Диссертация (1141412), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Всвязи с тем,что различия в извлекающей способности данных экстрагентов минимальны, а в качествелекарственной формы мы прелогаем водное извлечение, то рекомендуем использовать вкачестве экстрагента воду очищенную.Таким образом, предлогаем принять в качестве нормы содержания экстрактивныхвеществ, извлекаемых указанным растворителем не менее 22%.984.3 Результаты определения суммы флавоноидовФлавоноиды являются наиболее широко распространенной группой фенольныхсоединений растительного происхождения [219, 221, 225]. Согласно современным научнымизысканиям обнаружено более 6500 флавоноидов [244].За последние годы было опубликовано большое количество работ, посвященныхизучению противовоспалительной активности флавоноидных соединений с перспективой ихприменения для профилактики и лечения воспалительных заболеваний различного генеза. Вкачестве механизмов противовоспалительного действия флавоноидов были установленыантиоксидантная активность, ингибирование эйкозанов и ряд других [1, 53, 221].Антиоксидантные свойства флавоноидов позволяют рассматривать растительныепрепараты на их основе в качестве потенциальных средств для лечения сердечно-сосудистыхзаболеваний [156, 193, 220], заболеваний печени, в онкологии [13, 89, 124, 125, 156, 186, 220,221, 230], а также в терапии язвенной болезни желудка и кишечника [236].Флавоноиды проявляют свою фармакологическую активность, как в качестве средств спрямым антиоксидантным действием, так и опосредованно за счет регулирования активностиферментативныхсистеморганизма,вчастностиспособныингибироватьклеточнуюпролиферацию, что обуславливает их антибактериальное и противовирусное действие [156,180, 206].
Была установлена их способность корректировать последствия сахарного диабета[156]. Флавоноиды ингибируют альдозоредуктазу,активируют регенерацию островковЛангерганса и стимулируют выработку инсулина [156, 203].Наряду с перечисленными выше видами фармакологической активности флавоноидытакже проявляют иммуномодулирующие [113, 125, 156, 186, 221,], антимутагенные [180, 206],диуретические [89, 156], омолаживающие [230], антигистаминные свойства. Флавоноидырекомендовано применять с целью профилактики инсультов [89, 203, 2011, 220, 230].В соответствии с результатами собственных исследований и данных научныхпубликаций [глава 1 раздел 1.2], одним из перспективных классов природных соединений втраве кульбабы осенней и в траве кульбабы шершавоволосистой являются флавоноиды, посодержанию которых рационально оценивать качество данных видов сырья.
Таким образом, сцельюстандартизациитравыизучаемыхвидов,намибылапредложенаметодикаколичественного определения суммы флавоноидов.Для установления содержания соединений флавоноидной природы используютсяразличные методы: гравиметрия, флуориметрия, денситометрия, полярография, кислотно-99основноетитрованиявневодныхсредах,амперометрическоетитрование,фотоэлектроколориметрия и спектрофотометрия [138, 223].Имеются сведения о количественном определении флавоноидов в лекарственныхрастительных средствах с использованием газовой хроматографии и масс-спектроскопии [224].В последние время возросло количество публикаций о применении масс-спектрометрическогоопределения флавоноидов в растительных извлечениях, как самостоятельно, так и вкомбинации с другими методами [224, 244].
Тем не менее, до сих пор наиболее частоприменяемым остается дифференциальный метод спектрофотометрического определенияфлавоноидов в видимой спектральной области [16, 51].4.3.1 Результаты разработки методики определения содержания суммы флавоноидовДля количественного определения суммы флавоноидов в сырье кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой нами была предложена методика спектрофотометрическогоопределения после предварительного проведения реакции комплексообразования с растворомалюминия хлорида.
Вызванный взаимодействием с раствором алюминия хлорида батохромныйсдвиг оптической плотности позволяет нивелировать присутствие в траве кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой веществ не флавоноидной природы, обладающих оптическойплотностью, совпадающей с максимумом поглощения суммы флавоноидов [45, 91, 192, 223].Разработку методики проводили на сырье кульбабы осенней.Для этого нами изучались следующие стадии разработки методики:−определение оптимальных условий экстрагирования;−изучение влияния сопутствующих фенольных соединений не флавоноиднойприроды на спектральные характеристики извлечений из сырья без добавления раствораалюминия хлорида и после его добавления;−оптимизация процесса комплексообразования с анализируемым извлечением.Изучение условий спектрофотометрического определения суммы флавоноидовКоличественная экстракция является первой стадией при проведении определенияискомых веществ, в том числе и флавоноидов.
