Главная » Просмотр файлов » Ю.И. Афанасьев, А.Н. Яцковский - Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии

Ю.И. Афанасьев, А.Н. Яцковский - Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии (1135293), страница 4

Файл №1135293 Ю.И. Афанасьев, А.Н. Яцковский - Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии (Ю.И. Афанасьев, А.Н. Яцковский - Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии) 4 страницаЮ.И. Афанасьев, А.Н. Яцковский - Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии (1135293) страница 42019-05-12СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 4)

Открытие волновых свойств, присущих электронам, послужило основой для создания нового класса приборов — электронных микроскопов. Максимальное разрешение, которое может быть получено в них при специальных условиях, составляет 0,2 нм, а увеличение может достигать !00— 200 тыс. раз. Принципы работы электронного микроскопа Принципиальная схема построения изображения в световом и электронном микроскопах сходна. Однако существует ряд отличий: в электронных микроскопах источником электронов служит катод, входящий в состав электронной пушки, в качестве линз используются электромагнитные катушки, В связи с тсм что в воздухе электроны могут проникать на незначительные расстояния, а затем их скоростагтаснет, в электронном микроскопе с помощью специальных насосов создастся высокий вакуум (!О 4 мм рт.

ст.). В колонне микроскопа (тубусе), из которой откачан воздух, последовательно расположены катод (вольфрамовая нить), анод (металлическая пластинка с отверстием посередине), магнитные линзы, люминесцентный экран, фотопластинки ("магазин"). '!'ок, проходя через вольфрамовую нить катода, нагревает ее и вызывает эмиссию электронов.

Поданное на катод высокое напряжение создает большую разность потенциалов между катодом и анодом, что обеспечивает движение электронов к аноду и далее вниз по колонне микроскопа. Электронный пучок сначала фокусируется первой магнитной линзой — конде нсо- рно. Ббльшая часть электронов, проходя через объект, не отклоняется. Электроны, прошедшие через объект, фокусируются второй магнитной линзой — о б ъ е к т и в н о й, которая дает увеличенное изображение объекта. Это изображение снова увеличивается третьей магнитной линзой — проекционной. При этом электроны, которые проходят через объект, вызывают свечение экрана, покрытого люминофором, а отклонившиеся электроны не доходят до экрана и не вызывают свечения.

Изображение, полученное на люминссцентном экране, можно сфотографировать, если поднять экран, под которым расположен фотомагазин с фотопластинками, чтобы пучок электронов попал на фотопластинку. Подготовка материала для электронно-микроскопического исследования Подготовка к электронно-микроскопическому исследованию включает в себя те же этапы, что н при светооптической микроскопии, но с рядом особенностей (см. рис.

2, Б). Взятие материала необходимо проводить как можно быстрее, небольшими объемами (не более 1 ммэ). Фи к с а ци ю осуществляк>т, как правило, глутаральдегидом, хорошо стабилизирующим белки, с последун>щей дофиксацией в тетраоксиде осмия, который стабилизирует фосфолипиды, на холоде в течение нескольких часвв. После фиксации материал промывак>т буферным раствором, обсзвоживают спиртами возрастающей концентрации. У п л о т н е н и е и з а л и в к у производят с помощью полимеризующейся смеси (эпоксидные смеси).

Для этого оГ>разцы материала кладут в формы, заливают эпоксидной смолой и помещают в термостат, где происходит полимернзация смолы. Для приготовления срезов (толщиной 30 — 50 нм) используют ультратомы, в которых подача блока с объектом на неподвижный нож осуществляется с помощью теплового расширения несущего стержня, В качсстве ножей применяют специально приготовленные сколы стекла или алмазов. Получаемые при этом последовательные серийные срезы сползают с ножа в виде лент на поверхность жидкости в прикрепленной к ножу ванночке, откуда их надо перенести на сеточки, Контрастирование (или окрашивание) с р е зов проводят с помощью солей тяжелых металлов (свинца, вольфрама, урана). Содержащиеся в этих соединениях элементы с высокой атомной массой осаждав>тся на фосфолипидах клеточных мембран и не пропускают электронный луч, вследствие чего эти участки клетки выглядят на экране более темными, контрастными по сравнению с другимн участками, не содержащими фосфолипидов.

Для ориентировки в изучаемом обьекте используют метод изготовления полутонких срезов (! — 2 мкм) с последующим окрашиванием (метнленовым синим или толуидиновым синим). Окрашенный срез рассматривают с помощью микроскопа для определения области, которая должна быть изучена на ультрамикроскопичсском уровне, н в дальнсйшем с этого участка прицельно готовят ультратонкие срезы. 7. Пропитывание материала заливочной средой, состоящей из эпоксидных смол, до 24 ч.

8. Заливка материала эпоксндными смолами с добавлением катализатора и последующим помещением его в термостат (60 'С) для полимеризации до 24 ч. 9. Заточка н резка блока. 10. Окрашивание срезов: а) получение полутонких срезов и окрашивание их метиленовым синим; б) получение ультратонких срезов с последующим окрашиванием их (контрастированием) раствором уранилацетата (1 — 2 ч)„а затем раствором цитрата свинца (20 — 30 мин). ЗАДАНИЯ 1. Запишите в тетрадь требования, предъявляемые к гистологическому препарату (см. с, 9) . 2.

Отметьте и таблице название основных этапов изготовления гистологического препарата и укажите кратко сущность каждого из них (см. Учебник, с. !6). Этапы и>тот 3. Заполните.каблицу. перечислив основные группы красителей, укажите название структур, воспринимающих краситель, н примеры красителей (см. с. 13).

