Диссертация (1141404), страница 35
Текст из файла (страница 35)
Проводящие пучки боковых и центральнойжилок коллатерального типа. Сосудисто-волокнистый пучок включает сетчатые илестничные сосуды и спиральные трахеиды.Прицветники. Строение прицветника аналогично строению листа.Цветки. Эпидермис венчика с верхней и нижней стороны состоит измногоугольных прямостенных, почти изодиаметрических клеток (диаметром 5070 мкм) с сосочковидными выростами.
Сосочковидные выросты нижнегоэпидермиса развиты сильнее. Кутикула продольно-морщинистая. Устьицаотсутствуют. Пыльцевые зерна овальной формы, однобороздные, гетерополярныес гладкой поверхностью (длина 18-20 мкм, ширина 12-15 мкм).Цветонос. Эпидермис цветоноса представлен клетками прямоугольнойформы (длиной – 180-390 мкм, шириной – 22-30 мкм), стенки прямые, кутикуларовная.
Устьица тетрацитного типа, частота встречаемости устьиц – 23-28 на1мм2, размер аналогичен устьичным комплексам листа. В периферической частимезофилла цветоноса имеются клетки с пучками рафид оксалата кальция (50-65мкм), частота встречаемости клеток с рафидами 1,5-3 на 1 мм2.Луковица. Наружные чешуи представляют собой омертвевшие оболочки сполностью деформированными клетками паренхимы. Внешний и внутреннийэпидермисы наружной чешуи состоят из клеток прозенхимного типа сзакругленными углами и четковидные утолщениями. Длина клеток внешнегоэпидермиса – 100-210 мкм, ширина – 20-30 мкм.
Длина клеток внутреннегоэпидермиса – 90-200 мкм, ширина – 18-25 мкм.Запасающие чешуи по строению подобны листу. Внешний и внутреннийэпидермисы этих чешуй состоят из овальных клеток, слегка удлиненных втангентальном направлении или изодиаметрические. Длина клеток внешнегоэпидермиса – 110-220 мкм, ширина – 50-65 мкм.
Длина клеток внутреннегоэпидермиса – 100-215 мкм, ширина – 30-55 мкм. Основная паренхима их состоитиз тонкостенных округлой формы клеток (диаметром 70-95 мкм), заполненнымикрахмальными зернами округло-яйцевидной формы (диаметром 2,2-26 мкм).237Крупные крахмальные зёрна имеют 2-3-х, реже 4-х лучевую трещину. Внаружной части паренхимы чешуй наблюдаются клетки с рафидами (длиной 6075 мкм), которые расположены параллельно продольной оси луковицы в видепучков, частота встречаемости клеток с рафидами 2-3,5 на 1 мм2.
Проводящиепучки закрытого коллатерального типа с паренхимной обкладкой, расположеныближе к внутренней стороне чешуй, имеют слабо развитые сосудистую иситовидную части.Корни. Корень первичного строения, клетки эпидермиса крупные (20-30мкм), с утолщенной внешней стенкой, овальной формы, удлинены в радиальномнаправлении. Волоски представляют собой эпидермальные выросты длиной до230 мкм.
Клетки коровой паренхимы тонкостенные, округлой формы (25-35 мкм)с многочисленными межклетниками различного размера и формы. Во внешнейчасти коры имеется кольцо деформированной паренхимы. Внутренняя часть корыимеет клетки овально-многоугольной формы, которые удлинены в радиальномнаправлении (25-35 мкм). Центральный осевой цилиндр малого диаметра (45-50мкм). Древесинная часть корня состоит, как правило, из одного крупного сосуда итрех лучей сосудов малого диаметра (триархное строение). Флоэма представленатакже тремя лучами.
Эндодерма выражена нечетко.21aaРис. 1. Верхний эпидермис листа (1). Нижний эпидермис листа (2). a устьичный комплекс, Увел. 400×.238aРис. 2. Рафиды оксалата кальция в клетках мезофилла листа, Увел. 400×.12Рис. 3 . Эпидермис листочка околоцветника с внешней стороны. 1 – клеткиэпидермиса; 2 – сосочковидные выросты, Увел. 400×.23921aРис. 4. Эпидермис наружной чешуи с внешней стороны (1). Клетки паренхимызапасающей чешуи (2). a – крахмальные зерна, Увел. 400×.Определение основных групп биологически активных веществ1. Тонкослойная хроматография (амариллисовые алкалоиды)Приготовление растворовПриготовление раствора СО ликорина. Около 10,0 мг (точная навеска) СОликорина основания помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл ирастворяют в 8 мл 96 % спирта этилового при перемешивании. Доводят объёмраствора тем же спиртом до метки и перемешивают.
Срок хранения раствора 1мес.Приготовление модифицированного реактива Драгендорфа. Раствор I. 0,85г висмута нитрата основного растворяют в 40 мл воды и 10 мл уксусной кислоты,взбалтывают в течение 15 мин. Раствор II. 8 г калия йодида растворяют в 20 млводы. Растворы I и II смешивают (основной раствор). Непосредственно передприменением 10 мл основного раствора смешивают с 10 мл 1 % водного растворааскорбиновой кислоты и 10 мл 95 % этанола.Приготовление уксусной кислоты 20 %. 20,4 г уксусной кислотыразбавляют водой до 100 мл.Навеску 2,0 г измельчённого в ступке до кашицеобразного состояния сырьяпомещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 30мл 10% раствора аммиака, выдерживают в течение 30 мин при постоянномперемешивании.