Процесс извлечения флавоноидов израстительного сырья зависит от ряда факторов: измельченности растительного сырья, времениего экстракции, типа экстрагента, соотношения массы сырья к объему растворителя.100Измельченность сырья определяет количественный переход исследуемых соединений изклеточной среды в среду экстрагента [68].Результаты проведенных исследований по выбору оптимальной степени измельчения,обеспечивающую максимальную экстракцию суммы флавоноидов из растительного сырьяприведены в таблице 14.Таблица 14 – Влияние степени измельчения сырья на количественный выходфлавоноидов из травы кульбабы осеннейСодержание суммы флавоноидов(на абсолютно сухое сырье), %0,50,50±0,0210,64±0,0220,45±0,0130,35±0,01Данные приведенные в таблице 14, демонстрируют максимальное извлечениеСтепень измельченности, ммфлавоноидов из травы кульбабы осенней при размере частиц растительного сырья, проходящихсквозь сито с диаметром отверстий 1 мм.
Полученные нами результаты степени измельченияиспользовались при дальнейшей разработке методики.В качестве экстрагентов для извлечения флавоноидов из растительного сырьятрадиционно используют спирт этиловый и его водно-спиртовые смеси различныхконцентраций [244]. Нами были изучены экстрагирующие свойства различных концентрацийспирта этилового.Данные о полноте экстракции приведены в таблице 15.
Они демонстрируют наиболееполное извлечение флавоноидов при использовании в качестве экстрагента спирта этилового70%. Спирт этиловый 70% применялся нами для экстракции из растительного сырья вдальнейшем при разработке методики.Таблица 15 – Зависимость полноты экстракции суммы флавоноидов из травы кульбабыосенней от концентрации спирта этиловогоКонцентрация спиртаСодержание суммы флавоноидовэтилового, %(на абсолютно сухое сырье), %30%0,52±0,0250%0,57±0,0270%0,63±0,0296%0,46±0,01На следующем этапе разработки методики нами изучалось оптимальное времяэкстракции. Максимальное извлечение флавоноидов из травы кульбабы осенней происходилопри нагревании на кипящей водяной бане сырья со спиртом этиловым 70% с обратнымхолодильником в течение 45 минут (таблица 16).101Таблица 16 – Зависимость полноты извлечения флавоноидов из травы кульбабы осеннейот времени экстракцииСодержание суммы флавоноидов(на абсолютно сухое сырье), %300,55±0,02450,63±0,02600,66±0.02750,64±0,02В ходе проведения спектрофотометрического анализа флавоноидов, извлекаемых изВремя экстракции, минрастительного сырья, применяют различные комплексообразующие соединения, в качествекоторых используют соли двухвалентных и трехвалентных металлов [138, 223].Для разработки методики нами была использована реакция комплексообразования салюминия хлоридом, растворенным в используемом экстрагенте.
Данные об использованииразличных концентраций и объемов раствора алюминия хлорида приведены в таблицах 17, 18.На основании полученных данных для проведения фотометрической реакции для травыкульбабы осенней в дальнейшем использовали раствор алюминия хлорида 2%.Таблица 17 – Влияние объема спиртового раствора алюминия хлорида 2% на полнотупротекания реакции комплексообразования с суммой флавоноидовКоличество раствораалюминия хлорида 2%, мл123Содержание суммы флавоноидов(на абсолютно сухое сырье), %0,57±0,020,62±0,020,63±0,02Таблица 18 – Влияние концентрации спиртового раствора алюминия хлорида на полнотупротекания реакции комплексообразованияКонцентрация раствораСодержание суммы флавоноидовалюминия хлорида, %(на абсолютно сухое сырье), %10,61±0,0220,62±0,0230,64±0,02Результаты, приведенные в таблице 18, демонстрируют максимальное извлечение суммыфлавоноидов при добавлении 2 мл раствора алюминия хлорида 2%.
Таким образом, мы решилииспользовать при разработке методики раствор алюминия хлорида 2% объемом 2 мл.Максимум поглощения спиртового извлечения после добавления раствора алюминияхлорида наблюдается при длине волны 395 нм и совпадает с максимумом поглощениястандартного образца лютеолин-7-гликозида (цинарозида) с раствором алюминия хлорида,используемого нами в разработке методике в качестве стандартного образца (рисунок 60).Данная спектральная область удалена от спектров поглощения сопутствующих оптически102активных веществ, присутствующих в извлечениях из травы кульбабы осенней.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
