И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных (1128356), страница 40
Текст из файла (страница 40)
Вазоактивное вещество — нитропруссид натрия (31ЧР)— вводится микрошприцем объемом 50 — 100 мкл. БМР является донором оксида азота. Это вещество быстро разлагается на свету, но устойчиво к повышению температуры. В кровеносной системе происходит метаболизм ЗМР, оксид азота выделяется на поверхности сосудов под действием МАВН-оксидоредуктазы. Оксид азота активирует растворимую гуанилатциклазу клеток гладких мышц сосудов, вследствие чего они расслабляются. Маточный раствор ЯЧ Р (0,5 мг/мл) готовят на физиологическом растворе непосредственно перед экспериментом.
5. Вещество для наркоза — нембутал (этаминал натрия). 6. Барокамера для крыс; раствор монокроталина. Моделирование легочной гипертензии. Крысам вводят одноразово подкожно раствор монокроталина в дозе 60 мг/кг — в этом случае гипертензия развивается через 3 — 4 недели, либо прибегают к 12-часовой экспозиции животных в барокамере с разрежением воздуха, соответствующим 4500 м над ур. моря — при этой модели гипертензия развивается в течение 2 недель.
204 Часть И. Практические задачи по патофизиологии Имплантация катетеров. В эксперимент берут параллельно двух животных — с нормальным и повышенным легочным давлением. Крыс наркотизируют нембуталом (40 мг/кг внутрибрюшинно) и фиксируют на операционной доске. Венозный катетер — полиэтиленовую трубку с внутренним диаметром 0,5 мм заполняют физиологическим раствором с гепарином (50 МЕ/мл), зажимают кончик и подсоединяют к датчику давления через переходник— трубку того же диаметра, также заполненную физиологическим раствором. Правую яремную вену отпрепаровывают в проксимальной части шеи. Надрез кожи делают примерно посередине между центральной линией и краем шеи.
Под отпрепарованный от соединительной ткани сосуд подводят пинцет (чтобы излишне не растягивать сосуды, расстояние между его браншами должно быть не более 5 — 7 мм) и протягивают две лигатуры. Одну лигатуру затягивают на дистальном конце отпрепарованной вены, вторую завязывают слабым единичным узлом, но не затягивают. Ближе к дистальному краю на сосуде делают надрез (с помощью сосудистых ножниц), который затем расширяют сосудистым пинцетом, и в разрез вводят кончик катетера.
Второй лигатурой катетер закрепляют, сосуд снимают с пинцета. Катетер продвигают по сосуду до правого предсердия. При введении венозного катетера регистрируют давление: появление пульсовой волны с амплитудой около 10 мм рт. ст указывает на то, что кончик катетера достиг правого предсердия. Катетер фиксируют в этом положении лигатурой, пережимают, отсоединяют от датчика давления и подсоединяют к переходнику с внутренним диаметром 0,1 мм, который соединен с микрошприцом. Второй катетер имплантируют через правую общую сонную артерию. Для того чтобы отпрепаровать артерию, стекляным крючком отделяют от грудинно-подъязычной мышцы, которая идет медиально вдоль шеи, грудинно-ключично-сосцевидную м шцу, составляющую с ней острый угол.
Подготовка катетера и и рядок операции такие же, как и для имплантации венозного катетера. Катетер в артерию вводят также под контролем формы пульсовой волны. В непосредственной близости к клапану пульсовая волна исчезает, но величина среднего давления не изменяется. (В левом желудочке диастолическое давление падает почти до нуля, а систолическое достигает 100 — 160 мм рт. ст.) Положение катетера фиксируют, подшив его к соединительной ткани, и подсоединяют к шприцу для введения растворов нитропруссида натрия. Для измерения артериального давления катетер вводят через бедреную артерию в аорту. Отпрепаровывают проксимальный участок артерии.
В качестве катетера используют полиэтиленовую трубку с внутренним диаметром 0,1 мм. Длина части катетера, введенной в сосуд, составляет 5 — 6 см. Порядок действий при постановке катетера такой же, как и в других случаях. Нужно убедиться, Тема 111. Патофизиология дыхания 205 что при выбранном положении катетера пульсовая волна хорошо выражена (катетер не упирается в стенку сосуда), и после этого зафиксировать его лигатурой.
ХОД РАБОТЫ В ходе опыта регистрируют среднее артериальное давление при введении разных доз нитропруссида натрия. В условиях данного эксперимента его действие выражается как кратковременная гипотензивная реакция. Чтобы получить зависимость "доза-эффект", используют три дозы: 0,5, 1 и 2 мкг/кг. Раствор вводят болюсно в объеме 10— 50 мкл. К 100 мкл маточного раствора ЯХР добавляют 2,4 мл физиологического раствора и таким образом получают раствор, в 100 мкл которого содержится 2 мкг ЯХР. Последовательным разведением в два раза получают растворы, содержащие соответственно 1 и 0,5 мкг ЯЧР в 100 мкл. Таким образом, крысе весом 200 г вводят по 20 мкл растворов, при весе 300 г — по 30 мкл растворов и т.д. Растворы вводят попеременно через артериальный и венозный катетеры, начиная с меньшей концентрации.