!6 !7 Методика обработки материала для электронно-микроскопического исследовании 1. Быстрое взятие материала. 2. Фиксация в 2 — 4 % забуфсренном растворе глутаральдегида в течение 1 ч. ог>.> 3. Промт>вка материала буферным раствором (рН 7,3 — 7,4) 3 раза по 30 мин. 4, Постфиксация в ! % растворе тетраоксида осмия в течение 1 — 2 ч. 5. Промывка материала буферным раствором 3 раза по 30 мин. 6. Обезвоживание в спиртах восходящей концентрации (70 %, 90 %, 100 %) по 10 мин, в 100 % — 2 раза по 15 мин.

4. Заполните таблицу, отметив оснонные виды микроскопии, их разновидности, кратко сформулируйте цели использования каждой разновидности (см. Учебник, с. 11). ' В салан с тем что данное занятие янлнется нераым а курсе гистологии, патологии и амбриологиа, заданию длн самоконтроля усноення материала могут яа>полниться после сто аанершеиня. ГУродолженне щабл, Возможнзае ориентиры Программа действия Объект Залаяие Ю МЕТ ОтИЧКСКИЕ ЛАЗАНИЯ КОАМООТОЯТЯЛЬНОЙ РАБОТЕ НА ЗАНЯТИИ Объекты изучения ь Препарат — тонкая кишка; окраска гематоксилином и зозином 3.

Закрепить навык мнкроскопирования гистологического препа- рата Объект Программа действ Задавив зе ориеятиры 1. Ознакомиться с принципами изготовления гистологического пре- парата в Батареи для проводки и заливки материала в парафин и целлоидин Парафиновые блоки Микротом Батарея цля окрашивания срезов ° Выяснить основиьк пы приготовления г логического прела Сопоставить посвец тельность процедур пользуемых при фн ции, обезвоживании лотнсини материала, бором реактивов в б реях для его прова Познакомиться с мет ческими принципам прибором для изгото ния срезов. Г!ознаком ся с процедурой акра вания гематоксилпно зозином и провести о ску цсллоидиновых ср ст, помещенный зй заданий и под- 2 ° 1 — имеют форму пальцевидных вырастив, расположены на внутренней поверхности органа; 2 — покрывает поверхность ворсинок; 3 — окрашены в ° Препарат — тонкая кишка; окраска гематокснлином и зозином 4.

Изучить тинк ториальные свой ства гистологиче скнх структур ° См. Рис. 1 Микроскоп "Биолам" г,в устройство мик- роскопа ° Найти и сопостави новные части микро с изображенными и сунке уночные подписи ' Найти при малом увеличении: 1) ворсинки тонкой кишки; 2) слой эпителия. При болыпом увеличении обратить внимание на: 19 !8 1. Микронрепараты для самостоятельного изучения. ° Тонкая кишка. Окраска гемптоксилином и эозином. 2. Демонстрационные препараты.

° Яйцеклетка !сводит) млскопнташщего. Окраска азокпрмином ло Гейдснгнйну. ° Белая жировая ткань. Окраска суданом РД и гематоксилином. 3. Рисунки. ° Микроскоп для биологических исследований (см. Рис. 1). ° Этапы приготовления гистологического препарата для световой и электронной микроскопии (см. рис. 2). 4. Оснащение н технические средства для гистологических исследований. ° Батареи для проводки и заливки материала в парафин и целлоидин.

° Блоки с кусочками органов, залитых в парафин. ° Микротом и ножи для резки материала. ° Батарея для окрашивпния срезов гематоксилином и эозином. ° Микроскоп для свсгооптического исследования. Карти задипнй и ориентировочные основы действия ° установить микроскоп и выполвигь следующие манипуляции: 1) вровсрить положение объективов, кондснсора и состояние диафрагмы; 2) отрегулировать освещение с помощью вогнутого зеркала; 3) поместить препарат на предметный столик и сориентировать его с учетом обратного изображения микроскопа; 4) установить объектив малого увеличения на расшояиии 0,5 — 1 см от покровного стскла и, вращая винт макроподачи на себя, сфокусировать изображение.

5) выбрать участок среза для мик)хккопии прн болыпом увеличении; б) слегка подняв тубус<>- держатель, произнести замену объективов и установить объектив болылого увеличения на расстоянии не более 1 мм от покровного стекла; 7) вращая винт ма. кроподачи на себя, найти изображение и скорректи)ювать его винтом мнкроподачи; 8) опуская конденсор,скорректировать освещенность и контрастность изображения; 9) по окончании работы поднять тубусодержатель, придать микроскопу и препарату походное положение 1 — над столиком микроскопа установлен объектив малого увеличении кондеи сор поднят, диафрагма открыта; 2 — поле зрения освещено равномерно; 3 — препарат лежит покровным стеклом вверх, срез находится под объсктивом, внутренняя поверхность органа обращена к исследователю; 4 — установка объектива контролируется наблюдением сбоку, при правильной фокусировке четко видна структура органа Гпозможна корректировка микровинтом); 5 — изучаемый участок помещен в центр поля зрения; 6 — установка объектива контролируется наблюдением сбоку; 7 — при медленном вращении винта четко видны детали с~роения органа; 8 — с уменьшением освещенности контрастность изображения возрастает; 9 — установлен объектив малого увеличения, копдснсор поднят, препарат помещен в лоток или в ко- робку Продолжение табл.

Характеристики

Список файлов книги

Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6472
Авторов
на СтудИзбе
304
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее