Диссертация (1141392), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Температуру затвердевания определяли на приборе Жукова с термометром, Россия.Угол вращения α плоскости поляризации определяли с помощью поляриметра автоматическогоАА-10 фирмы «Optical Activity Ltd», Великобритания, при длине волны линии D спектра натрия(589,3 нм) и при температуре 20°C. Показатель преломления определяли с помощьюрефрактометра RL-3 (производитель «PZO», Польша, оптика рефрактометра фирмы «Carl Zeiss»,Германия) при длине волны линии D спектра натрия (589,3 нм) и при температуре (20±0,5)°C.51Статистическую обработку результатов проводили с помощью программного пакетаSigmaPlot 10 (США) и Excel 2013 (Microsoft, США).Сходимость содержания гераниола определяли на образцах паст как для одной, так инескольких серий.
Стабильность зубных паст, содержавших гераниол в составе такой лечебнопрофилактической добавки, как эфирное масло герани, изучали путем определения егосодержания в пастах с различным сроком хранения в рекомендованных производителемусловиях.В качестве стандарта основного действующего вещества эфирного масла геранииспользовали аналитический стандарт гераниола, специально предназначенный для проведенияГХ-анализа (Sigma-Aldrich, кат. №48798), (CH3)2C=CHCH2CH2C(CH3)=CHCH2OH, (М.м. 154.25),бесцветную жидкость, чистотой не менее 99 %.2.3.Методика пробоподготовки зубных паст, содержащих соединения терпеновойприродыАнализ раздела «Состав» в инструкциях лекарственных препаратов, содержащихэкстракты эфиромасличных растений, на официальном сайте Государственного реестралекарственных средств (ГРЛС) показал, что наиболее актуальным экстрагентом действующихвеществ из данного типа лекарственного растительного сырья является спирт этиловый 95%(этанол).
В большинстве случаев это объясняется неполярным строением терпенов итерпеноидов, главных фармакологически активных компонентов эфироносов, которыепрактически нерастворимы в воде, и наоборот, легко растворимы в органических растворителях.В частности, согласно ОФС.1.5.2.0001.15 эфирные масла мало, очень мало и практическинерастворимы в воде, легко растворимы или растворимы в спирте различной концентрации,эфире и других органических растворителях. Таким образом, главным экстрагентом соединенийтерпеновой природы из зубной пасты SPLAT «Лечебные травы» был выбран спирт этиловый95%.Методику пробоподготовки зубных паст для ГХ- анализа с ПИД проводили всоответствии с пунктом 2.4. «Приготовление пробы» ГОСТ 14618.5-78 «Масла эфирные,вещества душистые и полупродукты их синтеза. Газохроматографический метод анализа», вкотором сказано, что «твердые продукты предварительно растворяют в соответствующемрастворителе» [6].Методика пробоподготовки для ГХ- анализа с ПИД: Около 20,0000 г (точная навеска)зубной пасты SPLAT «Лечебные травы» помещали в плоскодонную колбу с притертой пробкойвместимостью 50 мл, прибавляли 25 мл спирта этилового 95% и проводили экстракцию наультразвуковой бане в течение 45 мин.
Полученный раствор фильтровали через бумажныйфильтр, после чего фильтрат помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем52фильтрата растворителем до метки. После чего хроматографировали аликвоту (1 мкл)полученного извлечения. Для получения статистически достоверных данных проводилипятикратное испытание.Помимо подбора экстрагента, позволяющего извлечь максимальное количестворепрезентативных, характерных и действующих веществ из исходного образца (в данном случаеиз лечебно-профилактических добавок, представленных водно-спиртовыми экстрактами иэфирным маслом, а также зубной пасты как конечного готового продукта), необходимоучитывать способ введения проб и особенности хроматографических приборов, а именно ихдетекторы.
При ГХ-анализе использование образцов с примесью воды еще допустимо, так как ееналичие не мешает работе пламенно-ионизационного детектора. Однако, с практической точкизрения лучше придерживаться использования спиртовых образцов.Другая ситуация складывается при проведении ГХ-МС-анализа, где в качестве ионногоисточника выступает электронная ионизация (EI). Поток электронов ионизирует образециспытуемого вещества, находящегося в газообразном состоянии. Энергия электронов (обычно70эВ) больше энергии ионизации образца.
