Диссертация (1139681), страница 12
Текст из файла (страница 12)
etal., 1993). При этой пробе регистрировали спектр кровотокаиз средней мозговой артерии (СМА). При компрессии общей сонной артериис ипсилатеральной стороны в течение 3 мин,снижение пиковой систолической скорости в СМА до 50 % расценивали, как достаточную, от 50 до 80 % как сниженную, 80-100 % - как неудовлетворительную эффективность коллатерального кровообращения (BogdahhV. etal., 1990).
Для визуализации СМАприменяли транстемпоральный доступ. Датчик располагали в области максимального истончения чешуи височной кости между наружным краем орбиты и ушной раковиной по линии, соответствующему верхнему краю скуловидного отростка. В этой зоне путем изменения угла наклона датчика проводили поиск и обнаружение артерий.Как правило визуализировались М1 и М2сегменты средней мозговой артерии (DavisS., 1993).При выполнении пробы с гиперкапнической гипоксией в модификации«дыхание через дополнительное мертвое пространство изменения газовогосостава крови достигали путем дыхания в течение 3 минут через дополнительное мертвое пространство, роль которого выполняла горизонтально расположенная эластичная трубка (диаметром 3,0 см, длиной 145 см, объемом1,0 л), снабженная загубником (Aстанина И.А., 2001).
Больной при этомнаходился в горизонтальном положении. В процессе пробы в СМА анализи-64ровали изменения линейной систолической скорости (ЛСК) и резистивногоиндекса за 10 последовательных циклов. Изменения показателей выражали впроцентах по отношению к значению до пробы.Методика определения эндотелийзависимойвазодилатации плечевой артерииДанную методику проводили по методу О.В.
Ивановой с соавт. (1998).С целью оценки изменения диаметра плечевой артерии применяли линейныйдатчик 7,5 МГц ультразвукового аппарата "VingmedCMP 800" (США). Плечевую артерию смотрели на 2-15 см выше локтевого сгиба в продольном сечении, изображение синхронизировали с зубцом R ЭКГ. Фиксировали следующие параметры: диаметр плечевой артерии d (см): исходный - d0, послекомпрессии – d1; скорость кровотока в плечевой артерии V (см/сек): исходную - V0, при реактивной гиперемии - V2. Следующие показатели рассчитывали так:- амплитуда ЭЗВД =(d0-d1)·100/d0;- амплитуда реактивной гиперемии РГ =(V0-V2)· 100/V0.- напряжение сдвига на эндотелий (дин/см2): исходное - τ0 =4ηV0d0,при реактивной гиперемии - τ2 =4ηV2d2, где η=0,05 Пз (вязкость крови); чувствительность плечевой артерии к напряжению сдвига (ед.): К=((d0d2)/d0)/((τ0-τ2)/τ0).Постишемическую реактивную гиперемию вызывали 5-минутным сжатием плеча манжетой тонометра при давлении на 10 мм рт.
ст., превышающего систолическое АД.Нормальной реакцией плечевой артерии на окклюзионную пробу считали дилатацию артерии на фоне реактивной гиперемии более чем на 10% отисходного диаметра, меньшее ее значение или вазоконстрикцию считали патологической.Механочувствительность эндотелия (К) или чувствительность стенкикровеносного сосуда к напряжению сдвига, то есть ее способность к дилатации, вычисляли по формуле: К = (ΔD/D0)/(Δτ/τ0), где ΔD — разница между65диаметром плечевой артерии (D) после проведения пробы с реактивной гиперемией и исходным D артерии (D0), Δτ — разница между τ после проведения пробы с реактивной гиперемией и исходным напряжением сдвига (τ0).Реактивность мозговых сосудов на гиперкапническую гипоксиюПроведение сосудистой пробы с метахолином и оценка метаболическойустойчивости эндотелиоцитовМетаболическую устойчивость эндотелия у больныханализировалипри исследовании метахолин-потенциируемой эндотелийзависимой вазодилатации (м-ЭЗВД).
Вначалепациентам подкожно вводили 0,5 мл 0,01% раствора метахолина и при помощиметода ультразвуковой допплерографиификсировали скорости кровотока в плечевой артерии и изменение диаметрав ней. По изменению от исходных значений диаметра артерии и процентуприроста его величины после пробы смотрели на эндотелийопосредованныевазодилатационные способности артерии.Кровоток и диаметр артерии фиксировали системой ACUSON 128 XP/10 (США), оснащенной линейным датчиком с фазированной решеткой частотой 7 МГц в режиме двухмерного ультразвукового сканирования [23,25,33,90]. На следующиесуткипациенту вводили метахолин в прежнем объеме и 5 мл 10% раствора аскорбиновой кислоты внутривенно.
