Диссертация (1139719), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Выбор трехатомногоспирта обусловлен его способностью к сольватации полифенольных соединений за счет образования комплексов посредством водородной связи.Методы контроля качества антоциановых соединенийИдентификацию АЦ проводят, в основном, с помощью трех качественных реакций,представленных в литературе (таблица 2) [143].19Таблица 2№п/п123Качественные реакции, используемые для идентификации АЦРеагентЭффект реакции0,5 мл 10% раствора ацетата свинца0,5 мл 10% раствора гидроксида натрияраствор аммиака или гидрокарбонатанатриясиний аморфный осадококрашивание оливково-зеленого цветасинее или фиолетовое окрашиваниеХроматографические методыОбобщение и систематизация данных по выделению и разделению АЦ методом колоночной хроматографии, описанных в литературе, представлена в таблице 3.СорбентТаблица 3Разделение АЦ методом колоночной хроматографииОбъект анализаЭлюентПримечаниеОкись алюминияВлажныйгипсЦеллюлозаАЦ из водных растворовКрасящие веществачерной мальвыПигменты ягодчерной бузиныВода-Соляная кислота-0,25% муравьиная кислотаВыделены: хризантемин ивещество, названное самбуцинианином-Полиамидное сереброКора лиственницы96 % этиловый спирт, содержащий 0,01 % солянойкислотыЦеллюлозаАЦ красных листьев и молодой красной коры эвкалиптаЭтилацетат - уксусная кислота - муравьиная кислота вода (18:3:1:4)Смесь полиамид (порошкообразныйнайлон) целитАЦ из экстрактовлепестков Dahlia,Streptocarpus и бобов какаоПодкисленный бутанолСиликагельАнтоциановыепигменты леснойземляники-Силикагель,тальк иокись алюминияЭкстракт АЦВода, этанол (70%) – 1%соляная кислота, этанол(30%) – 1% соляная кислота, ацетонВ коре присутствуют хризантемин и дельфннидин-3глюкозид, в листьях –дельфинидин и дельфинин(дельфнниднн-3,5днглюкозид)Этим способом были хорошо отделены АЦ, а такжеполучены в чистом видеантоцианидины, образующиеся из лейкоантоциановпосле кислотной их обработкиОбнаружены пеларгонидин-3-моноглюкозид и цнанидин-3-моноглюкозид вотношении 1:1, кроме того,присутствуют два неидентифицированных АЦ-20Для разделения АЦ, лейкоантоцианов и антоцианидинов методом хроматографии на бумаге в литературе предложены следующие варианты, представленные в таблице 4.В настоящее время исследование АЦ методом ВЭЖХ является наиболее прогрессивным.Часто применяемыми сорбентами являются: Сепарон SGX С18, Силасорб С18, Диасфер-110С18 и др.
Для приготовления элюэнтов используют ацетонитрил и воду, также к этой смесивозможно добавление муравьиной кислоты или кислоты уксусной [36,103,104,108,121,258].Объектанализа1Плоды рябиныКора лиственницыПигментыцветков у 7видов родаAntirrhinumАЦ в неочищенных метанольныхэкстрактахрастенийТкани растенийСвежий растительныйматериалSpirodela oligorthiza и S.polyrrhizaАЦ в красных суслах ивинахЭкстракт АЦТаблица 4Разделение АЦ методом бумажной хроматографии [1,240]СистемаПолярПримечанияность234этилацетат – ледяная уксусная кислота – мура5,45вьиная кислота – вода (100:10:10:26)уксусная кислота - соляная кислота - водаRf = 0,52 (30:3:10)цианидинхлорид,Rf = 0,34 –дельфинидинхлоридн-бутанол - уксусная кислота - вода (6:1:2)5,63Найдены: антиррин(цианидингликозид)м-крезол - уксусная кислота - вода (50:2:48),и пеларгонидинглиуксусная кислота – вода - соляная кислотакозид,три