Затем добавляют 15 мл хлороформа и встряхивают в течение 30240мин. Хлороформное извлечение сливают и повторяют операцию ещё два раза сновыми порциями хлороформа (по 15 мл). Извлечения объединяют, хлороформотгоняют и выпаривают досуха.Полученный остаток растворяют в 30 мл 10% раствора соляной кислоты.Кислый раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр, подщелачиваютраствором аммиака до pH= 9, затем снова последовательно экстрагируютхлороформом 3 раза по 20 мл. Извлечения объединяют, добавляют 10 гбезводного сульфата натрия, перемешивают и фильтруют через складчатыйбумажный фильтр. Затем хлороформ отгоняют, полученный остаток растворяют в3 мл метанола (испытуемый раствор).На стартовую линию аналитической хроматографической пластинки сослоем силикагеля на алюминиевой основе размером 10×15 см наносят раздельнополосами 50 мкл испытуемого раствора и 5 мкл СО ликорина.
Пластинку снанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в хроматографическуюкамеру, предварительно насыщенную в течение 1 часа смесью: диэтиловый эфир– метанол – диэтиламин (90:5:5) и хроматографируют восходящим способом вуказанной системе растворителей. Когда фронт растворителей пройдет около 80 –90 % длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают, высушивают навоздухе до удаления следов растворителей. Затем пластинку обрабатываютмодифицированным реактивом Драгендорфа и нагревают в сушильном шкафупри температуре 100-105 °С в течение 5 мин.На хроматограмме раствора СО ликорина должна обнаруживаться зонаадсорбции оранжевого цвета.На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зонаоранжевого цвета на уровне зоны СО ликорина; допускается обнаружениедополнительных зон.2.
Тонкослойная хроматография (флавоноиды)Приготовление растворов241Раствор стандартного образца (СО) кверцетина. Около 0,005 г СОкверцетина (кверцетина дигидрата) растворяют в 10 мл 96 % спирта этиловогопри перемешивании до полного растворения. Срок годности раствора не более 3мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.Раствор стандартного образца (СО) кемпферола. Около 0,005 г СОизорамнетина растворяют в 10 мл 96 % спирта этилового при перемешивании дополного растворения. Срок годности раствора не более 3 мес при хранении впрохладном, защищенном от света месте.Алюминия хлорида раствор 5 %.
5,0 г алюминия хлорида безводного или 9,0г алюминия хлорида 6-водного растворяют в 80 мл спирта этилового 70%,фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора темже спиртом до метки. Срок годности раствора 3 мес.Навеску 2,0 г измельчённого в ступке до кашицеобразного состояния сырьяпомещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25мл спирта 70 %. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают накипящей водяной бане в течение 45 минут, периодически встряхивают длясмывания частиц сырья со стенок.
После охлаждения до комнатной температурыизвлечение фильтруют через бумажный фильтр. Затем полученное спиртовоеизвлечение упаривают на водяной бане, остаток высушивают в сушильном шкафупри 110 °С в течение 10 минут, затем добавляют 10 мл 15% серной кислоты,перемешивают до растворения осадка. Полученный раствор помещают вконическую колбу, объемом 100 мл, присоединяют к обратному холодильнику,нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 часов. После охлаждения докомнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажныйфильтр. Осадок, оставшийся на фильтре, промывают водой очищенной,высушивают в сушильном шкафу при 110 °С в течение 10 минут и растворяют в 5мл горячего 96% этанола (испытуемый раствор).На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоемсиликагеля с флуоресцентным индикатором на алюминиевой подложке размером10 × 15 см наносят 20 мкл испытуемого раствора, рядом наносят 10 мкл растворастандартного образца СО кверцетина и СО кемпферола.
Пластинку снанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно242насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей н-бутанол – уксусная кислоталедяная – вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронтрастворителя пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, еевынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, затемобрабатывают алюминия хлорида раствором 5 % в спирте 70 %, после чегопросматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.На хроматограмме раствора СО кверцетина должна обнаруживаться зонаадсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета, на хроматограмме раствораСО кемпферола также должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценциейжелто-зеленого цвета.Нахроматограммеиспытуемогорастворадолжныобнаруживатьсяследующие зоны адсорбции: зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленогоцвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО кверцетина; зонаадсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета на уровне зоны адсорбции нахроматограммераствораСОкемпферола;допускаетсяобнаружениедополнительных зон адсорбции (флавоноиды).3.
Около 2,0 г измельчённого до кашицеобразного состояния помещают вконическую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл 2 %раствора серной кислоты, выдерживают в течение 40 мин на лабораторномвстряхивателе, затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр. 3 млполученного извлечения помещают в пробирку добавляют 3-5 капель 1% растворакремневольфрамовой кислоты. Появляется муть, переходящая в хлопьевидныйосадок (амариллисовые алкалоиды).4. Около 2,0 г измельченного в ступке до кашицеобразного состояния сырьяпомещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют10 мл спирта 70 %, нагревают с обратным холодильником на водяной бане втечение 30 мин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