Затем смотрели изменение скорости кровотока в артерии идиаметра вновь. Если во время введения аскорбиновой кислоты наблюдалосьдополнительное расширение артерии и повышение амплитуды м-ЭЗВД, тозначит у эндотелиоцитов сохранялась к окислительному стрессу метаболическая устойчивость [161, 162].Аскорбиновая кислота это мощный водорастворимый антиоксидант, способныйнейтрализовать/удалять ряд реактивныхкислородных радикалов, таких как пероксил, гидроксил, гидропероксильныерадикалы, супероксид анион и реактивные азотные радикалы, находящиеся вочень низких концентрациях [161]. И поэтому аскорбиновая кислота существенно снижает побочный эффект реактивных радикалов кислорода и азота,которые приводят к оксидативным повреждениям липидов, ДНК и белков[162]. Аскорбиновая кислота ингибирует взаимодействия между эндотели-66альными клетками и лейкоцитами, индуцируемые окисленными липидами.Если клетки эндотелия при снижении концентрации активных форм азота икислорода улучшали свои сосудодвигательные свойства, то можно утверждать о высокой метаболической устойчивости к действию оксидативногостресса и сохранных резервных возможностях эндотелия.Если на введение аскорбиновой кислоты дополнительного расширенияартерии не возникало, то это говорило о выраженных повреждениях клетокэндотелия и отсутствии резервных возможностей в противостоянии активным формам кислорода.
Также это указывало на повреждение активнымиформами кислорода липидно-белковых комплексов эндотелиальных клетоквследствие оксидативного стресса, а тканевая антиоксидантная защита резкоснижена.Определение содержания в крови про- и противовоспалительных цитокинов, уровня СРБ и ЦИКСодержание в сыворотке крови γ-интерферона (γ-ИФ), фактора некрозаопухолей альфа (ФНОα), интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-1бета (ИЛ1β), рецепторного антагониста интерлейкина-1 (РАИЛ-1), интерлейкина-8(ИЛ-8) фиксировали методом твердофазного иммуноферментного анализаприпомощисоответствующихтест-систем(ЗАО«ВЕКТОР-БЕСТ»,г.Новосибирск).Впроцессе иммуноферментного анализа применяли термошейкер ST3(Латвия) и аппарат для промывания планшетов ElisaWasher рскHuman(США), анализ результатов проводили на фотометре MultilabelCounter 1420Victor (Финляндия).Концентрацию СРБ определяли на биохимическом автоанализаторе"HITACHI-912" ("Хоффман Ла Рош", Швейцария) высокочувствительнымметодом турбидиметрии.
Нормальнаявеличина СРБ была при показателяхменее 3 мг/л (Pearson T.A. etal., 2003).Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли по методуV.Haskovaetal. (1977) преципитацией 3.7 % раствором полиэтиленгликоля676000 М в боратном буфере рН = 8.4 с последующей спектрометрией, СФ-26при 450 нм.Определение концентрации фактора роста эндотелия сосудов в кровиДля биохимического определения концентрации фактора роста эндотелия сосудов (VEGF–vascularendothelialgrowthfactor) использовали образцысыворотки крови больных.Кровь для определения концентрации VEGF бралинатощак из локтевой вены с 8 до 9 часов утра.
После свертывания крови пробирки центрифугировали при 2500xg в течение 10 минут, сыворотку отбирали и хранили при -20°С до проведения исследования.Концентрацию VEGF всыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованиемреактивов фирмы «DRG» (США).Методика генетических исследованийПри генетическом исследовании материалом для исследования послужила тотальная геномная ДНК, взятая из образцов цельной венозной кровииз локтевой вены.Эту кровь смешивали с антикоагулянтом (6% раствор этилендиаминтетрауксусная кислота, ГОСТ 10652-73).
Образцы крови находились на хранении в замороженном состоянии при температуре - 200С до момента выделения ДНК, авыделение ДНК происходилопри помощи методафенол-хлороформной экстракции (JohnsM.B., PaulusJ.E., 1989; LahiriD.Ketal.,1991).У больных РАГ методом полиморфизма длины рестриктных фрагментов(ПДРФ) определяли 3 полиморфных варианта генов: «-31 T/C» в гене интерлейкина 1β, «-174 G/C» в гене интерлейкина- 6 и « 308 G/A» в гене ФНОα. В работе использовались специфические последовательности праймеровдля ПЦР.
Для точек IL-1β(-31)С/T использовался ПДРФ-анализ с рестриктазами Alu I.682.4. Фармакологическое обоснование назначения препаратов дляпреодоления фармакорезистентности артериальной гипертензииВ качестве антицитокиновой терапии, снижающей уровень провоспалительных белковых медиаторов, в работе было использовано назначениепентоксифиллина в дозе 1200 мг/сут.
Пентоксифиллин, производное ксантина,способенснижатьпродукциюФНО-αкакinvitroтакиinvivo(BergmanM.R. etal., 1996; FeldmanA. etal., 1997). Препарат блокируетвнутриклеточную аккумуляцию мРНК ФНО-α, предотвращая синтез этогоцитокина, и увеличивает уровень внутриклеточного цАМФ (SchobersbergW.etal.,1996, Torre-AmioneG. etal., 1999). Эффективность пентоксифиллина убольных c кардиальной патологией изучалась в ряде исследований. Так,назначение пентоксифилина больным дилатационной кардиомиопатией приводило к снижению уровня ФНО-α в плазме, увеличению фракции выброса(WaageA.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
