Диссертация (1141412), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Вкус водного извлечения – горький.2. Впервые установлены микродиагностические признаки сырья «Кульбабы трава».При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности установлено, что клетки верхнегоэпидермисаслабоизвилистостенные,многоугольные,паренхимнойформыилипрямоугольные. Клетки нижнего эпидермиса более извилистостенные.
Устьичный аппаратаномоцитного типа. Эпидермис листьев и стеблей опушен четырех-семи клеточными,тонкостенными волосками, стенки клеток которых часто спадаются и перекручиваются, укульбабы шершавоволосистой встречаются и многоклеточные, многорядные, ветвистыеволоски (древовидные волоски). Эпидермис зубцов венчика представлен клетками ссосочковиднымивыростами.Эпидермиструбкивенчикаопушендлиннымимногоклеточными, многорядными волосками с однорядной или многорядной верхушкой,конечная клетка которых заострена, а также простыми тонкостенными многоклеточнымиволосками иногда со спадающимися стенками клеток. Клетки эпидермиса обвертки содержатбурое содержимое.
Листочки обвертки опушены простыми волосками различного типа:многоклеточными тонкостенными со спадающимися стенками, часто перекрученными;многоклеточными многорядными с заостренной конечной клеткой и одно- или многоряднойверхушкой;одно-двуклеточнымисизвилистойкутикулой(кульбабаосенняя),многоклеточными, многорядными, ветвистыми волосками (древовидные волоски); ипростыми одно-четырехклеточными тонкостенными волосками, с оттянутой или тупойверхушкой, со спадающимися стенками (кульбаба шершавоволосистая). Наряду с волоскамидиагностическим признаком является присутствие млечников вдоль жилки листа илисточков обвертки.3.
Впервые установлены числовые показатели качества сырья растений рода кульбаба:содержание общей золы - не более 9%, золы, нерастворимой в растворе кислотыхлористоводородной 10% - не более 2%, влажность - не более 13%, экстрактивных веществ,121извлекаемых водой очищенной - не менее 22%.4. Впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммыфлавоноидов для травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой в пересчете нацинарозид. Максимальный выход флавоноидов происходит при экстракции растительногосырья проходящего сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм в течении 45 минут спиртомэтиловым 70% и измерении оптической плотности раствора через 30 минут послеприбавления 2 мл раствора алюминия хлорида 2%. Проведена валидация разработаннойметодики.
Содержание суммы флавоноидов в исследуемых видах сырья колеблется от 0,55%до 0,83%. На основании этих данных установлена норма содержания флавоноидов врастениях рода кульбаба - не менее 0,5%. Ошибка методики количественного определениясуммы флавоноидов с 95% вероятностью не превышает 4,82%.5. Разработана методика гравиметрического определения полисахаридов для травыкульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой. Максимальный выход полисахаридовдостигается при проведении трехкратной экстракции водой очищенной в течении 30 минутрастительного сырья со степенью измельчения 1 мм и последующим осаждениемтрехкратным объемом спирта этилового 96%.
Проведена валидация разработаннойметодики. Содержание полисахаридов в изучаемых растениях колеблется от 9,34% до13,19%. Результаты исследования позволили установить норму содержания полисахаридов врастениях рода кульбаба - не менее 9,0%. Ошибка метода количественного определениясуммы полисахаридов с 95% вероятностью не превышает 4,17%.6. Разработан проект нормативного документа «Кульбабы трава».122ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬБАБЫОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ИХВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙПри выборе направлений фармакологического скрининга мы основывались на данныхоб использовании кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой в народной медицине,представленных в главе 1 [глава 1, раздел 1.3], а также на результатах собственныхисследований химического состава изучаемых видов. Таким образом, нами предложеныследующие векторы фармакологического скрининга:−изучение острой токсичности;−изучение антиоксидантной активности;−изучение отхаркивающего действия;−изучение противовоспалительной активности;−изучение антибактериальной активности.5.1 Результаты определения острой токсичностиДляизученияостройтоксичностиисследуемыефитокомплексы(настоииводорастворимые полисахаридные комплексы), полученные из травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой, вводили беспородным белым мышам различного пола массойот 18,0 г до 20,0 г [глава 2, раздел 2.6.1].Результаты проведенного эксперимента, отраженные в таблице 36, демонстрируют,что при введении в забрюшинное пространство изучаемых настоев в дозе от 1000 до 5000мг/кг и водорастворимых полисахаридных комплексов в дозе от 100 до 300 мг/кг неотмечалась гибель животных.Средняя летальная доза (LD50) в ходе проведения эксперимента не была установлена,так как при введении максимально допустимой дозы не наблюдалась гибель животных.Таким образом, было установлено, что исследуемые фитокомплексы не обладаюттоксичностью в анализированном диапазоне доз.Интерпретация полученных данных на основе классификации К.К.
