Диссертация (1139719), страница 8
Текст из файла (страница 8)
МетодЛевенталя следует признать приблизительным и возможным для полуколичественного определения [267].34Истинное содержание ДВ в водно-спиртовых (50% этиловый спирт) извлечениях изЛРС определяют перманганатометрически после осаждения ДВ раствором желатина [219]. Кнедостаткам данной методики следует отнести длительность выполнения анализа.В листьях скумпии кожевенной (Cotinus coggygria Scop.) и листьях сумаха дубильного(Rhus coriaria L.) ДВ после экстракции 30% этиловым спиртом, определяют комплексонометрически, добавляя реактива осаждения, в присутствии индикатора – ксиленовый оранжевый[53,54].
Недостатком данного способа является длительность проведения анализа и трудностьопределения точки эквивалентности. Этот же метод предложен для количественного определения ДВ в подземных органах лабазника обыкновенного (Filipendula vulgaris Moench.).Спектральные методыВ ЕФ [400-403] включена общая статья «Определение танинов в препаратах из ЛРС». Встатъю включен фотоколориметрический метод, основанный на взаимодействии ДВ (полифенолов) с молибдато-вольфрамовым реактивом в присутствии натрия карбоната (реактив Фолина- Дениса).
Пирогаллол используют при этом в качестве стандартного образца. Методика ЕФсначала предусматривает определение общего содержания полифенолов, затем полифенолов,не осаждаемых кожным порошком. Содержание ДВ (полифенолов), связываемых кожным порошком, устанавливается по разности с пересчетом их содержание на пирогаллол [98,242].В настоящее время наиболее точным и эффективным, не требующим больших затратвремени, является спектрофотометрический метод определения ДВ, основанный на измеренииоптической плотности окрашенных продуктов реакции катехинов с железо-тартратным реактивом в присутствии 0,1 М фосфатного буфера с рН 8,2 [17,101]. Метод используется для количественного определения комплекса катехинов в фармацевтических препаратах из листьев чая,водных извлечениях из корней щавеля конского [101].
Реакция достаточно специфична, так какпримеси нефенольной природы с железо-тартратным комплексом не реагируют [17,101].Известен также способ количественного определения ДВ спектрофотометрическим методом после реакции с реактивом Фолина-Чокальтеу в пересчете на галловую кислоту [194].Недостатком данного метода является невозможность раздельного определения низко- и высокомолекулярных ДВ.Предложен способ спектрофотометрического определения ДВ в траве горца почечуйного, некоторых видах рода Geranum L. и траве сабельника болотного, в основе которого лежитизмерение оптической плотности спирто-водной вытяжки из сырья при длинах волн 265-280 нм[136,219].Данные способы не дают возможность раздельно определить содержание низкомолекулярных и высокомолекулярных ДВ.35Разработан способ [198], позволяющий провести раздельное определение осаждаемых ине осаждаемых ДВ в растительном сырье, в котором навеску сырья экстрагируют водой прикипячении, охлаждают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы придлине волны 277 нм до и после добавления 1% раствора коллагена в 1% уксусной кислоте.
Недостатком способа является невозможность определения ДВ во всех видах ЛРС, так как водныеизвлечения некоторых видов не дают выраженного осадка при обработке раствором коллагена.Изучены ИК- и КР-спектры ЛРС, содержащего ДВ. Для каждого исследуемого объектаописаны волновые числа (см-1) наиболее интенсивных характерных максимумов полос (ИКНПВО) и линий (КР).
Результаты исследования КР - и ИК-спектров порошков ЛРС дают возможность рекомендовать спектральные характеристики для идентификации ЛРС [97].Электро-химические методыПоказана принципиальная возможность применения потенциометрического титрованияв анализе ЛРС и водных извлечениях из него [213,221, 224,239,256]. Существует способ, позволяющий не только оценить количественное содержание суммы ДВ в ЛРС, но и дифференцировать конденсированные и гидролизуемые группы танинов.Однако к недостаткам метода следует отнести невозможность раздельного определенияпредставителей ДВ в общей сумме, содержащейся в растительных объектах.Известен способ кулонометрического определения ДВ в пересчете на танин в ЛРС, основанный на окислении ДВ гипоиодит-ионами в фосфатном буферном растворе с рН=9,5 [11].Недостатком данного способа является использование дорогостоящего оборудования, реактивов, а также невозможность дифференцированно определить ДВ в сумме, содержащейся в растительных объектах [194].Содержание галловой кислоты и ее эфиров в танине, полученном из турецких галлов икитайских орешков, листьев сумаха и скумпии, можно рассчитывать методом неводного потенциометрического титрования в среде диметилформамида и ацетона [194].Известен также способ определения содержания танина и производных галловой кислоты в чае методом кондуктометрии [194].
