И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных (1128356), страница 38
Текст из файла (страница 38)
Вскрывают грудобрюшную полость и освобождают сердце от перикарда. Правую и левую верхние полые вены, а также правую дугу аорты перевязывают. В нижнюю полую вену и левую дугу аорты вставляют канюли, которые соединяются силиконовыми трубочками системы для перфузии. Подробно техника приготовления препарата изолированного сердца описана в первой части книги (раздел 111). Круговая перфузия изолированного сердца. Из аорты по верхней трубке перфузат поступает в приемник, а оттуда, по нижней трубке, в нижнюю полую вену (рис. 15, А).
Объем перфузата в системе составляет 2,5 мл и поддерживается на постоянном уровне. Чтобы растяжение предсердия жидкостью не было слишком большим и сердце работало в постоянном ритме как можно дольше, уровень "венозного" притока устанавливают на отметке, соответствующей давлению 5 — 10 мм водного столба. Для этого сердце должно располагаться на 5 — 10 мм ниже уровня жидкости в приемнике. Рис.
15. Изолированное сердце лягушки в условиях круговой перфузии. А — модель системы для круговой перфузии изолированного сердца лягушки: 1— канюли; 2 — левая дуга аорты; 3 — нижняя полая вена; 4 — приемник; 5— луковица аорты; б — верхние полые вены; 7 — венозный синус. Б — схема экспериментальной установки для регистрации механической актив- ности изолированного сердца лягушки: 1 — изолированное сердце лягушки; 2— механо-индукционный преобразователь; 3 — усилитель; 4 — 1ВМ, оборудован- ный АЦП; 5 — многоканальный самописец Часть 11. Практические задачи по патофизиологии Регистрация сердечных сокращений. Для регистрации механической активности сердце растягивают при помощи 4 серфинов (2 — предсердных и 2 — желудочковых), что позволяет регистрировать сокращения предсердия и желудочка отдельно. Механограмму сердца регистрируют с помощью индукционного механоэлектрического преобразователя (рис.
15, Б). Регистрацию механограммы и кардиограммы производят на самописце Н-3030-4 при скорости лентопротяжки 1 и 10 мм/с. Регистрацию параметров сокращения изолированного сердца можно проводить параллельно на многоканальном самописце и используя любую многофункциональную компьютерную программу сбора и обработки данных. ХОД РАБОТЫ И ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ Задание 1. Определение кардиотропной активности низкомолекулярной пептидной фракции из тканей животногогибернанта Опыт проводят в следующей последовательности.
Сердце после изоляции на 30 мин оставляют в условиях круговой перфузии для стабилизации ритма и амплитуды сердечных сокращений. Когда эти показатели устанавливаются, вводят исследуемые вещества, выданные преподавателем. Это могут быть или суммарный экстракт с мол. массой 1 — 10 кДа из тканей гибернантов или отдельные пептидные компаненты данного экстракта. Сначала из перфузионной системы удаляют 0,1 мл перфузата, а затем вновь вводят такое же количество раствора Рингера. Показатели работы сердца при этом не должны изменяться.
Затем, предварительно удалив 0,1 мл перфузионного раствора, в приемник подают изучаемые вещества в том же объеме, разведенные до необходи ой концентрации раствором Рингера. Действие веществ наблюда т в течение 15 — 30 мин, после чего перфузионный раствор заменяют на свежий. Изучаемые вещества тестируются в диапазоне концентраций от 0,001 до 0,5 мг/мл. Для статистической обработки данных эксперимента используются непараметрические методы анализа данных.
Задание 2. Определение кардиотропной активности отдельных компонентов фракций тканей и их различных сочетаний В данном опыте действие одного из пептидов изучают в концентрации 10 — 100 мкМ. Кардиотропные эффекты наблюдают при концентрации нуклеотидов 0,1 — 100 мкМ. При изучении совместного действия отдельных компонентов фракций возможны сочетания: иеитид+иеитид, иеитид+нуклеотид, нуклеотид+нуклеотид. Тема 11. Патофизиология сердечно-сосудистой системы Эффект от совместного введения веществ следует сравнить с действием отдельных составляющих и эффектом суммарной фракции. Обратите также внимание, изменились ли эффекты отдельных компонентов при их совместном введении.
Рекомендуемая литература 1. Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю., Сухова Г.С. и др. Кардиотропное действие компонентов пептидных фракций из мозга гибернирующих сусликов//Нейрохимия. 1995.Т. 12. Вып. 4. С. 16 — 22. 2. Сухова Г.С., Игнатьев ДА., Ахременко А.К и др. Кардиотропная, гипометаболическая и гипотермическая активность пептидных фракций из тканей зимоспящих холодоадаптированных животных//Журн. эвол. биохим., физиол. 1990. Т.
26. М 5. С, 623 — 629. 3. Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. М., 1988. Задача 9. Висцеро-кардиальные рефлексы на сердце (на примере влияний с мочевого пузыря) ВВЩЕНИЕ Висцеро-кардиальные рефлексы обнаружены у всех классов позвоночных животных. Они возникают при патологических изменениях в желудке, желчных путях, печени, легких, кишечнике, органах выделения и могут быть вызваны раздражением этих органов. При разнообразных воздействиях на внутренние органы происходят значительные регуляторно-трофические изменения деятельности сердца и прежде всего глубокое рефлекторное торможение или, напротив, учащение сердцебиений. Нередко наблюдаются также разного рода аритмии сердца, изменение интервала Р— Я, атриовентрикулярный блок, экстрасистолия.
