Диссертация (1141404), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Когда фронтрастворителя пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, еевынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, затемобрабатывают алюминия хлорида раствором 5 % в спирте 70 %, после чегопросматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.На хроматограмме раствора СО кверцетина должна обнаруживаться зонаадсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета, на хроматограмме раствораСОизорамнетинатакжедолжнаобнаруживатьсязонаадсорбциисфлуоресценцией желто-зеленого цвета.Нахроматограммеиспытуемогорастворадолжныобнаруживатьсяследующие зоны адсорбции: зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленогоцвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО кверцетина; зонаадсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета на уровне зоны адсорбции нахроматограммераствораСОизорамнетина;допускаетсяобнаружениедополнительных зон адсорбции (флавоноиды).3.
К 1 мл НГМ прибавляют 3 мл воды, 3-5 капель 1% растворакремневольфрамовой кислоты. Появляется муть, переходящая в хлопьевидныйосадок (амариллисовые алкалоиды).4. К 3 мл настойки прибавляют 0,1 г порошка магния и 1 млконцентрированной кислоты хлористоводородной разведенной; постепеннодолжно появиться розовое окрашивание (флавоноиды).5. 1 мл настойки помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл,приливают 20 мл этилового спирта 70%, перемешивают и доводят тем же спиртом230до метки (испытуемый раствор). УФ-спектр испытуемого раствора в области длинволн от 300 до 450 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 330±5нм.ИСПЫТАНИЯТяжелые металлы. Не более 0,001 % (ГФ XIII).Сухой остаток. Не менее 2,0 % (ГФ XIII).Плотность.
От 0,907 до 0,927 (ГФ XIII).Микробиологическаячистота.Испытанияпроводятвсоответствиистребованиями ОФС «Микробиологическая чистота» ГФ XIII, категория 3.2.»Количественное определение. Суммы амариллисовых алкалоидов впересчете на галантамин не менее 0,01 %.Сумма амариллисовых алкалоидовПриготовление растворовАцетата аммония раствор 20 Ммоль/л в воде. Около 1,542 г (точнаянавеска) ацетата аммония переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл,доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают. При необходимостипроводят дегазацию и фильтрацию через мембранный фильтр с размером пор неболее 0,45 мкм.Приготовление подвижной фазы.
В мерную колбу вместимостью 1 л вносят100 мл ацетата аммония раствора 20 Ммоль/л в воде, добавляют 500 млацетонитрила и перемешивают, доводят объем колбы до метки ацетонитрилом иснова перемешивают.Приготовление стандартных растворов галантамина. Около 20,0 мг(точная навеска) субстанции галантамина растворяют в мерной колбевместимостью 100 мл в ацетонитриле и доводят до метки тем же растворителем,получая стандартный раствор галантамина концентрацией 200 мкг/мл (растворА1). 10 мл раствора А1 помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили объемколбы тем же растворителем до метки, получая раствор концентрацией 20 мкг/мл(раствор Б1).1 мл раствора А1 помещали в мерную колбу на 100 мл и доводилиобъем колбы тем же растворителем до метки, получая раствор концентрацией 2мкг/мл (раствор В1).Приготовление калибровочных растворов галантамина.Для приготовления калибровочных растворов с концентрацией растворагалантамина 2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 25,0; 50,0 мкг/мл, проводят разбавлениестандартных растворов ацетонитрилом в соответствии с таблицей 1.231Таблица 1.Приготовление калибровочных растворов галантаминаКонцентрацияКонцентрацияОбъемОбъемкалибровочногостандартногостандартногокалибровочногораствора, мкг/мл раствора, мкг/млраствора, млраствора, мл2,5200,12515,0200,25110,0200,5115,0200,75125,02000,125150,02000,251Растворы хранят в плотно закрытой емкости в холодильнике не более 1 мес.Проверка пригодности хроматографической системы.Результаты анализа считаются достоверными, если выполняютсяследующие условия:1.
эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 17 000теоретических тарелок для пика галантамина;2. коэффициент симметрии для пика галантамина должен быть не менее 0,8 и неболее 1,5.1,5 мл настойки переносят в мерную колбу, вместимостью 25 мл, доводятобъем до метки подвижной фазой. 2 мл полученного раствора центрифугируют втечение 5 мин при 4500 об/мин. 1 мл надосадочной жидкости помещают в виалыдля хроматографирования (испытуемый раствор).Условия хроматографированияКолонка- 150×4,6 мм, сорбент поверхностнопористый непривитый силикагель (С18), 2,7мкм (HILIC)Предколонка- 5×4,6 мм, сорбент поверхностнопористый непривитый силикагель (С18), 2,7мкм (HILIC)ПФСмесь ацетонитрила с ацетата аммонияраствором 20 Ммоль/л в воде (9:1)Способ элюирования- изократический232Скорость потока- 0,8 мл/минТемпература- 35± 2°СколонкиДетектор- спектрофотометрический или диоднаяматрицаДлина волны- 290 нмОбъем пробы- 20 мклВремя записи данных- 20 минХроматографируют калибровочный раствор СО галантамина и ликорина сконцентрацией 10 мкг/мл, получая не менее 3 хроматограмм.
Результатысчитаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверкапригодности хроматографической системы».Хроматографируют последовательно калибровочные растворы и строяткалибровочныйграфикзависимостиплощадиСОгалантаминаотегоконцентрации. Затем хроматографируют испытуемый раствор, получая не менее 3хроматограмм.Расчет содержания суммы амариллисовых алкалоидов проводят методомвнешнего стандарта. Обсчету подлежат пик галантамина, а также пики соспектрами, характерными для амариллисовых алкалоидов (максимумыпоглощения при 235 и 290 нм).Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на галантамин внастойке гомеопатической матричной в процентах (X) вычисляют по формуле:=·· 25,· · 10000Где: S – сумма площадей пиков галантамина и других амариллисовыхалкалоидов на хроматограмме испытуемого раствора;So − площадь пика на хроматограмме раствора СО галантамина;– концентрация стандартного раствора, мкг/мла – аликвота настойки, мл;Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на галантамин внастойке гомеопатической матричной в процентах (X), используя калибровочныйграфик, вычисляют по формуле:· 25=,· 10000233где: С – содержание суммы амариллисовых алкалоидов в 1 мл испытуемогораствора, найденное по калибровочному графику, мкг;а – аликвота настойки, мл.Испытание на четвертое десятичное разведение D4.
Хроматографируютобразец четвертого десятичного разведения в соответствии с требованиями,изложенными в разделе «Количественное определение». На полученной врезультате анализа хроматограмме должен отсутствовать пик со временемудерживания соответствующий галантамину.ПримечаниеПриготовление четвертого десятичного разведения D4 производят всоответствии с ОФС «Настойки гомеопатические матричные».Упаковка. В соответствии с требованиями ОФС «Гомеопатическиелекарственные формы».Упаковка должна обеспечивать стабильность при транспортировании ихранении в течение установленного срока годности.Маркировка.ВсоответствиистребованиямиОФС«Настойкигомеопатические матричные».Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 15 до 25 °С.Зав.
кафедры фармакогнозииИнститута фармации и трансляционной медициныФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченовадокт. фарм. наук, член-корр. РАНИ.А. Самылина«___» __________201__г.Аспиранткафедры фармакогнозииИнститута фармации и трансляционной медициныФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. СеченоваД.О. Боков«___» __________201__г.234Приложение 5.
Проект ФС «Подснежник белоснежный растения целыесвежие – Galanthus nivalis planta tota recens»МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯПодснежник белоснежный растенияцелые свежиеGalanthus nivalis planta tota recensФС 42 Водится впервыеНастоящая фармакопейная статья распространяется на свежесобранныераннейвеснойвмарте-апрелецелыерастениядикорастущегоиликультивируемого подснежника белоснежного - Galanthus nivalis L. семействоамариллисовые– Amaryllidaceae, используемые для приготовления настойкигомеопатической матричной.ПОДЛИННОСТЬВнешние признаки. Свежее цельное сырьё подснежника белоснежногопредставляет собой растение целиком, состоящее из надземной (листья,цветоносы и цветки) и подземной (луковица и корни) частей.
Луковицагрушевидной или конической формы, длиной 2,0 см, диаметром 1,5 см. Наружнаяповерхность слегка морщинистая, покрыта светло-коричневыми кожистымичешуями. Наружные чешуи луковицы расположены на одном уровне. Цветлуковицы после удаления кроющих чешуй белый. Корни длиной до 15 см,цилиндрические, тонкие, нитевидные в диаметре до 1 мм, белые. Листья простые,линейные, тёмно-зелёные или сизые, голые, с восковым налётом, на кончикахтуповатые, немного суживающиеся у основания и постепенно переходящие вдлинные влагалища, в почке примыкают друг к другу плоско.
Край листа235цельный, жилкование параллельное. Длина влагалища листа 2,0-4,0 см, длиналиста 8-12 см, ширина листа 0,4-0,5 см, толщина листа 2,4-3,1 мм. Цветоносслаборебристый, цилиндрический, голый, длиной 7-10 см, толщиной до 1,5 мм,зелёногоцвета.Цветокодиночный,обоеполый,свенчиковиднымоколоцветником белого цвета, раздельнолепестный; прицветник линейный,пленчатый, длиной до 2 см, длина цветоножки 2,5 см, 3 наружных листочкаоколоцветника продолговато-обратнояйцевидной формы, длиной 1,8 см, шириной0,6 см; 3 внутренних листочка околоцветника длиной 1,0 см, шириной 0,4 см,клиновидной формы, плоские, наверху с выемкой и крупным подковообразнымзелёным пятном размером 1 мм.
6 тычинок на коротких нитях, прикреплённых коснованию околоцветника, длиной 0,5 см, пыльники с остроконечиями; завязьнижняя, трёхгнёздная, округлая в диаметре длиной 0,1-0,2 см, столбикнитевидный с острым рыльцем. Запах сырья слабый специфический, вкус неопределяется.Микроскопическиепризнаки.Листья.Листоваяпластинкадорзовентрального типа в основании имеет форму вогнутого треугольника, скороткими краями.
При рассмотрении с верхней и нижней стороны листа споверхностивидныклеткиэпидермиса,вытянутыеподлинелиста,прямоугольной формы с прямыми стенками (длиной – 180-395 мкм, шириной –23-31 мкм). Стенки клеток эпидермиса имеют четковидное утолщение. Устьицаокруглые (диаметром – 40-50 мкм), окружены 4 (реже 5) эпидермальнымиклетками (тетра- и пентацитный типы).
Частота встречаемости устьиц с нижнейстороны листа – 25-30 на 1 мм2, с верхней – до 15 на 1 мм2. Кутикула гладкая,местами продольно-морщинистая. Мезофилл листа чётко не дифференцирован напалисадную и губчатую ткани, состоит из округлых клеток величиной 30-50 мкмв диаметре. Несколько рядов клеток мезофилла, прилегающих к верхнемуэпидермису, имеют незначительно удлиненные в радиальном направленииклетки. В центральной части мезофилл обладает рыхлой структурой, тем самымобразуякрупныевоздухоносныеполости,которыерасположенымеждупроводящими пучками. В периферической части мезофилла видны клетки,236содержащие пучки рафид оксалата кальция (45-50 мкм), частота встречаемостиклеток с рафидами 1,5-3 на 1 мм2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
