Диссертация (1144749), страница 35
Текст из файла (страница 35)
В., 1998], данныедисперсионного анализа не подтвердили наличия значительного эффекта одномесячнойингаляции толуола на среднесуточное содержание биогенных аминов в структурахгипоталамуса, участвующих в регуляции эстральных циклов у самок крыс. Наличие болеесильного воздействия ксенобиотика, которое было обнаружено в настоящем эксперименте,возможно, объясняется повышением срока ингаляции с одного до двух месяцев. Кроме того,в предыдущих экспериментах в ряде случаев, несмотря на достаточно сильные изменениясреднесуточного содержания катехоламинов под влиянием толуола, эти сдвиги былистатистически недостоверными из-за высокого разброса данных. Полученные в этомисследовании результаты дают более четкую картину хронического воздействия ксенобиотикана среднесуточное содержание биогенных аминов в исследованных структурах гипоталамуса,возможно, благодаря усовершенствованию методики определения этих нейромедиаторов.НаблюдавшеесянамиповышениесреднесуточногосодержанияДАвСВ-Аркгипоталамуса после однократного введения ДМГ и после хронической ингаляции толуола,а также разнонаправленные изменения уровня НА в МПО гипоталамуса после примененияуказанных воздействий могут свидетельствовать о сложной реакции гипоталамо-гипофизарногозвена регуляции репродуктивной функции на экзогенно вводимые ксенобиотики.
При этомотличие в эффектах введения ДМГ на уровне МПО и СВ-Арк гипоталамуса может бытьобусловлено различным воздействием ксенобиотика на околосуточные ритмы содержаниябиогенных аминов и других нейромедиаторов в областях гипоталамуса, ответственныхза синтез и секрецию ГнРГ. Для дальнейшего выяснения вопроса о наличии или отсутствииспецифичности воздействия ксенобиотиков на катехоламинергическое звено регуляцииэстральных циклов нами было предложено исследовать влияние на изучаемые показателихронического потребления аминокислоты L-метионина, которая сама по себе не являетсяксенобиотиком, но образует в процессе своей деградации цитотоксичную аминокислоту ГЦи еще более токсичную L-гомоцистеиновую кислоту, а также АФК и таким образом можетвыступать в качестве источника эндогенных ксенобиотиков.1473.6.
Влияние метиониновой нагрузки (гипергомоцистеинемии) на суточную динамикуи среднесуточное содержание биогенных аминов в медиальной преоптической областии срединном возвышении с аркуатными ядрами гипоталамусаНаличие ГГЦ при хроническом принудительном потреблении экспериментальнымиживотными L-метионина было во всех случаях подтверждено путем прямого измерениясодержания общего ГЦ в сыворотке крови. Как видно из данных, представленныхна рисунке 3.24, отмечалось достоверное (p<0,01) повышение содержания общего ГЦ в периодформирования и терминации преовуляторного пика секреции ГнРГ (9:30 ч и 11 ч ЦВ,соответственно).25#20мкмоль/л#15105059:30циркадианное время, чконтроль11L-метионин– различие с показателем в то же время в контрольной группе достоверно(p<0,01; U-тест)Рисунок 3.24 – Влияние хронического воздействия L-метионинана суточную динамику уровня общего L-гомоцистеина в сыворотке кровисамок крыс на стадии проэструса (M±m, n=8-13)В результате проведенных исследований было обнаружено влияние алиментарной ГГЦна суточную динамику и среднесуточное содержание биогенных аминов в структурахгипоталамуса, ответственных за синтез и секрецию ГнРГ.
