Диссертация (1141299), страница 19
Текст из файла (страница 19)
высушенного измельченного растительного сырья намачивали инастаивали с 50мл 40% спиртом этиловым в течение суток. Затем намоченноерастительное сырье помещали в перколятор и подавали чистый экстрагент досостояния «зеркала». Оставляли заполненный перколятор на 24 часа. После этого15% от заданного объема упаривают под вакуумом до 7,5 мл. Остальной объемсливают в приемник. Упаренный объем объединяют с оставшемся объемом.123Полученную вытяжку фильтровали через двойной слой марли (для удалениябалластных веществ).В итоге было получено излечение темно-фиолетового цвета с характернымсладковатым запахом.На следующем этапе нами была проведена стандартизация 3 серий экстрактажидкого (1:1) согласно проекту ОФС «Экстракты» согласно ГФ по показателям:описание, содержание спирта, тяжелые металлы, сухой остаток, содержаниедействующих веществ.
Полученные результаты представлены в таблице 31:Таблица 31. Характеристика жидкого экстракта плодов Рябины черноплодной ипоказатели для оценки качества согласно ГФПоказательЖидкий экстракт (1:1)ПрозрачностьПрозрачная жидкостьЦветТемно-фиолетовыйЗапахСпецифический, сладковатыйВкусГорьковатыйpH4,42Содержание спирта38%Тяжелые металлыНе более 0,01%Сухой остаток0,64%Таблица 32. Условия получения жидкого экстракта плодов рябинычерноплодной (1:1)СтепеньТипизмельченности экстрагентаКонцентрация Соотношение Продолжительностьэкстрагентасырья1,0-0,5 ммсырье :экстракцииэкстрагентСпиртэтиловый40%1:172 часа1247.3. Изучение фармакологической активности препаратов Рябинычерноплодной7.3.1.
Изучение мембранстабилизирующей активности лекарственныхформ плодов Рябины черноплоднойВ последнее время повышенное внимание уделяется разработке и изучениюфитопрепаратов, полученных из различного лекарственного растительного сырья.Причина - целый ряд преимуществ растительных препаратов по сравнению с ихсинтетическими аналогами.Всвязисэтимособоезначениеприобретаетпервичнаяоценкафармакологического эффекта вновь создаваемых препаратов.Для первичной оценки и скрининга новых лекарственных форм излекарственного растительного сырья в последнее время часто применяютиспытание «in vivo» с применением культуры инфузорий Paramecium caudatum .Именно этот простейший одноклеточный организм рекомендован рядомисследователейвкачествебиообъектадляоценкиантиоксидантной,мембранстабилизирующей и адаптогенной активности различных препаратов.Плоды аронии содержат в своем составе богатейший комплекс БАВ, в связи счем создание лекарственных форм на их основе может рассматриваться какперспективное.Цельнастоящегоисследования-сравнительныйанализмембранстабилизирующего действия новых жидких лекарственных форм плодовAronia melanocarpa.Объектами исследования выступали настой (1:10) и жидкий экстракт (1:1),полученныеизвысушенныхцельныхиизмельченныхплодоварониичерноплодной, заготовленных на территории Воронежской области в периодсентябрь- октябрь 2014 года.Лекарственное растительное сырье былостандартизовано в соответствии с требованиями ГФ.Настой из плодов аронии (1:10) готовили по общепринятой методике с учетомкоэффициента водопоглощения, который был установлен в ранее проведенных125экспериментах [106].
Для цельных плодов аронии Кв = 1.5, для измельченныхплодов - Кв = 2.0.Жидкий экстракт (1:1) плодов рябины черноплодной готовили методомперколяции. В качестве экстрагента выступал спирт этиловый в концентрации40% [73].Так как спирт этиловый в концентрации 40% влияет на жизнедеятельностькультуры инфузорий, вызывая их гибель, перед началом эксперимента егоотгоняли под вакуумом, а полученный сухой остаток растворяли в водеочищенной при слабом нагревании на водяной бане.Оценку мембранстабилизирующего действия полученных лекарственных формпроводили по методике В.С.
Бузламы. Данный метод позволял определитьхарактер действия изучаемых объектов на клетки при воздействии на нихвнешних неблагоприятных факторов. Из нескольких имеющихся методик былвыбран «Метод разрушающего воздействия» с использованием культурыинфузорий «Paramecium caudatum».В работе нами была использована культура инфузорий, содержащая вэкспоненциальной фазе не менее 2500 особей в 1 мл среды, а в стационарной фазе- не менее 7000 особей.В ходе исследования была приготовлена серия последовательных разведенийизучаемых лекарственных форм. Перед началом эксперимента проводилитермостатирование культуры инфузорий совместно с изучаемым объектом втечение суток.
В качестве контрольного опыта выступала культура инфузорийбез добавления объекта исследования, термостатированная в течение суток.В качестве повреждающего фактора выступал 10% раствор хлорида натрия,который вызывает повреждение мембраны культуры инфузорий и дальнейшуюгибель одноклеточного организма.На первом этапе устанавливали объем 10% раствора натрия хлорида,приводящий к гибели 100% клеток культуры инфузорий в течение 5 минут.
