Б. Альбертс, А. Джонсон, Д. Льюис и др. - Молекулярная биология клетки (djvu) (1129766), страница 184
Текст из файла (страница 184)
При выделении животных клеток из образца ткани их обрабатывают трипсином, коллагсназой и ЭДТА. Почему такая обработка необходима, и что делает каждый из компонентов? Почему такая обработка не убивает клетки? Задачи ' 887 8.6. Как вы думаете, станет ли вгззможшзгм получение антитела к другому антителу? Объясните свой отвсг. 8.7. Объясните разницу между методами скоростной седиментации и ссдимента. ционного равновесия. Для каких целей используется каждый из них? Какой пз них, по вашему мнению, больше подходкч для разделения двух белков разного размера? 8.8. Коэффициент седиментации тропомиозина. масса которого составляет 93 кДа, равен 2,б Я, тогда как козффициснт ссдиментации гемоглобина массой 05 кДа равен 4,3 Б.
(Коэффициент седиментации Б является линейной мерой скорости ссди ментации: оба увеличиваются или уменьшаются параллельно. ) Модели а углеродных скелетов этих двух белков изображены на рис. О8.1. Почему более крупный белок осаждается медленнее, чем небольшой? Можете ли вы придумать аналогию из по вседневной жизни, которая могла бы помочь ответить на этот вопрос? Рис. С)8.1. Модели углеродных скелетов тропомиозина и гемоглобина !задача 8.8).
8.9. В классической рагюте, которая доказала полуконсервативггую реплика цию ДНК, Месельсон (Мсзс!воп) и Сталь (ЯаЫ) начали с того, что показали, как ДНК сама по себе будет форми)ювать полосу при седнментацнонном равновесии. Онн смешали случайным образом расщепленную ДНК Е. сой с раствором С5С!. Плотность конечного раствора составила 1,71 г мл. Как показ шо на рис. Я8.2, с увеличением продолжительности центрифугирования при 70000 д ДПК, которая сначала была распределена по всей центрифужной пробирке, скош)сгприровалась в полосе в центре.
А. Объясните, что происходитсо временем и по часы центрифузкноепопе— чему ДНК формирует выраженную полосу. Б. Чему равна плавучая плотность ДНК? (Плот- хь:.". ность раствора, прн которой ДНК «плавает» в равно 2,1 весии определяет ее «плавучукз плотностью) 4 з В. Даже если бы ДНК центрифугировали в два 8,4 раза дольше, ширина полосы останется примерно такой же, как внизу рис. ОИ.2. Почему полоса не становится более узкой? Предложите несколько возможных объяснений ширины полосы ДНК в равно 12,в весии. 14,9 17,1 Рис. С«8.2.
Фотографии поглощения ультрафиолета, показываю- 19,2 щие последовательные стадии образования полосы ДНК б соб !задача 89). ДНК, поглощающая ультрафиолет, на фотографиях выглядит как темные области. Дно центрифугкной пробирки расположено справа. !М. Мезе)зоп апг) Е. уу. 5тай, Ргос. Иондсо0. 5сс ЕГ5А 44: б71-682, 1958. С любезного разрешения Национальной академии наук США.) 43,5 8 10.
Метод гибридом позволяет создавать моноклональные антитела практи чески к любому белку. Почему же тогда мечение белков эпигонами настолько распространепттая практика, особенно если учесть, что эпитопные метки могут влиять на функционирование белка? 8.11. Сколько копий белка должно присутствовать в клетке, чтобы его можно было увидеть в геле? Предположим, что вы можете поместить в гель 100 мкг клс точного экстракта и зарегистрировать при помощи окрашивания серебром 10 нг. Концентрация белка в клетке составляет примерно 200 мг:мл, типичный объем клетки млекопитающего равен примерно 100 мкм, а бактерии -- 1 мкмз, При дан ных значениях параметров рассчитайте количество копий белка массой 120 кДа в клетках млекопитаюшего и бактерии, необходимых для того, чтобы белок давал видимую полосу в геле.