Чтобы вещество попало в кровоток, катетер и переходник промывают физиологическим раствором в объеме, примерно равном двум объемам переходника и катетера (30 — 100 мкл). Перерыв между введениями — 10 — 15 мин. Во время эксперимента необходимо контролировать глубину наркоза.
Признаком ослабления наркотического сна является увеличение среднего артериального давления. В этом случае вводят внутрибрюшинно дополнительную дозу этаминала натрия: 20 или 10 мг/кг. Так как эксперимент занимает много времени, следует также предотвращать переохлаждение животного (например, использовать термостатируемую грелку). Морфоконтроль развития легочной гипертензии. После опыта крысе дополнительно вводят нембутал в дозе 40 мг/кг и вскрывают грудную клетку. Сердце извлекают для определения наличия гипертрофии правого желудочка (ПЖ) как признака развития легочной гипертензии. Удаляют предсердия и отрезают правый желудочек. У здоровых (нормотензивных) крыс стенка правого желудочка гораздо тоньше, чем стенка левого желудочка (ЛЖ).
При сильной гипертрофии желудочки могут не отличаться по толщине стенки, однако полость правого желудочка сохраняет полу- лунную форму, в то время как поперечное сечение полости левого желудочка имеет форму круга. Взвешивают левый желудочек с перегородкой и отдельно — правый желудочек. Вычисляют относительную массу правого желудочка: масса ПЖ х100% масса ПЖ+ масса(ЛЖ+ перегородка) Часть И. Практические задачи по патофизиологии 206 Относительная масса правого желудочка, превышающая 21%, указывает на развитие легочной гипертензии. Наличие легочной гипертонии можно также определить с помощью прямого измерения давления в правом желудочке или по изменению векторной электрокардиограммы. ОБРАБОТКА И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Рекомеидуемая литература 1.
Физиология и патофизиология легочных сосудов/ Под ред. Е.К. Уэйра, ДЖ.Т. Ривса. М., 1995. 2. Юапд В., ВасйюсЬ М.Ю. С11п1са! 1г1а1ып рв1гпопагу Ьурег~епяоп//Аппп. Кеч. Мед. 1997. Ч. 48. Р. 399 — 408. Задача 2. Исследование устойчивости животных к экзогенной гипобарической гипоксии ВВЕДЕНИЕ Экспериментальные модели гипоксии должны точно отражать патогенез клинических гипоксических состояний и в то же время быть достаточно простыми и легко воспроизводимыми. Для пер- Измеряют максимум и длительность реакции.
Снижение давления целесообразно представлять в процентах от уровня давления до введения нитропруссида. Сравнивают эффект введения вещества через малый круг кровообращения (через правый желудочек) и через артериальный катетер — сразу в сосуды системного кровообращения. Так как в первом случае нитропруссид отчасти действует в легочном русле, давление в аорте понизится на большую величину при попадании вещества прямо в большой круг кровообращения. Сравнивают результаты, полученные на нормотензивных крысах и крысах с легочной гипертензией.
Сосудистые реакции малого круга кровообращения могут влиять на системное артериальное давление, так как вследствие изменения кровообращения в легких меняются венозный возврат к левому желудочку сердца и сердечный выброс. Общая площадь кровеносного русла легких при легочной гипертензии уменьшается, кроме этого, страдают системы ферментов, локализованные на поверхности сосудов малого круга кровообращения. Уменьшается также чувствительность гладкомышечных клеток сосудов к оксиду азота. Совокупность всех указанных факторов приводит к тому, что кривые "доза-эффект" при введении нитропруссида натрия через правые отделы сердца, полученные для крыс с легочной гипертензией, лежат ниже, чем у нормотензивных животных.
Тема 111. Патофизиология дыхания 207 МЕТОДИКА Работу проводят на самцах белых нелинейных крыс в возрасте 4 — 6 месяцев. Определяется время развития гипоксического синдрома и время реституции у животных в условиях имитации подъема на экстремальную высоту при 1) введении разных доз нитрита натрия (опытные группы) и 2) сохранении нормальной кислородной емкости крови (контрольные животные). Для получения достоверных'результатов необходимо обследовать не менее 20 животных. вичного отбора антигипоксантов рекомендуется использовать три основные формы кислородной недостаточности — экзогенную гипоксию, гемическую гипоксию и гистотоксическую, или лервичнотканевую, гипоксию.
В основе гистотоксической гипоксии лежит прямое взаимодействие дыхательных ядов, например таких, как синильная кислота и ее соли, азид натрия, с цитохромоксидазой — ферментом терминального участка дыхательной цепи. Для моделирования гемической гипоксии часто используют нитрит натрия (ХаМО,), который уменьшает кислородную емкость крови за счет образования метгемоглобина. В основе экзогенной гипоксии лежит снижение напряжения кислорода во вдыхаемом воздухе, которого можно достичь разными путями.
При нормобарической гипоксии во вдыхаемой газовой смеси часть кислорода замещается на азот, но обедненная по кислороду газосмесь находится под нормальным атмосферным давлением. При гилобарической гипоксии общее давление смеси газов падает и абсолютное содержание кислорода во вдыхаемом воздухе также снижается. Последний вариант гипоксии наиболее часто встречается при высокогорных восхождениях.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