Дляэтого из контрольной пробирки отбирали по 1 мл культуры инфузорий и126добавляли 10% раствор натрия хлорида (от 0.1 до 0.5мл). При добавлении впробирку с культурой раствора хлорида натрия вначале наблюдали ускорениедвижения инфузорий, затем их съеживание и в дальнейшем прекращениедвижения в течение 2.5 минут. Контроль времени гибели клеток осуществлялипод микроскопом с помощью секундомера.В ходе проведенного эксперимента был установлен относительный объемхлористого натрия, приводящий к гибели 100% клеток в течение 2.5 минут –0.25мл [100].На следующем этапе исследования провели оценку мембранстабилизирующегодействия исследуемых жидких лекарственных форм. Для этого перед началомисследования в 18 пробирок помещали по 9 мл культуры инфузорий встационарной фазе роста.
В первую пробирку добавляли 1мл воды очищенной,перемешивали. Во вторую - 1мл исследуемого препарата, перемешивали. Далееготовили последовательные разведения препарата, перенося по 1 мл жидкости извторой пробирки в третью, из третьей в четвертую и т.д. Штатив с пробиркамитермостатировали сутки при 25оС.По окончании термостатирования отбирали по 1мл жидкости из опытныхпробирок, добавляли туда оттестированное количество 10% раствора хлористогонатрия,выполняющегорольнеблагоприятногофактора,иизмерялипродолжительность жизни клеток культуры инфузорий, общее количествокоторых принимали за 100%. Испытание проводили не менее 3 раз. Длядальнейших расчётов использовали среднюю величину.Оценку мембранстабилизирующего действия исследуемых объектов проводилив сравнении с данными, полученными в аналогичных условиях, для известныхадаптогенов - настойки аралии и экстракта элеутерококка [107].На основании полученных данных был рассчитан индекс биологическойактивности исследуемых препаратов IБА (если его значение больше 1, то препаратобладает мембранстабилизирующим действием, тем большим, чем выше значениеиндекса).
Полученные значения IБА позволили сделать вывод о том, что настой127измельченных плодов аронии проявляет высокую мембранстабилизирующуюактивность в концентрациях от 1*10-4 до 1*10-19. В более высоких концентрациях1*10-2, 1*10-3 наблюдалась гибель клеток, которая может быть связана сповышенной кислотностью неразбавленных извлечений из плодов, губительнойдля культуры инфузорий.Индекс биологической активности настоя из цельных плодов составил всреднем IБА=1.1, а в некоторых разведениях оказался меньше, чем IБА<1.1. Наосновании этого был сделан вывод о том, что данное извлечение биологически неактивно, а в некоторых разведениях и снижает жизнеспособность клетокинфузорий.Мембранстабилизирующая активность жидкого экстракта проявлялась вконцентрациях 1*10-4,1*10-5, 1*10-14, 1*10-15, 1*10-17, 1*10-18, в остальныхразведениях активность снижалась.Проводясравнениемембранстабилизирующейактивностиисследуемыхобъектов с литературными данными, можно сделать вывод о том, что активностьжидких лекарственных форм плодов аронии, как водных, так и спиртовых, неуступает известным адаптогенам (табл.33, рис.33).Таблица 33.
Индекс биологической активности препаратов плодов рябинычерноплоднойIБАМембранстабилизируАОААнтитоксическаяющая активностьактивность1231231231*10-2---0,891,261,39-0,95-1*10-3-1.231.940,621,11,410,990,78-1*10-41.371.041.270,81,11,181,110,67-1*10-50.961.071.030,74-0,940,690,510,631*10-61.191.181.040,651,290,920,50,740,451*10-71.681.071.090,681,190,890,620,690,551281*10-81.850.881.080,671,160,940,430,950,51*10-91.120.980.980,61,160,950,41,080,921*10-101.291.10.980,711,10,860,51,270,681*10-111.510.930.930,561,320,680,641,030,811*10-121.730.930.750,671,270,780,761,20,461*10-131.680.940.880,651,190,690,541,110,531*10-141.881.051.150,671,320,720,710,530,561*10-151.431.071.20,651,380,670,610,680,551*10-161.490.980.850,61,450,590,60,410,521*10-171.421.051.130,771,490,710,511,030,951*10-181.550.851.120,671,310,650,541,40,261*10-191.550.821.070,691,090,670,530,86-1- Настой измельченных плодов аронии2- Настой цельных плодов аронии3- Жидкий экстракт (1:1) плодов аронииРис.
33. Мембраностабилизирующая активность извлечений плодов Рябинычерноплодной1297.3.2. Изучение антиоксидантной активности лекарственных форм наоснове лекарственного растительного сырья Рябины черноплоднойВ настоящее время тема свободных радикалов и реакционноспособныхкислородосодержащих частиц привлекает повышенное внимание современнуюмедицину и фармацию. Это связано с условиями усиливающихся экологопроизводственного прессинга и некачественного питания [23,24].Регулирование процессов свободно радикального окисления и уровнянакапливающихсяперекисныхрадикаловантиоксидантная система организма человека.осуществляетзащитнаяКонцентрация свободныхрадикалов в клетках организма может достичь уровня, при котором егособственнаяантиоксидантнаясистеманесправляетсясдезактивациейповреждающих агентов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