Так, при исследовании содержанияНА в МПО гипоталамуса в контроле была обнаружена сходная с описанной выше динамикаизменений уровня этого нейромедиатора с характерным достоверным (U=22; p<0,05)повышением его содержания в дневное время (9:30 ч ЦВ) и снижением в вечерние часы148(11 ч ЦВ). Обнаруженная динамика исчезала на фоне одномесячного курса пероральноговведения L-метионина. В этих условиях уровень НА сохранялся практически одинаковымво всех трех временных точках (рисунок 3.25).3520#*3016*нг/мг белканг/мг белка25201512810450059: 30циркадианное время, чконтроль1159:30циркадианное время, чконтрольL-метионин11L-метионин* – различие с показателем в 11 ч циркадианного* – различие с показателем в 9:30 чвремени в той же группе (контроль) достоверноциркадианного времени в той же группе(p<0,05; U-тест)Рисунок 3.25 – Влияние хроническоговоздействия L-метионина на суточную(контроль) достоверно (p<0,05; U-тест);– различие с показателем в то же времяв контрольной группе достоверно(p<0,05; U-тест)динамику содержания норадреналинав медиальной преоптической областигипоталамуса самок крыс на стадиипроэструса (M±m, n=9-12)Рисунок 3.26 – Влияние хроническоговоздействия L-метионина на суточнуюдинамику содержания дофаминав срединном возвышении с аркуатнымиядрами гипоталамуса самок крысна стадии проэструса(M±m, нг/мг белка; n=9-13)При исследовании суточной динамики содержания ДА в СВ-Арк гипоталамуса былоустановлено, что в контроле наблюдается суточное изменение уровня нейромедиатора схарактерным повышением в вечерней временной точке (U=25; p<0,05).
При введенииL-метионина наблюдалосьисчезновение нормальнойсуточнойдинамикисодержаниянейромедиатора, при этом имели место достоверное (U=39; p<0,05) по сравнению с контролем149повышение уровня этого моноамина в 9:30 ч ЦВ и тенденция к снижению этого показателяк 11 ч ЦВ (рисунок 3.26, таблица 3.6). Дополнительно к этому в той же самойгипоталамической структуре была обнаружена тенденция к повышению содержания другогомоноамина, НА, и также в 9:30 ч ЦВ, при этом не отмечалось достоверных изменений данныхпоказателей в другой гипоталамической структуре – в МПО (таблица 3.6).Таблица 3.6 – Влияние алиментарной гипергомоцистеинемиина содержание норадреналина и дофамина в медиальной преоптическойобласти и срединном возвышении с аркуатными ядрами гипоталамуса самоккрыс на стадии проэструса в 9:30 ч циркадианного времени(M±m, нг/мг белка; n=12-13)ПоказательКонтрольL-метионинНА в МПО27,2±1,726,2± 1,7ДА в МПО6,0±0,36,4±0,4НА в СВ-Арк23,1±1,426,9±1,3ДА в СВ-Арк13,5±0,716,1± 0,7Примечание:– различие с соответствующим показателем в контрольной группедостоверно (p<0,05; U-тест).Исследование уровня ДА в МПО и НА в СВ-Арк гипоталамуса не выявило суточнойдинамики содержания этих нейромедиаторов ни в группе контроля, ни в группе животных,подвергшихся метиониновой нагрузке.ОпределениежесреднесуточногосодержанияНАвМПОгипоталамусапри объединении данных, полученных во всех трех временных точках (5 ч, 9:30 ч и 11 ч ЦВ),показало, что после принудительного перорального введения L-метионина в течение месяцапроисходитдостоверное(U=409;p<0,05)повышениесодержаниянейромедиаторапо сравнению с контролем.
В группе животных, получавших L-метионин, оно составило27,2±1,0 нг/мг белка, а в контрольной группе – 23,7±0,9 нг/мг белка.В результате изучения среднесуточных уровней ДА и 5-ОИУК в МПО гипоталамусастатистически значимые различия при сравнении контрольных и опытных животных выявленыне были. Так, среднесуточное содержание ДА в этой гипоталамической структуре в группеживотных,потреблявшихL-метионин,достовернонеотличалосьотсодержаниянейромедиатора в группе контроля и составило: 27,0±0,9 нг/мг белка и 24,9±1,1 нг/мг белка,150соответственно. Имела место лишь тенденция к повышению содержания среднесуточногоуровня этого биогенного амина при введении L-метионина.
В литературе имеются данныео повышении содержания НА в данной структуре гипоталамуса при метиониновой нагрузке.По мнению авторов, ГЦ индуцирует увеличение секреции ЛГ гипофизом. Это происходитвследствие ингибирования активности КОМТ в СВ-Арк гипоталамуса, в результате чегои происходит накопление НА в МПО гипоталамуса [Ladosky W., Azambuja H.