Главным ограничением данного способа ионизацииявляется необходимость испарения образца, что делает невозможным исследование полярных,термолабильных или высокомолекулярных соединений. Вода является полярным растворителем,поэтому использование образцов с ее примесью может привести к нарушению работы ионногоисточника и ионной ловушки с их последующей заменой. С этой целью при проведении ГХ-МСрекомендуют либо не вводить образцы на водной основе, либо отключать электроннуюионизацию в момент выхода воды из колонки.В состав зубной пасты «Лечебные травы» входит вода очищенная, поэтомупробоподготовка исходного образца для ГХ-МС анализа включала следующие этапы: 1)получение из гелеобразной массы пасты (навеска 10,00г) порошкообразную за счет добавленияк навеске натрия сульфата безводного (1,5г) (Na2SO4), обладающего гигроскопичнымисвойствами и образующего кристаллогидрат Na2SO4*10H2O; 2) экстракция в дихлорметан (30 мл)на ультразвуковой бане в течение 30 мин.; 3) фильтрация надосадочной жидкости черезбумажный фильтр; 4) переэкстрагирование осадка в дихлорметан (30 мл); 5) фильтрация осадка;6) объединение двух полученных фракций с последующим концентрированием (упариванием)на роторном испарителе до сухого остатка; 7) растворение сухого остатка в 2 мл дихлорметана.Дихлорметан является неполярным растворителем, что удовлетворяет двум основнымтребованиям проводимого качественного и количественного анализа действующих веществлечебно-профилактических добавок в составе зубных паст:извлечению неполярных соединений терпеновой природы;53эффективной работе хромато-масс-спектрометра без лишних затрат на еговозможный ремонт.Методику пробоподготовки зубных паст для ГХ-МС анализа проводили в соответствии сГОСТ ISO 356-2014 «Масла эфирные.
Подготовка проб для испытаний» [11].Методика пробоподготовки для ГХ-МС анализа: Около 10,00г (точная навеска) зубнойпасты SPLAT «Лечебные травы» помещали в фарфоровую ступку, добавляли массу осушающеговещества натрия сульфата безводного, равную приблизительно 15% массы навески зубной пасты(1,5г), и перемешивали с помощью фарфорового пестика полученную смесь до образованияпорошкообразной массы. Переносили приготовленную массу в колбу вместимостью 50 мл,прибавляли 35 мл дихлорметана и проводили экстракцию в течение 30 минут на ультразвуковойбане. Проводили фильтрацию полученной суспензии через бумажный фильтр в мерную колбувместимостью 100 мл. Фильтрат оставляли в колбе, массу, осевшую на фильтре, снова помещалив фарфоровую ступку и последовательно проводили повторное перемешивание, экстрагированиеи фильтрацию по указанной ранее методике.
К первоначально полученному фильтратуприбавляли последующий полученный фильтрат, объединяя в мерной колбе вместимостью 100мл, после чего доводили объем объединённого фильтрата растворителем до метки. Из мернойколбы вместимостью 100 мл количественно переносили примерно 2 мл полученногообъединенного раствора в колбочку вместимостью 10 мл для роторного испарителя и упаривалидосуха.
К сухому остатку добавляли 2 мл дихлорметана и 10 мкл раствора внутреннего стандарта(концентрацияфенантрена1мг/мл,нафталина1мг/мл).Раствориспользовалисвежеприготовленным. Проводили хроматографирование аликвоты (1 мкл) полученногоизвлечения. Для получения статистически достоверных данных проводили пятикратноеиспытание.Удаление воды из исследуемых паст также продиктовано тем фактом, что меньшая частьиспользуемых капиллярных колонок в ГХ-анализе приспособлена для разделения водныхобразцов.
Стандартные наиболее часто применяемые колонки (100% диметилполисилоксан или95% диметилполисилоксан + 5% дифенилполисилоксан) не рассчитаны на анализ водныхрастворов, так как эти неподвижные фазы относятся к неполярным, и вода не смачивает стенкиколонки, не конденсируется в виде единого пятна на старте колонки. В результате пики могутдвоится, время удерживания не воспроизводится. Следует также учитывать высокую стоимостьи меньшую стабильность фаз, пригодных для анализа воды.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