Висцеро-кардиальные рефлексы в основном не являются нормальными физиологическими проявлениями, но часто возникают в условиях патологии при значительных изменениях функционирования одного из внутренних органов. Они часто наблюдаются в клинике, проявляясь в виде значительных нарушений деятельности сердца. Иногда специально вызывают висцеро-кардиальные рефлексы для коррекции аритмий сердца. В связи с этим становится понятной необходимость исследования путей и характера проявления висцеро-кардиальных рефлексов. При искусственном раздражении желудка, кишечника, желчного и мочевого пузыря в эксперименте было показано, что характер этих влияний на сердце определяется величиной афферентной имиульсации от раздражаемого органа и эфферентной имиульсацией в сердечных ветвях блуждающих нервов.
Нижним уровнем замыкания висцеро-кардиальных рефлексов являются ядра плат Часть И. Практические задачи по патофизиологии Рис. 16. Изменение импульсации Х пары спинномозговых нервов и ЗКГ при растяжении мочевого пузыря лягушки: 1 — электронейрограмма спинномозгового нерва; 2 — ЗКГ; 3 — отметка раздражения в продолговатом мозге. Один из примеров изменения деятельности сердца и афферентной импульсации, идущей от мочевого пузыря при его искусственном раздражении, представлен на рис. 1б. Цель работы. Изучить рефлекторные изменения деятельности сердца при раздражении мочевого пузыря лягушки и выяснить пути этого рефлекса. Исследовать зависимость афферентной импульсации с мочевого пузыря от степени раздражающего воздействия. В работе регистрируются ЗКГ сердца лягушки в условиях сохранения нормальной иннервации и афферентная импульсация в спинномозговых нервах, идущих от мочевого пузыря, при разной степени растяжения пузыря.
Основные материалы, приборы и оборудование. Дифференциальный усилитель; фоторегистрирующее устройство; осциллограф типа С1-1б; регистрирующие биполярные проволочные сере ряные электроды; электроды для регистрации ЗКГ; катетер для мочевого пузыря; шприц на 5 мл; цепь для регистрации отметки аздражения; экранирующая камера; корковая пластинка для фиксации животного; набор хирургических инструментов.
Препаровка. Лягушку с интактной нервной системой (необездвиженную), находящуюся под легким эфирным наркозом, жестко фиксируют вентральной стороной вверх на корковой пластинке с помощью марлевых петель на суставах конечностей. Разрезают кожу, вскрывают грудобрюшную полость, по средней линии рассекают плечевой пояс, обнажают сердце, освобождают его от перикарда и захватывают верхушку сердца серфином на нитке. С помощью серфина приподнимают сердце и с двух сторон отпрепаровывают сердечные веточки вагосимпатических стволов так, как это описано в первой части "Руководства" (см.: Раздел Ш, Тема 2, с.?8 — ?9). Тема 11.
Патофизиология сердечно-сосудистой системы Рис. 17. Локализация 3 — 11-го ганглиев пограничного симпатического ствола и 1Ч вЂ” Х1 спинномозговых, Аор нервов травяной лягушки Делают продольный разрез брюшных мышц немного лате- Ж ральнее средней линии живота, по которой проходит брюшная вена.
Затем вену перерезают, предварительно наложив на нее две лигатуры. Е Отпрепаровывают У11 — У111 и Х вЂ” Х1 пары спинномозговых 7 нервов, идущих вдоль позвоночного столба (рис. 17), и один из Ю' нервов (лучше самый тонкий) берут на лигатуру. Ао В верхушку одной из лопастей Х мочевого пузыря вводят канюлю, Л предварительно соединенную со шприцем и заполненную раствором Рингера или физиологическим раствором. Канюлю закрепляют тугой лигатурой и прочно укрепляют на корковой пластинке.
При этом важно следить за тем, чтобы кончик канюли не упирался в стенку мочевого пузыря. Внимакие! При вставлении канюли нельзя дотрагиваться до мочевого пузыря хирургическими линцетами! Используют только анатомические пинцеты, желательно с тупыми концами. Подготовка к работе. По окончании препаровки корковую пластинку с лягушкой помещают в экранирующую камеру. Налаживают одновременную регистрацию деятельности сердца в виде записи ЭКГ (или ЭГ) (см. Часть 1, Раздел 111, Тема 4) и электрической активности одного из указанных выше спинномозговых нервов (ЭНГ). Для регистрации ЭКГ применяют игольчатые электроды, которые вкалываются в передние лапы, а для записи ЭНГ— проволочные биполярные серебряные электроды с межэлектродным расстоянием 3 — 4 мм (диаметр проволочки 1 — 2 мм), на которые накладывается нерв.
Животное заземляют. При регистрации ЭНГ необходимо внимательно следить за тем, чтобы лягушка не двигалась, так как мощные мышечные токи Часть И, Практические задачи по патофизиологии будут полностью маскировать нервную активность. Следует также избегать соприкосновения электродов с тканями. Задание 1. Регистрация афферентной активности спинномозгового нерва при разных степенях раздражающего воздействия на рецепторы мочевого пузыря ХОД РАБОТЫ 1. В исходном состоянии записывают ЭКГ и фоновую афферентную активность нерва, лежащего на электродах.
Исходная (фоновая) импульсация в нерве нерегулярная и имеет небольшую амплитуду (около 20 мкВ); иногда она отсутствует. 2. Раздражают мочевой пузырь быстрьаи введением в него разных обьемов раствора — от 0,2 до 3 мл. После каждого введения равный объем жидкости выводят из пузыря, отсасывая шприцем.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