Недостатком данного способа является применениетоксичных органических растворителей (изобутиловый спирт), а также использование цветнойреакции с Fe (III), продуктом которой является нестабильное по окраске во времени окрашенное соединение.Таким образом, в настоящее время в научной литературе широко распространены такиеметоды количественного определения ДВ, как перманганатометрия, а также спектральные методы, основанные, как на измерении собственного поглощения суммы данных БАВ в различных растворителях, так и на поглощении окрашенных продуктов реакций с разнообразными36цветореагентами.
Недостатком способов является невозможность одновременного определенияДВ гидролизуемой и негидролизуемой группы в растительных объектах и многокомпонентныхлекарственных формах без предварительного разделения на отдельные компоненты.1.1.2. Методы определения аминокислотВ настоящее время известно более 70 аминокислот (АК) природного происхождения,почти всe они, за некоторым исключением, имeют структуру типа RCH(NH2)CO2H [317,379,405]. Важным направление развития фармацевтической химии является разработка и совершенствование доступных и простых методов анализа АК в различных oбъектах исследования.В литературе oписаны основные кaчественные реакции (специфические и общегрупповые), представленные в таблицe 18.№п/п11234567Таблица 18Общегрупповыe и специфическиe реакции идентификации АК [92,251,317,379]ОбластьМетодика экспериментаЭффект реакцииприменения234Ксантопротеиновая реакцияАК с индольным Азотная кислота (конц.); 10% раствор NaOH Желтое окрашивание,или бензольнымпереходящее в оранкольцомжевоеРеакция ФоляАК, содержащие0,5% раствор Pb(CH3COO)2, 10% раствор Темноe окрашиваниесеруNaOHРеакция СакагучиАК - аргинин10 % раствор NaOH, спиртовый раствор αРозово-красноенафтола.
Приливают при перемешивании 1-2окрашиваниeкапли натрия гипохлоритаРеакция АдамкевичаАК - триптофан1 мл CH3COOH (конц.) и осторожно, по стен- На границе разделаке, приливают 1 мл H2SO4 (конц.), не смеши- двух фаз появляетсявая жидкостикольцo краснофиолетового цветаРеакция Гопкинса-КолеАК - триптофанРаствор кислоты глиоксиловой и 10 капель Наблюдается синераствора сульфата меди (0,04 М), 2-3 мл (не- фиoлетовoе oкрашибольшими порциями) серной килоты (конц.)ваниепри постояном охлаждении пробирки.
10 минут выдерживают при комнатной тeмпературe, затем 5 минут нагревают на кипящейвoдяной банеНингидриновая пробаАмины (первичныераствора нингидрина 0,5 % - 3 капли иРазвивается окрашии вторичные)кипeтятваниe розовоe,красноe, а затем синефиолетовоеРеакция МиллонаАК - тирозинПеремешивают до растворения в 5 мл 2,5% Раствор постепенно3718910111213234р-ра серной кислоты. Прибавляют 1 мл реак- окрашивается в кротива Миллона (ртути нитрат и нитрит, раство- ваво-красный цветренные в кислоте азотной), перемешивают иоставляют при комнатной температуреРеакция ПаулиАК - гистидинраствор кислоты сульфаниловой в 5% расОркое вишневотворе кислоты серной, 2 мл 0,5% раствора красное окрашивакалия нитрита, взбалтывают, добавляют 6 млние10% раствора натрия карбонатаОбразование комплексов с катионами тяжелых металловАК1 мл 10% раствора NaOH и несколько капель Появляется сине5% раствор меди сульфатафиолетовое окрашиваниеОбразование флуоресцеина (фармакопейная реакция)Кислота глутами- Фталевый ангидрид, серная кислота (конц.), Наблюдается красноваянесколько кристалликов резорцинано-фиолетовоеокрашивание в видимом свете и интенсивная желтозеленая флуоресценция в УФ-светеСпецифическая реакция на триптофан1 капля 2,5% раствора формальдегида и 6 мл Появляется интенHNO3 (конц.), перемешивают и через 10 мин сивное сине – фиодобавляют при взбалтывании 10 капель 0,5% летовое окрашивараствора NaNO2ниеИдентификация остатока уксусной кислотыАК - ацетилцисте- Кислотный гидролиз с последующим нагрева- Выделяется этилаиннием при добавлении этанола и несколькихцетат с характеркапель серной кислоты (конц.)ным фруктовымзапахомОпределение серы, связанной органическиАК, содержащие Плавление с кристаллическим NaOH в фарфо- Образуется черныйсеруровой чашке, затем приливают раствор ацета- осадок сульфидата свинцасвинцаМетоды титриметрического анализаВ соответствии с НД на АК и ЛП на их основе, из титриметрических способов определе-ния количественного содержания наиболее часто используется неводное титрование (например,для гамма-аминомасляной и аминокапроновой кислот) [90,92,379].
Алкалиметрическое титрование в водных растворах осуществляется по методу Серенса (формольное титрование) [90,92,379]. Для дикарбоновых AК (глутаминовая кислота) титрование щелочью в водной средепроводят не добавляя формальдегид. Так как АК являются азотсодержащими соединениями, вбиологическом материале, возможно, их количественное определение методом Кьельдаля.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