Сидорова,позволяет отнести исследуемые фитокомплексы к классу практически нетоксичных веществ.123Таблица 36 – Результаты изучения острой токсичности настоев и водорастворимыхполисахаридных комплексов кульбабы осенней и кульбабы шершавоволоситойКоличество животныхживыхпогибшихКульбаба осенняя100060200060300060400060500060100602006030060Кульбаба шершавоволосистая100060200060300060400060500060100602006030060ФитокомплексДоза, мг/кгНастойВодорастворимыйполисахаридныйкомплексНастойВодорастворимыйполисахаридныйкомплекс5.2 Результаты определения антиоксидантной активностиВ настоящее время большое внимание медицинского сообщества обращено коксидативномустрессу.Оксидативныйстресспредставляетсобойокислительноеповреждение клеточных компонентов, вызванное воздействием реактивных форм кислорода,главным образом, свободными радикалами.Свободнорадикальное окисление являетсяонкологическихивоспалительныхзаболеваний,патофизиологическойсахарногодиабета,составляющейатеросклероза,катаракты, болезней Паркинсона и Альцгеймера, сердечно-сосудистых заболеваний ипроцессов старения [152, 237].Формирование естественных антиоксидантных механизмов осуществляется благодаряиспользованию в пищу продуктов, обладающих выраженными оксидазо-ингибирующимисвойствами [152].Важное значение в данном случае имеет потребление местного растительного сырья,содержащегонаиболееусваемыенутриентыантиоксидантной защиты организма [152].иобеспечивающегоподдержание124В настоящее время определение антиоксидантной активности проводят различнымиметодами: методом добавления содержащих антиоксиданты образцов в модельную реакциюокисления,хемилюминесцентным,спектрофотометрическим,кулонометрическимивольтамперометрическим методами [4, 78, 119, 178, 185].Несмотря на многообразие применяемых методов определения антиоксидантнойактивности, отсутствует общепринятая единица ее измерения, в связи с чем, получаемые сих помощью результаты, значительно отличаются.Наиболее универсальным методом является сравнение антиоксидантной активностиизучаемого объекта с антиоксидантной активностью сильного восстановителя.
В качествесубстратов восстановителей чаще всего используют известные флавоноидные соединения:рутин, кверцетин, цинарозид и дигидрокверцетин.Изучение антиоксидантной активности извлечений из кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистойвосстановительномобладающимипроводилиповзаимодействиивосстановительнымиметодике,междуоснованнойизвлеченнымисвойствами,иизрастворомнасырьякалияокислительновеществами,перманганата(окислителем) [глава 2, раздел 2.6.2].Анализируемые извлечения готовили в соотношении масса сырья – объем экстрагента1:10. Экстракцию проводили в течение 15 минут на кипящей водяной бане с обратнымхолодильником, после чего колбы охлаждали в течение 45 минут на воздухе. Охлажденныеизвлечения фильтровали через бумажные фильтры в мерные колбы и доводилисоответствующимрастворителемдопервоначальногообъема.Дляустановленияоптимальной извлекающей способности веществ восстановительного характера, определялиантиоксидантную активность в различных извлечениях.
В качестве экстрагентов применяливоду очищенную и спирт этиловый различных концентраций: 30%, 50%, 70% и 96%.Антиоксидантную активность определяли в пересчете на рутин, кверцетин и цинарозид,используемые в качестве стандартных растворов [119].Согласно литературным данным антиоксидантная активность растений объясняется восновном наличием фенольных соединений, в частности флавоноидов и гидроксикоричныхкислот [1, 60, 221]. Для выявления биологически активных веществ, обуславливающихантиоксидантную активность, в полученных извлечениях устанавливали количественноесодержание флавоноидов и суммы фенольных соединений. Количественное определениесуммы флавоноидов проводили в соответствии с ранее разработанной методикой [глава 4,раздел 4.3.1.].125Количественное содержание суммы фенольных соединений устанавливали методомпрямой спектрофотометрии в пересчете на хлорогеновую кислоту, для чего исследуемыйобъем анализируемого извлечения помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл,доводили до метки соответствующим экстрагентом, спектрофотометрировали при длиневолны 325 нм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