M.,Schneider H. T., 1983].Также при объединении данных, полученных во всех трех временных точках (5 ч, 9:30 чи 11 ч ЦВ), нами не было выявлено статистически значимых различий в среднесуточномсодержании НА, ДА и 5-ОИУК в СВ-Арк гипоталамуса между контрольной и опытнойгруппами животных. Так, например, среднесуточное содержание НА в этой гипоталамическойструктуре в группе животных, потреблявших L-метионин, достоверно не отличалось от уровнянейромедиатора в группе контроля (27,0±0,9 нг/мг белка и 24,9±1,1 нг/мг белка,соответственно). Имела место лишь тенденция к повышению содержания данного биогенногоамина при введении L-метионина.Согласно современным представлениям, ДА и особенно НА считаются позитивнымирегуляторами синтеза ГнРГ в МПО гипоталамуса самок крыс.
Активация норадренергическихнейронов, иннервирующих данную гипоталамическую структуру, в дневные часы на стадиипроэструса играет важную роль в формировании преовуляторного пика секреции ГнРГ[Herbison A. E., 1997].Что же касается секреции ГнРГ из СВ гипоталамуса, то ДА, в противоположность НА,рассматривается как негативный регулятор. В отношении 5-ОТ известно его ингибирующеевлияние на продукцию ГнРГ. Как было показано выше, для исследованных нами биогенныхаминов на стадии проэструса характерна суточная динамика их содержания в МПО и СВ-Аркгипоталамуса, связанная с регуляторной ролью этих нейромедиаторов в формированиипреовуляторного пика секреции ГнРГ.Отмеченное в данном исследовании изменение суточной динамики и среднесуточногосодержаниякатехоламиновприметиониновойнагрузкевструктурахгипоталамуса,ответственных за синтез и секрецию ГнРГ, подтверждает адекватность использованиядля создания ГГЦ модели принудительного кормления животных L-метионином.
Можнопредположить, что исчезновение суточных ритмов содержания НА и ДА в данной модели ГГЦсвязано с изменениями в работе центрального осциллятора циркадианных ритмов и являетсяхарактернымначальнымрепродуктивной функции.признакомнарушенийнормальногофункционирования151Приведенные результаты указывают на то, что повышенное содержание общего ГЦвызывает нарушение катехоламинергической регуляции эстральных циклов у самок крыс,оказывая влияние на норадренергическую систему в МПО гипоталамуса и дофаминергическуюсистему в СВ-Арк гипоталамуса, что свидетельствует о негативном действии ГГЦ на процессысинтеза и секреции ГнРГ, находящиеся под контролем этих нейромедиаторных систем.Полученные данные дают основание рассматривать повышенное содержание общего ГЦв качестве фактора, одним из проявлений нейротоксичности которого является нарушениегипоталамической регуляции овариальных циклов, что ставит его в один ряд с другими ранееизученными в нашей лаборатории ксенобиотиками.Обнаруженные нами изменения в содержании отдельных нейромедиаторов в структурахгипоталамуса самок крыс при ГГЦ требуют дальнейшего исследования.
В последнее времяинтерес к ГГЦ в основном связывают с изучением дегенеративных заболеваний нервнойсистемы, при которых все больше исследователей отмечают повышенный уровень общего ГЦв сыворотке крови. Однако механизм этого повышения пока еще остается недостаточноизученным, поэтому исследователи используют различные экспериментальные моделидля изучения влияния ГГЦ на физиологические и биохимические показатели структур мозга.Так, рядом ученых было обнаружено, что у крыс, находящихся на диете с высокимпотреблением L-метионина, снижено содержание 5-ОТ и ДА в коре головного мозга [Gao L.et al.,.
2012]. Другие исследователи, используя модель ГГЦ, вызванную диетой с дефицитомфолиевой кислоты, также отмечали изменения метаболизма биогенных аминов и снижениеглутатиона в мозге животных [Kronenberg G. et al., 2008]. Имеются сведения о том,что введение ГЦ увеличивает содержание X-бокс-связывающего белка-1 в таких отделах мозгамышей, как гиппокамп, гипоталамус и кора.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