До точных расчетов можете оценить порядок величины. 8.12. Вы хотитс амплифицировать ДНК мелсду двумя участками последова тсльности, показанными на рис. ()8.3. Выберите из приведенных праймеров те, которые позволят вам амплифицировать ДПК при помощи ПЦР. амппифицируемая ДНК 5' -ОАССтОтООААОС з -стООАсАссттсО САтАСОООАттОА- 3' шАтОссстААст-5' праймеры «) 5' - ОАсстОтссААОС- з (2) 5' — стООАсдссттсО- 3' (3) 5' - СОААООтОтССАО- 3' (4) у -ОсттссАсАООтс-3' (5) 5'-САтАСОООАттОА-3' (5) 5' — ОтАтцссстААст — 3' (7) 5 — тОттАОООСАтАС- З~ (в) 5' - тсААтсссОтАтО - 3' Рис.
ЯЗ.З. ДНК для амплификации и потенциальные праймеры ПЦР (задача 332), Литература Обсцая АпэцЬе! Г.М., Вгеп1 й., Кшйз(оп К.Е. е1 а1. (ест (2002) Яюг1 Рго1осо13 ш Мо!есп!аг Вю!о)(у, 5(Ь ес1. )ч)ете т'ог)с: Ъ'!!еу. 8 13. На самом первом этапе ПЦР с исполыюваниеы геномной ДНК с праймсров начинается синтез, который заканчивается только но завершении цикла (или когда встречается случайный конец ДНК). Однако в конце 20 или 80 циклов (обычное число для амплификации) единственный видимый продукт точно определяется концами праймеров. В каком цикле впервые синтезируется двухцепочечный фрагмент правильного размера? 8 14, Обьясните разницу между мутацией с приобретением функции и доминанпю негативной мутацией.
Почему обе эти мутации обычно бывают доминантными? 8.15. Обсудите следующее утверждение: «Мы не имели бы сегодня ни малейшего представления о значении инсулина как рсгуляторного гормона, если бы его отсутствие не было связано с тяжелым заболеванием человека — диабетом. Только серьезные последствия его отсутствия направили ранние исследования в сторону идентификации и изучения нормальной роли инсулина в физиологии».
Литература 889 Вгоюп Т.А. (2002) Сеповеа 2, 2пг1 ес1. Ыетч 'г'огЕг: ЪЧ1!еу-Е !ая ЯресСог 1). 1., Оо!бвап К. 1). й 1.е!пи апг(! . А. (ес!а) (1998) СеПя А СлЪогаСогу Маппа!. СоЫ арпад НагЬог, Ы'г': Со!8 8рг(пК НагЬог 1аЬогаСогу Ргеяс %'аСзоп.Е. 1)., Сапс1у А.А., Муега К. М. й ч(г1СЬоиаЫ,Е.А. (2007) КесовЬ|папС Е)ЬЕА; Оепез апг! Сеповеа — А 8ЬогС Сопгзе, Згг( ест. Ь(ечч Уог(г: ЪЧН Ггеевап. Выделение клеток и выращивание их в культуре ЕввегС-Впс)г М.К., Воппег К.Г., Зпп(Ь Р.Р. еС а1.
(1996) 1.азег сарСпге в!сгойааесС1оп. Бс(епсе 274: 998-1001. Нага К.О. (1965) С!опа1 1(гоиСЬ оЕ гпапипаПап се!Ь 1п а сЬевкаПу г(е(1пей аупСЬеВс вейшп. Ргос. Ха(!. Аеас(. 5сг. ('5А 53: 288 — 293. Наг!отч Е. й Е.апе Е). (1999) (7ялу Ап(СЬогЕ(ея А ЕаЬогасогу Мапиа!. СоЫ ЗрппК НагЬог, ЬЕ'г': СоЫ ЯрппК НагЬог Е.аЬогаСогу Ргеея НеггепЬегб 1 .А., Яи ееС К. О, й НеггепЬег8 1.А.
