Диссертация (1139719), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Исследования проводилина комплексном универсальном спектрометре «Гамма-Плюс» с программным обеспечением«Прогресс».2. Определение хлорорганических остаточных пестицидов (ОП) в исследуемых образцах проводили методом ГЖХ на газовом хроматографе «Цвет 500М» [23,41,313].3. Определение тяжелых металлов (ТМ) и микроэлементов в образцах проводили по рекомендациям следующих НД: ГОСТ 26929-94 «Сырье и продукты пищевые.
Подготовка проб. Минерализация для определения содержания токсичных элементов» [64], ГОСТ 30178-96 «Сырье и74продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов» [56,58,72], а также по методическим указаниям по атомно-абсорбционным методам определения токсичных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье [67,156].4.
Определение мышьяка в исследуемых объектах проводили на ААС С-115-М1 по ГОСТ Р51766-2001 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения мышьяка» [73].5. Полный макро-, микро- и ультрамикроэлементный состав изучаемого ЛРС определяли в соответствии с МУК 4.1.1483-03 [179] методом масс-спектроскопии с индуктивно связаннойплазмой на приборе «ELAN-DRC».
Для контроля правильности определения использовался метод добавок. Рабочие стандартные растворы при этом готовят путем смешивания несколькихопорных многоэлементных стандартных растворов для масс-спектрометрии, производства Perkin-Elmer или аналогичные, содержащих разные группы элементов. Используемые референсстандарты: ГСО состава травосмеси (Тр-1), ГСО 8922-2007; ГСО состава элодеи канадской (ЗК1), ГСО 8921-2007; ГСО состава листа березы (ЛБ-1), ГСО 8923-2007.6. Для определения макроэлементов, изучаемые объекты анализировали методом КЭ на приборе «Капель-105/105М» («Люмэкс», СПб, Россия) по методике [139].7.
Определение фосфора проводили титриметрическим методом по ГОСТ 26657-97 «Методыопределения содержания фосфора» [69].8. Исследование микотоксинов (МТ) методом непрямого ИФА проводили по ГОСТ «Метод иммуноферментного определения микотоксинов» [84].9. Определение общей золы ЛРС и золы, нерастворимой в соляной кислоте, проводили в соответствии с ОФС ГФ XIII [93].2.5. Определение микробиологической чистоты изучаемого ЛРС и МЭМикробиологическую чистоту исследуемых образцов оценивали в соответствие с ОФС«Микробиологическая чистота» ГФ XIII [93] и ГОСТами 10444.15-94.
«Продукты пищевые.Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов» [65]; 10444.12-88. «Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневыхгрибов» [57]; ГОСТ Р 52816-2007. «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)» [76]; ГОСТ Р 528152007. «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus» [77]; ГОСТ Р 52814-2007. «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella» [78].752.6.
Методика проведения испытаний физиологической активностиизвлечений из ЛРС на культуре инфузорий«Метод разрешающего воздействия» на культуре клеток инфузорий Paramecium caudatum был выбран нами из нескольких существующих методик. Определение проводили по известной методике [8,10,188,331].2.7. Приготовление растворов стандартных образцов для определения БАВ в изучаемомЛРС1. Приготовление раствора стандартного образца (РСО) рутина для определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин методом дифференциальной спектрофотометрии. Около 0,025г (т.н.), в пересчете на сухое вещество, рутина помещают в мерную колбу объемом 50 мл, добавляют 35 мл 95% этанола и выдерживают до полного растворения на водяной бане.
Затемохлаждают, доводят объем раствора до 50 мл тем же растворителем, перемешивают (растворА). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу объемом 25 мл, добавляют 2 мл 2% растворахлорида алюминия в 95% этаноле и 4 капли раствора кислоты уксусной разведенной, доводятобъем раствора тем же спиртом до 25 мл, перемешивают (раствор Б).
Оптическую плотностьраствора Б измеряют при длине волны 410±2 нм на спектрофотометре в кювете с толщинойслоя 10 мм точно через 30 мин с момента приготовления. Раствор сравнения: в мерной колбеобъемом 25 мл к 1 мл раствора А добавляют 4 капли раствора кислоты уксусной разведенной и95% этанол до метки. Для приготовления 2% раствора алюминия хлорида в 95% этаноле 2 гсубстанции безводного хлорида алюминия растворяют в мерной колбе объемом 100 мл в 95%этаноле [183,305].
Для измерений использовали спектрофотометр Hitachi U-1900 (Япония) и кюветы столщиной слоя 10 мм.2. Приготовление раствора РСО глутаминовой кислоты для определения суммы свободных АКметодом дифференциальной спектрофотометрии. Около 0,025 г (т.н.) РСО глутаминовойкислоты (субстанция-порошок, содержание не менее 99,5%, ЗАО «Вектон», Россия, годен до10.10.2016 г.) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды очищенной, растворяют, доводят объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивают(раствор В). Для измерений использовали спектрофотометр Hitachi U-1900 (Япония) и кюветы с толщиной слоя 10 мм.3.