гликозида(30:10:3)апигенина, гликозидлютеолина и двагликозида аурезидинан-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода5,16(10:1:3)н-пропанол - 3%-ная соляная кислота (65:35)90%-ная муравьиная кислота - 3н соляная кислота (1:1) и вода - уксусная кислота – концентрированная соляная кислота (10:30:3)н-бутанол – 2 н соляная кислота (1:1)н-бутанол – 2 н соляная кислота (1:1)вода – метанол - уксусная кислота (25:70:5)бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5)м-бутанол-уксусная кислота - вода (4:1:2,2)15%-ной уксусная кислота---Бумага ватман № 37,186,685,78--н-пропанол - н-бутанол - 5%-ный водный раствор борной кислоты (1:1:1)-Бумага Binzer 208изоамиловый спирт – уксусная кислота – вода(2:1:1)этилацетат – уксусная кислота – вода(55:20:20)хлороформ – этилацетат (8:2)5,60Алюминиевая пластинка, покрытаясиликагелем5,694,38211Плоды черники обыкновенной2хлороформ - метанол - вода (26:14:3)хлороформ - этанол - вода (26:16:3)хлороформ - 0,1% спиртовой раствор НСl - вода (26:16:3)1 % спиртовой раствор НС1н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода4:1:235,444,995,694Найдены: мальвидин– 3-О- глюкозид, цианидин– 3-О- глюкозид, дельфинидн– 3О- глюкозидОбращенно-фазовой вариант ВЭЖХ с использованием диодно-матричного имасс-спектрометрического детекторов нашли широкое распространение для разделения и определения АЦ в различных растительных объектах.ГХ трудно применить для качественной идентификации АЦ, так как нелегко приготовить летучие стабильные и гомогенные производные этих соединении.
Силанизированные АЦсоединения могут быть проанализированы с помощью ГХ или в сочетании с массспектрометрией. При исследовании смеси пеларгонидина, цианидина, дельфинидина, мальвидина и пеонидина проведено разделение на силанизированных производных с последующей ихрегенерацией до исходных АЦ. Недостатками его считаются небольшая производительностьгазохроматографической колонки и возможность разрушения АЦ при высоких температурах(210-250 °С), которые применяются для приведения силанизированных АЦ в летучее состояние.Спектральные методыПоскольку АЦ окрашены, для оценки эффективности их извлечения из сырья и контролясодержания в получаемых препаратах наиболее рационален метод спектрофотометрии в видимой области спектра при λ= 510-540 нм [33,82,108,155,223,259]. Расчет количественного содержания суммы АЦ в исследуемых объектах проводят как по значению оптической плотностираствора стандартного образца цианидин-3-О-глюкозида, так и по значению его удельного показателя поглощения.Для оценки суммарного содержания антоциановых пигментов в настоящее время широко используется pH-дифференциальная спектрофотометрия растворов АЦ [82,155,240,259].
Длячего готовят по два разбавления исследуемого извлечения с использованием буферных растворов с рН=1,0 и рН=4,5. Оптическую плотность полученных растворов измеряют при 510 и 700нм на спектрофотометре [33,108,223].Следует отметить, что данный метод аттестован и широко используется, в т.ч. в НД длястандартизации продукции и сырья, содержащего АЦ [82]. Однако, в настоящее время в науч-22ной литературе, особенно для исследования АЦ в ЛРС, применение рН-дифференцированнойспектрофометрии ограничено [155,259].Исследования АЦ методом ИКС впервые были проведены в 1956 г для подтвержденияметильных и гидроксильных групп.
