Диссертация (1140952), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Ни у одной из пациенток не быловыявлено признаков синдрома нДСТ. Коагулограмма каждой из пациентокбыла в пределах референсных значений. Генетическое исследование показалоотсутствие как мутаций, так и полиморфизмов исследуемых генов факторовсвертывающей системы крови, в том числе во всех случаях отмечалсянормальный ген PAI-1 – 5G/5G.Для оценки рецептивности эндометрия морфологическому исследованиюподвергали эндометрий в период «окна имплантации». В группе контроля в22% случаев обнаружили признаки ранней стадии фазы секреции – вжелезистомэпителииэндометрияопределяетсямножествобазальнорасположенных вакуолей, при этом апикальный край клеток все еще ровный,строма компактная, ядра фибробластоподобных клеток – округлой формы,относительно крупные, фибробластоподобные клетки располагаются в густойсети ретикулиновых волокон.
В 78% случаев выявлены измененияэндометрия, характерные для средней стадии фазы секреции – железы извитыес широким просветом, ядра везикулярные, располагались базально,апикальный край клеток неровный с признаками апокринной секреции впросвет желез, с образованием пиноподий – микропротрузий диаметром около56Рис.3.1. Пиноподии в поверхностном эпителии эндометрия в группе контроля. Окраскагематоксилином и эозином, х630.Рис.3.2. Эндометрий в группе контроля. Окраска толуидиновым синим, х630.576мкмвапикальнойчастиповерхностногоэпителияэндометрия,экспрессирующих на своей поверхности ряд белков, необходимых для адгезиибластоцисты к поверхности эндометрия, а также признаки васкуляризации иотека стромы (рис.
3.1). При этом зрелые пиноподии отсутствовали наповерхности эпителиоцитов эндометрия лишь в 22% случаев. Среднийпроцентповерхностногоэпителияэндометрия,покрытогозрелымипиноподиями, составил 13%. В строме эндометрия ни в одном из случаев небыло выявлено патологических изменений.При окраске толуидиновым синим во всех исследованных случаяхэндометрий полностью окрасился в синий цвет, феноменов метахромазиивыявлено не было (рис. 3.2).
При окраске пикрофуксином по Ван Гизонуочагов склероза также не было выявлено ни в одном случае.При иммуногистохимическом исследовании маркеров рецептивностиэндометрия получены следующие результаты. При исследовании маркерарецептивности LIF выявляли его экспрессию в цитоплазме поверхностного ижелезистого эпителия эндометрия, в пиноподиях и в цитоплазме клетокстромы эндометрия, при этом наиболее важной считалась экспрессия LIF впиноподиях поверхностного эпителия эндометрия. Обнаружена высокаяэкспрессия маркера рецептивности LIF в поверхностном эпителии эндометрия(средний балл экспрессии – 4,67) при незначительной его стромальнойэкспрессии(рис.3.3).Эстрогеновыеипрогестероновыерецепторыэкспрессировались в ядрах эпителия и стромы эндометрия.
Во всех случаяхстромальный прогестерон-эстрогеновый индекс (СПЭИ) был в пределахмежду 2 и 4.При исследовании VEGF отмечали его экспрессию в цитоплазме клетокповерхностного и железистого эпителия, стромы эндотелия сосудовэндометрия.Экспрессиясосудисто-эндотелиальногофакторароставэпителии, фибробластах и макрофагах стромы, эндотелии была умереннойлибо незначительной (средний балл экспрессии 1,17, 0,5 и 2,67 для эпителия,клеток стромы и эндотелия соответственно).
При исследовании маркера PAI58Рис.3.3. Экспрессия LIF в эндометрии в группе контроля, х400.Рис.3.4. Экспрессия PAI-1 в эндометрии в группе контроля, х400.59Рис.3.5. Экспрессия коллагена 3 типа в строме эндометрия в группе контроля, х1000.Рис.3.6. Экспрессия ММП-2 в эндометрии в группе контроля, х400.601, играющего важную роль в механизмах гемостаза и фиброгенеза, отмечалиего экспрессию в цитоплазме клеток поверхностного и железистого эпителия,стромы и эндотелия сосудов эндометрия. В контрольной группе отмечалиочень слабую экспрессию PAI-1 в эпителии, строме и эндотелии сосудовэндометрия (средний балл экспрессии – 1,05, 0,5 и 0,1 для эпителия, стромы иэндотелия соответственно, рис.