(1976) Г!погеасепсе-асВчаСег1 сеП зогС(пЛ. 5сЕ. Ат. 234: 108 — 116. 1еч1-МопСа!с!в К. (1987) ТЬе пегче дго~чСЬ ЕасСог СЫгСубче уеагз 1аСег. 5с(еисе 237: 1154 — 1162. 1.егоп Р. Н. й Е)а!еу б. О. (2005) ТЬегарепВс роСепВа! оЕ евЬгуовс а(егп сеПя В1оос( Нег. 19: 321 — 31. МПа(е!и С. (1980) Мопос!опа1 апВЬойея всю'. Ат. 243: 66 — 74. Очистка белков с1е с)пче С. й Веап(ау Н.
(1981) А аЬогС Ь1а(огу оЕ С1аапе ЕгасС(опаС!оп.,/. Се(1. В(о1. 91: 293а — 299я КгоЛап Ы.,Е., Садпеу О., 'г'и Н. еС а1. (2006) С!оЬа! 1апг)асаре оЕ ргоСеш совр!ехеа ш СЬе уеааС ЯассЬаготусез сегеи(г(ае. Ха(иге 440: 637 — 43. 1.аепипП ()К (1970) С!сачаке оЕ зСгпс(пга1 ргоСе!па г(ппп1( СЬе азаевЫу оЕ СЬе Ьеаб оЕ Ьас(епорЬабе Т4. Ха(иге 227: 680 — 685. %гепЬег1( М.ЪЧ. й Ма(СЬае(,Е.Н. (1961) ТЬе с1ерепс1епсе оЕ се!1 Егее рго(е1п аупСЬеяз 1п Е. со1г оп па(пгаПу осспгпп1( ог аупСЬебс ро!упЬоппс!еоСЫея Ргос. Ха(1.
Асад. 5сЕ. (75А 47: 1588 — 1602. О'ГаггеП Р. Н. (1975) Н1КЬ-геао!пС1оп Сто-йвепяопа1 е1ес(горЬогеяа оЕ рго(евя ,/. В(о1. СЬет. 250; 4007 — 4021. Ра!аг(е О. (1975) 1пСгасеПп1аг азресСз оЕ СЬе ргосеаа оЕ ргоСеш зупСЬеяз. 5сюеисе 189: 347 — 358. Ясореа К. К. й СапСог С. К. (1994) РгоСеш Рппбсабоп: Рппс1р!еа апгЕ РгасВсе, Згг( ей Ь(еч Уог1с ЗрппЛег-Нег!ад.
Анализ белков Вгапг(еп С. йТооге Е. (1999) !пСгог(псС!оп Со РгоСе!п ЯСгпсСпге, 2пг( ей Ь(ею г'огЬ: Оаг!апг! Бс(епсе. Г1е1ба Я. й Яопб О. (1989) А поче! ВепеВс аузСев Со г(еСесС ргоСе1п-ргоСе1п шСегасВопя Ха(иге 340: 245 — 246. С!ервапа В. ЬЕ., АгСава Б. К. еС а1. (2006) ТЬе Е!погезсепС Соо!Ьох Еог аазезз!п(4 ргоСеш 1осаВоп апгЕ ЕппсС1оп. 5с(епсе 312: 217 — 24. Кепс!геи,). С.
(1961) ТЬе СЬгее-йгпепяопа! ебгпсСпге оЕ а ргоСеш гпо1есп1е. 5сб Ат. 205: 96-111. Кп18ЬС 7..А, й ЗЬоЬаС К.М. (2007) СЬеппса1 депебсз: ЮЬеге КепеВса апсЕ РЬаппасо!обу вееС. Се!1 128: 425 — 30. 890 Часть 111. Методы К!8ао( С., 5ЬечсЬеп!со А., Ко(г В. ес а!. (1999) А депепс рго(е!и рпгйсаВоп ве(Ьос! Еог рго(с!и совр!ех сЬагас(спхаНоп апс! Рго(сове схр!огаНоп. ХаГите Вгогесlто1. 17: 1030 — 1032. 'ссгазЬЬпгп М.Р., ггго!сегх О. апсЕ Уа(са,).К. (2001) Е.агде-хса!е апа1ух!х оЕ йе усах( ргогеове Ьу во!(Ыппепяопа! рго(е!и !с!епг!Е!саг!оп (есЬпо!оду. Хагите Вго(есЬио1.
