Диссертация (1141404), страница 36
Текст из файла (страница 36)
После охлаждения до комнатной температуры извлечениефильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор). К 5 мл извлеченияприбавляют 0,2 г порошка магния и 2 мл концентрированной кислоты243хлористоводороднойразведенной;постепеннодолжнопоявитьсярозовоеокрашивание (флавоноиды).ИСПЫТАНИЯВлажность. Не менее 80 %.Посторонние примесиОрганическая примесь. Не более 0,5 %.Минеральная примесь. Не более 1 %.Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье илекарственных растительных препаратах».Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержаниярадионуклидоввлекарственномрастительномсырьеилекарственных растительных препаратах».Остаточные количества пестицидов.
Определение проводят согласно ОФС«Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительномсырье и лекарственных растительных препаратах».Микробиологическая чистота. Определение проводят согласно ОФС«Микробиологическая чистота».Количественное определение.
Суммы амариллисовых алкалоидов впересчете на ликорин не менее 0,02 %.Сумма амариллисовых алкалоидовПриготовление растворовАцетата аммония раствор 20 Ммоль/л в воде. Около 1,542 г (точнаянавеска) ацетата аммония переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл,доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают. При необходимостипроводят дегазацию и фильтрацию через мембранный фильтр с размером пор неболее 0,45 мкм.Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1 л вносят100 мл ацетата аммония раствора 20 Ммоль/л в воде, добавляют 500 млацетонитрила и перемешивают, доводят объем колбы до метки ацетонитрилом иснова перемешивают.Приготовление стандартных растворов ликорина. Около 20 мг (точнаянавеска) субстанции ликорина растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в244ацетонитриле и доводят до метки тем же растворителем, получая стандартныйраствор ликорина концентрацией 200 мкг/мл (раствор А2).
10 мл раствора А2помещали в мерную колбу на 100 мл и доводят объем колбы тем жерастворителем до метки, получая раствор концентрацией 20 мкг/мл (раствор Б2). 1мл раствора А2 помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили объем колбы темже растворителем до метки, получая раствор концентрацией 2 мкг/мл (растворВ2).Приготовление калибровочных растворов ликорина.Для приготовления калибровочных растворов с концентрациейстандартного раствора ликорина 2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 25,0; 50,0 мкг/мл проводятразбавление стандартных растворов ацетонитрилом в соответствии с таблицей 1.Таблица 1.Приготовление калибровочных растворов ликоринаКонцентрацияКонцентрацияОбъемОбъемкалибровочногостандартногостандартногокалибровочногораствора, мкг/млраствора, мкг/млраствора, млраствора, мл2,5200,12515,0200,25110,0200,5115,0200,75125,02000,125150,02000,251Растворы хранят в плотно закрытой емкости в холодильнике не более 1 мес.Проверка пригодности хроматографической системы.Результаты анализа считаются достоверными, если выполняютсяследующие условия:1.
эффективность хроматографической колонки должна быть не менее не менее14 000 для пика ликорина;2. коэффициент симметрии для пика ликорина должен быть не менее 0,8 и неболее 1,5.Аналитическую пробу сырья растирают в ступке до кашицеобразногосостояния. Около 10,0 г (точная навеска) сырья помещают в центрифужнуюпробирку объемом 50 мл, добавляют 10 мл метанола, экстрагируют вультразвуковой ванне при комнатной температуре (25 °С) в течение 40 мин.После пробирку центрифугируют при 3500 об/мин в течение 10 мин,надосадочную жидкость переносят в колбу объемом 100 мл, остаток смешивают сновой порцией экстрагента и повторяют операцию еще два раза.
Растворительупаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при 60 °С, полученный245сухой остаток растворяют в 15 мл водного 5% раствора хлороводороднойкислоты. К полученному раствору добавляют 15 мл диэтилового эфира,встряхивают в течение 10 мин на лабораторном шейкере, верхний эфирный слойотбрасывают, экстракцию повторяют трижды. Водную фазу подщелачивают,добавляя 10% раствора аммиака до рН 9, затем проводят трехкратную экстракциюпо 20 мл хлороформа.
Хлороформные экстракты объединяют, добавляют 10 гбезводного сульфата натрия, перемешивают и фильтруют через складчатыйбумажныйфильтр.Органическийрастворительудаляютнавакуумномротационном испарителе при 60 °С. Полученный экстракт растворяют в 10 млподвижной фазы (испытуемый раствор). 1 мл испытуемого раствора помещают ввиалы для хроматографирования.Условия хроматографированияКолонка- 150×4,6 мм, сорбент поверхностнопористый непривитый силикагель (С18), 2,7мкм (HILIC)Предколонка- 5×4,6 мм, сорбент поверхностнопористый непривитый силикагель (С18), 2,7мкм (HILIC)ПФСмесь ацетонитрила с ацетата аммонияраствором 20 Ммоль/л в воде (9:1)Способ элюирования- изократическийСкорость потока- 0,8 мл/минТемпература- 35± 2°СколонкиДетектор- спектрофотометрический или диоднаяматрицаДлина волны- 290 нмОбъем пробы- 20 мкл246Время записи данных- 20 минХроматографируют калибровочный раствор СО ликорина с концентрацией10мкг/мл,получаянеменее3хроматограмм.Результатысчитаютсядостоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодностихроматографической системы».Хроматографируют последовательно калибровочные растворы и строяткалибровочный график зависимости площади СО ликорина от его концентрации.Затемхроматографируютиспытуемыйраствор,получаянеменее3хроматограмм.Расчет содержания суммы амариллисовых алкалоидов проводят методомвнешнего стандарта.
Обсчету подлежат пик ликорина, а также пики со спектрами,характерными для амариллисовых алкалоидов (максимумы поглощения при 235 и290 нм).Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на ликорин иабсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:=··· 10· (100 −)где S − сумма площадей пиков ликорина и других амариллисовых алкалоидовна хроматограмме испытуемого раствора;So − площадь пика на хроматограмме раствора СО ликорина;– концентрация стандартного раствора, мкг/млm – масса навески сырья, мкг;W – влажность сырья, %.Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на ликорин иабсолютно сухое сырье в процентах (X), используя калибровочный график,вычисляют по формуле:· 10=· (100 − )где: С – содержание суммы амариллисовых алкалоидов в 1 мл испытуемогораствора, найденное по калибровочному графику, мкг;m – масса навески сырья, мкг;W – влажность сырья, %.247Упаковка,маркировкаитранспортирование.Осуществляетсястребованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственногорастительного сырья».Упаковка.
В ящики с отверстиями в боковых стенках и крышках по 0,5 кгнетто.Транспортирование. Свежесобранное сырье следует отправлять дляпереработки немедленно после сбора любым видом транспорта.Хранение. Хранение ЛРС осуществляется с требованиями ОФС «Хранениелекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».Cырье подлежит переработке в течение 24 часов с момента сбора.Сырье для получения настойки гомеопатической матричной.Зав. кафедры фармакогнозииИнститута фармации и трансляционной медициныФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченовадокт.
фарм. наук, член-корр. РАНИ.А. Самылина«___» __________201__г.Аспиранткафедры фармакогнозииИнститута фармации и трансляционной медициныФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. СеченоваД.О. Боков«___» __________201__г.248Приложение 6. Проект ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойкагомеопатическая матричная»МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ__________________________________________________________________Galanthus nivalis, GalanthusФС Настойка гомеопатическая матричнаяВводится впервые__________________________________________________________________Настоящая фармакопейная статья распространяется на Galanthus nivalis,Galanthus настойку гомеопатическую матричную, получаемую из свежих целыхрастений (planta tota), собранных ранней весной в период цветения подснежникабелоснежного Galanthus nivalis L.
семейство амариллисовые – Amaryllidaceae, иприменяемую для производства/изготовления гомеопатических лекарственныхпрепаратов.Для получения настойки необходимо:Подснежника белоснежного целыхрастений свежих(при содержании влаги не менее 80 %)- 100 гСпирта этилового (этанола) 73 % (помассе) или 80 % (по объему)- достаточное количество дляполучения настойкиПримечаниеПолучение настойки гомеопатической матричной осуществляют по способу 3aОФС «Настойки гомеопатические матричные».249ОписаниеПрозрачная жидкость светлого зеленовато-желтого цвета с резкимнеприятным запахом.ПОДЛИННОСТЬОпределение основных групп биологически активных веществ1. Тонкослойная хроматография (амариллисовые алкалоиды)Приготовление растворовПриготовление раствора СО ликорина.
Около 10,0 мг (точная навеска) СОликорина основания помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл ирастворяют в 8 мл 96 % спирта этилового при перемешивании. Доводят объёмраствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок хранения раствора 1мес.Приготовление модифицированного реактива Драгендорфа. Раствор I. 0,85г висмута нитрата основного растворяют в 40 мл воды и 10 мл уксусной кислоты,взбалтывают в течение 15 мин. Раствор II. 8 г калия йодида растворяют в 20 млводы. Растворы I и II смешивают (основной раствор). Непосредственно передприменением 10 мл основного раствора смешивают с 10 мл 1 % водного растворааскорбиновой кислоты и 10 мл 95 % этанола.Приготовление уксусной кислоты 20 %.
20,4 г уксусной кислотыразбавляют водой до 100 мл.На стартовую линию аналитической хроматографической пластинки сослоем силикагеля на алюминиевой основе размером 10×15 см наносят раздельнополосами 50 мкл испытуемой настойки и 5 мкл СО ликорина. Пластинку снанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в хроматографическуюкамеру, предварительно насыщенную в течение 1 часа смесью: диэтиловый эфир– метанол – диэтиламин (90:5:5) и хроматографируют восходящим способом вуказанной системе растворителей. Когда фронт растворителей пройдет около 80 –90 % длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают, высушивают навоздухе до удаления следов растворителей. Затем пластинку обрабатываютмодифицированным реактивом Драгендорфа и нагревают в сушильном шкафупри температуре 100-105 °С в течение 5 мин.250На хроматограмме раствора СО ликорина должна обнаруживаться зонаадсорбции оранжевого цвета.На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зонаоранжевого цвета на уровне зоны СО ликорина; допускается обнаружениедополнительных зон.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