3.4).При исследовании коллагенов 1 и 3 типа в группе контроля отмечали ихэкспрессию в волокнистом компоненте стромы эндометрия. Экспрессияколлагена 1 типа либо отсутствовала, либо была слабо выраженной во всехслучаях. При этом отмечалась выраженная либо умеренная экспрессияколлагена 3 типа в волокнистом компоненте эндометриальной стромы (рис.3.5).При исследовании ММР-2 и ММР-9 отмечали их экспрессию вцитоплазме клеток поверхностного и железистого эпителия, стромы,эндотелия сосудов эндометрия.
Экспрессия ММР-2 была умеренной вэпителии, строме и эндотелии эндометрия (средний балл экспрессии 3,0, 3,6 и1,6 для эпителия, стромы и эндотелия соответственно, рис. 3.6). ЭкспрессияММР-9 также была умеренной во всех компонентах эндометрия (средний баллэкспрессии 3,8, 2,8 и 2,0 для эпителия, стромы и эндотелия соответственно).Экспрессия фибронектина отмечалась в волокнистом компоненте стромы и вкомпонентах сосудистой стенки. В строме и эндотелии сосудов былаодинаково высокой (средний балл экспрессии 5,0 и 5,2 для стромы и эндотелиясоответственно).
Экспрессия ламинина отмечалась в цитоплазме клеток,преимущественно, около цитоплазматической мембраны. В эпителии онабыла умеренной, в строме и эндотелии была назначительной (средний баллэкспрессии 3,8, 1,2 и 1,4 для эпителия, стромы и эндотелия соответственно).613.2.Клиническая,морфологическаяииммуногистохимическаяхарактеристика группы нДСТ (группа №1)На основании выписок из медицинских карт пациенток группы контролябылиполученыследующиеданные:пациенткиимелижалобынаневозможность забеременеть, в течение не менее года половой жизни (жалобына бесплодие – как первичное, так и вторичное), в 46% случаев имелиотягощенный анамнез по синдрому нДСТ, менструальная функция у всехпациенток была нормальной. У 13 пациенток, включенных в группу, суммарнов анамнезе была 31 беременность, из них родами завершились 19беременностей (61,3%), 9 беременностей было замерших (29,0%), остальныезавершились либо выкидышем на более поздних сроках, либо медицинскимабортом на малых сроках, протоколы IVF у пациенток в этой группе непроводились.
При физикальном исследовании у всех пациенток, включенныхвгруппу,быливыявленыпризнакисиндроманДСТ.Наиболеераспространенными были следующие признаки: 8 человек (61,3%) имеливарикозное расширение вен различных степеней тяжести (С1-С3 поклассификации СЕАР), 7 человек (53,8%) имели миопию, чаще всего – легкойи средней степени тяжести, по 6 человек (46,2%) имели плоскостопие игипермобильность суставов, 5 человек (38,5%) имели пролапс митральногоклапана (рис. 3.7). Показатели системы гемостаза каждой из пациенток былив пределах референсных значений. Генетическое исследование показалоотсутствие большинства мутаций и полиморфизмов исследуемых геновфакторов свертывающей системы крови. В некоторых случаях выявлялисьполиморфизмыгенабелкаPAI-1,который,помимосвоихантифибринолитических свойств, отвечает и за фиброгенез.
Исследовалиструктуру полиморфизов гена PAI-1, среди 13 пациенток выявлено 2 сгомозиготным полиморфизмом 4G/4G, 4 – с гетерозиготным полиморфизмом4G/5G и 7 – без полиморфизма, 5G/5G.Морфологически в 1 группе в 38% случаев обнаружили признаки раннейстадии фазы секреции, в 62% случаев выявлены изменения эндометрия,62706050%403020100Группа №1Рис.3.7. Распространенность симптомов нДСТ в группе №1Рис.3.8. Мелкие фокусы фибриноидного некроза в эндометриальной строме в группе№1, х400. Окраска гематоксилином и эозином63Рис.3.9. Феномен метахромазии в эндометриальной строме пациентки группы №1 приокраске толуидиновым синим, х400.Рис.3.10.