19: 242 — 7. Ъ'п(Ьг!сЬ К.(1989) Рго(е!и х(гпсспге с1е(егп~паНоп |и ю!оВоп Ьу ппс!еаг ва!!пе(!с геюпапсс хрес(гоасору. 5сгепсе 243: 45 — 50. Выделение, клонирование и секеенировоние ДНК Ас1авх М. Е)., Се!пПсег Я. Е., Но!с К. А. сс а!. (2000) ТЬе Кепогпе хсцпепсс оЕ Отохор1гг1а те1аподахеет. 5сгепсе 287; 2185 — 2195. А!ичпс,). С., Ксвр Э.,Е. й 8(аг!с С. К.
(1977) Ме(Ьос! Еог с!ссес(!оп оЕ хрсс!Е!с КЬЕАх ш адагозе !|е!а Ьу Егапх(ег Ео гПаЪепху!охувсйу1-раре гапс! ЬуЬпйхаВоп сг!ЕЬ Е)ИА ргоЬея Ртос. Ха11. Асас1. 5сг. (?5А 74: 5350 — 5354. В1айпег Г.К., Р!пп1ссй О., В!осЬ С.А. сс а!. (1997) ТЬе совр!е(с !',еповс хецпепсс оЕ Егсlгетгсlгга сой К-12. 5сгеисе 277; 1453 — 1474. СоЬеп Я., СЬапд А., Воуег Н. 8г НеП!пд К.
(1973) Сопх(гпсВоп оЕ Ь!о!од!саПу !ппсНопа! Ьас(ег!а! р!аяп!с!а гп |исто. Ртос. Ха11. Асад. 5сг. (?5А 70; 3240 — 3244. 1п(сгпаВопа! Ншпап Сеповс Бсцпепс!и!! Сопюг(!ов (2000) 1шВа! хецоепс!пд апс1 апа!уях оЕ ЕЬе Ьшпап депове. Ха|иге 409: 860 — 921. 1п(сгпаВопа! Ншпап Сепогпе Яецоепс!пд Сопюгг!шп (2006) ТЬе Р!ЧА хецоепсс, аппо(аВоп апс! апа!уях оЕ Ьшпап сЬговоюве 3.
Хагите 440: 1194 — 1198. Яас!сюп Р., Бувопа К. й Вегд Р. (!972) ВюсЬеппса! |пейос1 Еог !пхегВпд пегг КепеВс !п(огва(!оп !п(о Е)ХА оЕ яппап гдгоа 40; с|гсо!аг БЪ'40 Е)ХА во!есп!ех соп(аш|пд !авЬс!а РЬаде депех апс! 'сЬе да!ас(охе орегоп оЕ ЕхсЬепс1гга со!1. Ртос. Ха11. Аеас(. 5сб (?5А 69: 2904 — 2909. Мап|аНх Т. е( а!. (1978) ТЬе |ао!айоп оЕ а(гпс(пга! Кепех Егов ПЬгапеа оЕ еп!сагуо(!с ЭХА. Сей 15: 687 — 701. МпП!х К.В. (1990).
ТЬе пппюа! ог!фп оЕ ЕЬе ро!увегахс сЬа|п гсасВоп. 5сг. Ат. 262: 56 — 61. Ыа(Ьапх О. й Яв!й Н.О. (1975) Кея(пс(!оп епс!опас!еахех в йе апа!уях апс1 гех(гпс(опас! оЕ с(па |по!ссп!ея Аппи. Иев ВюсЬет. 44: 273 — 293. ЯаПс| К.К., Ое!Еапс! Е).Н., 8(оЕЕе! Я. е( а!. (1988) Рпвег-с!!тес(ес! епхуваНс ап|р!йсаВоп оЕ Е)ЬЕА ичй а ЕЬеппох(аЫе Е)ХА ро!увегахе. 5сгепсе 239: 487 — 491. ЯавЬгоо!с,)., КпххсП Р. (2001) Мо!есо!аг С!оп!пд: А Е.аЬога(огу Маппа1, Згс1 ес1. СоЫ 8рппд НагЬог, ЬЕ г' СоЫ арпад НагЬог Е.аЬога(огу Ргсхя Бапдсг Г., ЬПсЫеп Я.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