Приготовление раствора РСО танина для определения суммы ДВ методом прямой спектрофотометрии. Около 0,05 г (т.н.) РСО танина помещали в мерную колбу вместимостью 100мл, доводили до метки этанолом 70%, 2,5 мл полученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл, доводили до метки этанолом 70%, 1,0 мл полученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл доводили до метки этанолом 70%. Измеряли оптическую плотность полу-76ченного раствора относительно 70% этанола при длине волны 277±1 нм. Для измерений использовали спектрофотометр Hitachi U-1900 (Япония) и кюветы с толщиной слоя 10 мм.4. Приготовление раствора РСО глюкозы для определения суммы полисахаридов и простых сахаров методом дифференциальной спектрофотометрии.
Около 0,05 г (т.н.) глюкозы, предварительно высушенной при температуре 100-105°С до постоянной массы, растворяют в воде вмерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки и перемешивают. 10 млполученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки, перемешивают. Раствор должен быть свежеприготовленным.2.8. Использованные стандарты, реактивы и материалы1.
Приготовление буферных растворов:- Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 6,4 проводили по ОФС 42-0072-47 «Буферные растворы».- Приготовление боратного буферного раствора с рН 9,0 проводили по [234].- Приготовление буферных растворов для определения суммы АЦ в плодах облепихи крушиновидной методом рН-дифференцированной спектрофотометрии проводили в соответствии сГОСТ [82].2.
Пробы на ТСХ-пластинки наносили с помощью микрошприцев объемом 1 и 10 мкл (МШ –10, МШ – 1, Россия). Для приготовления элюентов использовали растворители марки х.ч. (ЗАО«Вектон», СПб, Россия).3. Приготовление реактивов, детектирующих реагентов, титрованных растворов проводили всоответствии с рекомендациями ГФ XI – XIII изданий из субстанций марки х.ч. и ч.д.а. (ЗАО«Вектон», СПб, Россия).4. При разработке ТСХ-методик использовали следующие стандартные образцы: эргокальциферол (ФСП 42-0008018000) [355], β-каротина (ВФС 42-3128-98) [32], токоферола ацетата (ФС42-7843-97) [350], ретинола ацетат (ФС 42-7811-97) [352], а также чистые субстанции рутина,кверцетина, танина, галловой кислоты, АсК, глюкозы, фруктозы, ксилозы, рамнозы, АК, ОК,предоставленные ЗАО «Вектон» (СПб, Россия).2.9.
Условия хроматографирования2.9.1. Подготовка элюентов для хроматографированияЭлюенты готовили путем смешивания компонентов в указанных соотношениях непосредственно перед использованием и заливали в хроматографическую камеру в таком количестве, чтобы высота его слоя в камере была равна 1 см. Камеру для насыщения ее парами элюента закрывали крышкой и выдерживали 20 – 25 мин.772.9.2. Проведение хроматографического определенияНа пластинки наносили пробы, и, не дожидаясь их высыхания, помещали в хроматографические камеры слоем сорбента вперед под углом 45°, закрывали крышкой и проводили хроматографирование в течение указанного времени.
Пластинки вынимали, когда уровень растворителя поднимался на высоту до 1,0 – 1,5 см от верхнего края, сушили при комнатной температуре для удалениярастворителя и обрабатывали выбранным детектирующим реагентом.2.9.3. Проявление хроматограммПластинки после высушивания закрепляли горизонтально и капельно обрабатывали детектирующими реагентами или вертикально и обрабатывали раствором проявителя из пульвелизатора.Проявленные пластины помещали в нагретый до требуемой температуры сушильный шкаф на 5 – 7мин до проявления характерных зон.2.9.4. Проведение расчетов для оценки эффективности хроматографических определенийПолярность хроматографических систем рассчитывали по известной формуле (8) [39],исходя из значений полярности отдельных компонентов [266].nР' смеси =PiVi(8)i 1где Р'смеси– полярность смеси растворителей; Р i - полярность i -го компонента смеси; Vi -объемная доля i -го компонента.Число теоретических тарелок (N) – это мера эффективности или качества хроматографического слоя.
Высота слоя, на котором осуществляется хроматографическое разделение, дробится на теоретические разделяющие тарелки. Для решения определенной задачи по разделению сложных смесей требуется вполне определенное число теоретических тарелок. Величина Nвычисляется по формуле 9 [39]:ZfNHZo ,(9)где Zf - путь, пройденный фронтом растворителя, см; Z0 - расстояние от линии погружения достартовой линии, см; H – высота, эквивалентная теоретической тарелке, см.Высота, эквивалентная одной теоретической тарелке (Н), представляет собой некоторуючасть длины пластины, на которой устанавливаться равновесие актов сорбции-десорбции между неподвижной и подвижной фазами [39].
Величина Н вычисляется по формуле 10 [39]:2Hгдесм.хxZx,(10)- стандартное отклонение дисперсии пятна, см; Zx - длина пути, пройденного пятном,78Величина К – коэффициент распределения, определяющийся соотношением количествавещества, сорбированного неподвижной фазой, к количеству вещества, растворенному подвижной фазе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