Экспрессия VEGF в эндометрии в группе №1, х400.64характерные для средней стадии фазы секреции. Однако, отсутствиезрелых пиноподий на поверхности эндометриального эпителия выявлялось в62% случаев. Средний процент поверхностного эпителия эндометрия,покрытого зрелыми пиноподиями составил 5%. При этом в 23% случаев встроме эндометрия имелись очаговые расстройства микроциркуляции: мелкиекровоизлияния в строме, сладж и микротромбы. Также в 38% случаев быливыявлены мелкие очажки фибриноидного некроза (рис.
3.8), а в 23% случаевбыли выявлены очаги склероза в эндометриальной строме, при этом они имелисклонностькпериваскулярнойлокализации.Очагисклерозатакжеморфометрически исследовались при окраске пикрофуксином по Ван Гизону.По данным морфометрического исследования, они занимали в среднем 0,85%площади препарата. При окраске толуидиновым синим ядра, эпителий ибольшая часть волокнистого компонента стромы окрашивалась в синий цвет.Во всех исследованных случаях часть волокнистого компонента стромыизменяла свой цвет в рамках феномена метахромазии, что было расценено какпризнаки мукоидного набухания (рис.
3.9).Прииммуногистохимическомисследованиилокализациявсехисследуемых маркеров аналогична группе контроля.При иммуногистохимическом исследовании маркеров рецептивностиэндометрия получены следующие результаты. При исследовании маркерарецептивностиLIFобнаруженаумереннаяэкспрессиямаркеравповерхностном эпителии эндометрия (средний балл экспрессии – 3) принезначительной стромальной экспрессии (средний балл экспрессии – 0,58).Эстрогеновые и прогестероновые рецепторы экспрессировались в ядрахэпителия и стромы эндометрия.
Во 45% всех случаев стромальныйпрогестерон-эстрогеновый индекс (СПЭИ) был в пределах между 2 и 4, востальных 55% случаев отмечались отклонения СПЭИ от нормы.При исследовании VEGF отмечали его слабую экспрессию в эпителии,фибробластах и макрофагах стромы, эндотелии (средний балл экспрессии 0,5,0,37 и 1,46 для эпителия, клеток стромы и эндотелия соответственно, рис.653.10).
При исследовании маркера PAI-1 отмечали его умеренную экспрессиюв эпителии, строме и эндотелии сосудов эндометрия (средний балл экспрессии– 4, 3,5 и 2,5 для эпителия, стромы и эндотелия соответственно).При исследовании коллагенов 1 и 3 типа в группе контроля отмечали ихэкспрессию в волокнистом компоненте стромы эндометрия. Экспрессияколлагена 1 типа либо отсутствовала, либо была слабо выраженной во всехслучаях. При этом отмечалась умеренная экспрессия коллагена 3 типа вволокнистом компоненте эндометриальной стромы. В очагах склерозаотмечалось преобладание коллагена 3 типа над коллагеном 1 типа: врезультате морфометрического исследования отмечено соотношение площадиэкспрессии коллагенов 1 и 3 типов, равное 0.623.Экспрессия ММР-2 была слабой в эпителии, строме и эндотелииэндометрия (средний балл экспрессии 2,4, 2,2 и 0,5 для эпителия, стромы иэндотелия соответственно). Экспрессия ММР-9 также была умеренной во всехкомпонентах эндометрия (средний балл экспрессии 4,1, 3,1 и 1,0 для эпителия,стромы и эндотелия соответственно).
Экспрессия фибронектина в строме иэндотелии сосудов была одинаково высокой (средний балл экспрессии 5,1 и5,7 для стромы и эндотелия соответственно). Экспрессия ламинина вэпителии, строме и эндотелии была незначительной (средний балл экспрессии2,0, 1,4 и 1,2 для эпителия, стромы и эндотелия соответственно).3.3.Клиническая,морфологическаяииммуногистохимическаяхарактеристика группы НТ (группа №2)На основании выписок из медицинских карт пациенток группы контролябылиполученыследующиеданные:пациенткиимелижалобынаневозможность забеременеть, в течение не менее года половой жизни (жалобына бесплодие – как первичное, так и вторичное), в 20% случаев имелиотягощенный анамнез по наследственным тромбофилиям, менструальнаяфункция у всех пациенток была нормальной.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