Абсорбционная полоска ацильных групп ацилированныхАЦ очень характерна. Поэтому большое значение этот метод имеет для ацилированных АЦ,особенно для их отличия от неацилированных АЦ. Присутствие карбоксильной группы характеризуется абсорбционным максимумом. Спектры шести основных антоцианидинов исследованы в области от 4000 до 700 см-1. Характерные пики получаются в области от 2000 до 1380 см -1.Основные характеристические полосы поглощения АЦ приведены в таблице 5.Электро – химические методыЛиндстедт провел электрофорез пигментов красной свеклы. При электрофорезе на бумаге (0,1-молярный цитратный буфер с рН=5,5) получено хорошее разделение пигментов краснойсвеклы на 7 компонентов.Таблица 5Характеристические полосы поглощения на ИК-спектрах АЦ [127,150,162,343]Частота, см-1Тип колебанийФункциональная группана спектре1637 см-1валентные колебаниядвойная связь кислородного цикла,который сопряжен с бензольным ядром1580 см-1ибольшая или средняя интенсивсвязь С - С в бензольном ядре1520 см-1ность, валентные колебания1650 см-1Валентные колебаниядвойная связь бензольного ядра1620 см-1-ацилированные АЦУстановлено, что АЦ необратимо редуцируются на капающем ртутном электроде, даваякатодные волны, интенсивность полуволны которых зависит от рН раствора.
Число полученныхволн в меньшей степени зависит от структуры, чем от концентрации АЦ. Обычно с трудом получаются дифференцированные данные о концентрации отдельных АЦ. Поэтому обязательнопредварительное разделение АЦ хроматографией и индивидуальное определение каждого изних. Полярографический метод имеет преимущества при изучении комплексов АЦ с металлами.231.1.1.2.ФлавоноидыМетоды установления подлинностиФлавоноиды – одна из наиболее изученных групп БАВ природного происхождения.Обобщенные данные о качественных реакциях, используемых для идентификации флавоноидов, приведены в таблице 6.Таблица 6Качественные реакции, используемые для идентификации флавоноидов [143]№п/п11Название реакции2Образование хелатов с хлоридом алюминия2Цианидиноваяпроба3Комплексообразование с реактивом Вильсона4Комплексообразование с треххлористой сурьмойОбразование халкона5РеактивыЭффект реакцииПримечание3спиртовый растворалюминия хлорида4желтое окрашиваниеконцентрированнаясоляная кислота иметаллическиймагнийокраска от оранжевой до краснофиолетовой5Флавоноиды, имеющие две оксигруппы в С3 и С5 положенияхФлавоны, флаваноны, флавонолы,флаванонолы.
Недают реакцию халконы, ауроныконцентрированнаясоляная кислота иметаллическийцинкборная и лимоннаякислоты, растворенные в безводном ацетонеокраска от оранжевой до краснофиолетовойхлорид сурьмы10% водный раствор щелочи6Бромирониебромная вода7Комплексообразование с хлоридомокисного железаОбразование азокрасителяраствор хлоридажелеза (III)8диазотированнаясульфаниловаякислота и другиепоявляется желтаяокраска или яркожелтая флуоресценция, которая усиливается в УФ светежелтый или желтооранжевый цветкрасный или краснофиолетовыйжелто-оранжевоеокрашиваниекрасное или яркожелтое окрашиваниесинее окрашиваниехелтый осадококрашивание от зеленого до коричневого цветаоранжево-краснойокраски в видимомсвете указывает наФлавонолы и флавонол-3-гликозиды.Флаваноны не вступают в реакциюФлавоноиды, у которых гидроксильная и карбонильнаягруппы отделеныатомом углеродаФлавоныХалконыФлавоноидыХалконы и ауроныАнтоцианидиныРутин количественно реагирует сбромом в соотношении 1:4ФлавоноидыФлавоноиды со свободной 7оксигруппой24123производные ароматических аминов9Реакции с раствором аммиака илигидрокарбонатомнатрияраствор аммиакаили гидрокарбоната натрия10Реакция на сахарный компонентреактив Фелинга4присутствие 7оксифлавонов, 7оксифлавонолов, 7оксиизофлавонов.Появление окраскичерез 1-2 минуты,подтверждает наличие 7оксифлавононовжелтое окрашивание, при нагреваниипереходящее воранжевое или красноеоранжевое или красное окрашиваниесинее или фиолетовое окрашиваниекрасный осадок5Флавоны, флавонолы, флаваноныХалконы и ауроныАЦФлавоноидные гликозидыХроматографические методыВ настоящее время в практику исследований введены различные варианты хроматографического метода.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
