ДМП и ХСО должно происходить на более ранних этапахорганизменного ответа на хемосигналы: на уровне рецепции в обонятельных зонах или науровне «интерпретации» хемосигналов в головном мозге. Для проверки этой гипотезы был12проведен эксперимент по изучению ответа главных ОЛ на предоставление 2,5-ДМП и ХСОметодом функциональной магнитно-резонансной томографии (фМРТ) (рис.
6, 7.).Рис.6.Изменениеуровняоксигенации(BOLD-ответа)вглавных ОЛ в ответ напредъявление самцамBALB/cзапаховогостимула (серые участкинаграфиках),посравнению с базальнымуровнем (белые участкина графиках). ОбластиОЛ(А),снизившиеактивность при действии2,5-ДМП,и(Б)увеличившие активностьпри действии ХСО.Метод фМРТ, оценивая относительный уровень оксигенации (BOLD-контраст)различных областей мозга, демонстрирует активацию (при увеличении уровняоксигенации) или, наоборот, инактивацию (при снижении уровня оксигенации) данных зон.В результате проведенного эксперимента было обнаружено три основных эффекта.Рис. 7.
Оценка активации главных ОЛ (по изменению уровня BOLD-контраста) (М ±SE, %) самцов мышей BALB/c в ответ на предъявление хемосигналов самок-одиночек(ХСО) и 2,5-ДМП. (А) Амплитуда изменения BOLD-контраста (%) при предъявленииразличных ольфакторных стимулов. (Б) Синие столбцы – площадь областей (пиксели) насрезе ОЛ, снизивших потребление кислорода при предъявлении запаховых стимулов,красные столбцы – площадь областей, увеличивших потребление кислорода. Междустолбцами, помеченными разными буквами (a, b, c), выявлены достоверные различия –p<0,05, LSD-тест.
Суммарно было использовано 15 самцов.13Во-первых, было показано, что 2,5-ДМП снижал активность нейронов ОЛ самцов мышейлинии BALB/c, причем сила инактивации была очень высокой (снижение BOLD-контрастана 8%) (рис. 6, «А», 7, «А»). Кроме того, не были выявлены области ОЛ, в которыхпроисходило бы повышение активности нейронов (рис. 6, «Б»). Данные о том, что 2,5-ДМПвызывал инактивацию ОЛ (рис. 6, 7; Глинин, 2014), были перепроверены и подтвержденыдругими исследователями на самцах мышей линии CD1, причем было показано, чтоинактивация происходила не только в ОЛ, но и в нейрональных центрах вторичнойобработки информации (Akulov et al., 2016).Во-вторых, было показано, что воздействие ХСО, напротив, приводило к увеличениюактивности ОЛ (увеличение BOLD-контраста на 3%) (рис.
6, «Б», 7, «А»). Кроме того, небыло выявлено областей ОЛ, в которых происходило бы снижение активности нейронов(рис. 7, «Б»).В-третьих, было обнаружено, что совместное предоставление 2,5-ДМП и ХСОприводило к частичному подавлению эффектов обоих хемосигналов (рис. 7, «Б»).Происходило снижение площади инактивированных зон, по сравнению с эффектом2,5-ДМП, а также – снижение площади активированных зон, по сравнению с эффектомХСО.Представляется наиболее вероятным, что перекрывание путей действия 2,5-ДМП и ХСОпроисходит уже на уровне ОЛ, и, по-видимому, может продолжаться в других областяхмозга, связанных с интерпретацией сигналов и индукцией организменных ответов наферомоны.6. Проверка роли обонятельного эпителия в реализации эффектов 2,5-ДМП и ХСОна стабильность геном клеток КМ.
Несмотря на то, что во всех экспериментах мыпроизводили воздействие 2,5-ДМП в 0,01% разведении, что является приближенным кприродной концентрации, в которой данный феромон выделяют сгруппированные самки(Novotny et al., 1986), оставалось неясным, действует ли данный хемосигнал исключительночерез обонятельную систему, или оказывает также и прямое влияние на клетки (например,всасывается через легкие в кровь и действует на клетки непосредственно).
Это же былонеясно и в отношении эффектов ХСО. Для решения данного вопроса был проведенэксперимент с предварительной инактивацией всех обонятельных зон мыши путемзакапывания в нос раствора сульфата цинка.Рис. 8. Частота нарушений митоза(%) в клетках КМ самцов линииСВА при действии 2,5-ДМП илиХСО,припредварительнойобработке сульфатом цинка «Zn»или физиологическим раствором.Подграфикомуказанысоотношения числа нарушениймитозов (НМ)к количествунормальных делений (НормД) –для каждой группы. Сверху указануровеньзначимостиразличиймежду группами, критерий χ2. Вэксперименте было использовано 26самцов.14В проведенном эксперименте на самцах линии СВА было выявлено, что, во-первых, самапо себе индукция аносмии при интраназальном введении солей цинка не приводила кувеличению частоты НМ в клетках КМ через 4 дня после закапывания (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
