Дж. Уилсон, Т. Хант - Молекулярная биология клетки - Сборник задач (1120987), страница 114
Текст из файла (страница 114)
Литература: 5аяадодо, М.; Хоедгг, Х. 6. паевом !пто!сед ю врсс!Вс ггапвспргюп Ьу Ьпгпап ВЬГА ро!угпегаве 11: апа!уйв Ьу а гвргд апд Ваап!Кайте Гп Ыгго аввау, Ргос. ЬГав!. Асад. Всв 1)ВА 82, 4394 — 4398, 1985. достаточно, чтобы во время предынкубацин в смеси присутствовал только ТЕ!Ну. Подобное заключение основано на том, что на дорожке 6 (рис. 9-22) транскрипт отсутствует, а на дорожках 4, 5, 7 и 8 он имеется. Если бы требовался любой другой компонент, его отсутствие привело бы к прекращению транскрипции в одном из этих случаев. Фактор транскрипции ТРГН3 связывается с ТАТА-боксом промоторов РНК-полимеразы 11, Его присоединение способствует такой сборке нуклеосом, которая не препятствует транскрипции. Результаты, приведенные на рис.
9-22 !дорожки 9, 10, 1! и 13) свидетельствуют о том, что ТРПА, ТР11В и РНК-полимераза 11 в присутствии ТНПЭ могут образовывать с промотором комплекс, который оказывается стабильным при сборке и выделении хрома- тина. Как свидетельствуют результаты эксперимента (рис. 9-22, дорожка !2), для того, чтобы шла транскрипция, необходимо добавить только фактор транскрипции ТРНЕ, поскольку все остальные компоненты уже содержались в смеси во время предынкубации. Б В Литература: ИогЬиап, АГ.с доедет, Хб. В!пбйпв оГ ггапвспргюп Гас!от ТР11О го гЬс гпа)ог 1аге ргогпогег дплп8 пв внгп ппс!совогпе аввептйу ро!епдагев впьвечпепт !пгдвгюп Ьу КГчА ро!уптегаве 1!.
Се)! 51, б!3-622, 1987. гв- 142В 9-27 А. Для обеспечения доступности промотора при сборке хроматина 402 Глава 9 9-28 А. Поскольку РНК-полимераза блокируется пиримидиновымя димерами, чувствительность транскрипции гена будет зависеть от расстояния между промотором н зондом; это расстояние прямо пропорционально протяженности мишени, повреждаемой ультрафиолетом. Так, если для образования транскрипта полимераза должна пройти в два раза большее расстояние, то и вероятность, что она натолкнется на участок, блокирующий транскрипцию, возрастает в два раза.
Б. Транскрипция гена ЧБО в семь раз чувствительнее к облучению ультрафиолетом, чем транскрипция генов рибосомной рРНК в области зонда 4, расположенного на расстоянии 7 т. п.н, от своего промотора. Следовательно, начало гена ЧБО отсгоит от промотора на расстояние примерно 50 т.п,н. (7 х 7). В этих расчетах принимается, что ДНК, расположенная между промотором ЧБО и геном ЧБО, обладает примерно такой же чувствительностью к ультрафиолету, что и транскрипционная единица рибосомной РНК. В.
Если близлежащий ген примерно на 20% менее чувствителен к ультрафиолетовому облучению, чем ген ЧБО, то скорость его инактивацни составляет 80% от скорое~и инактивации гена ЧБО. Следовательно, его промотор расположен на расстоянии 40 т.п.я. (0,80 х 50 т. и. н). Если близлежащий ген находится перед геном ЧБО на расстоянии 10 т.п.н., то его промотор должен картироваться где-то совсем рядом с промотором гена ЧБО. Следовательно, представляется весьма вероятным, что эти гены транскрибяруются с одного и того же промотора. Литература: Юоатоп, Р.
Ус Коогег, «'. Мс Воггг, Р. 1пасптапоп о! ггапаспрбоп Ьу 13Ч гггагйапоп о! Т. Ьгисег рготгйеа егтдепсе !ог а ппйгкймгогйс ггапаспргюп ипц !пс1иц!пк а ЧБСг хепе. Се1! 51, 273-281, 1987. 9-29 Одноцепочечные «хвостып возникают потому, что концы мРНК некомплементарны концам рестриктов. Следовательно, один вз одноцепочечных хвостов с каждой стороны — это ДНК рестрикционного фрагмента. Одноцепочечный хвост на одном конце должен соответствовать 5'-концу мРНК, которая могла бы образоваться на предыдущем экзоне, не представленном в данном рестрнкте.
Одноцепочечный хвост на другом конце соответствует отсугсг. вующему в рестрикте 3'-концу мРНК, которая могла бы образоваться на нижележащем экзоне, или это просто ро1у(А)-конец. Без дополнительной информации невозможно решить, каково происхождение каждого одноцепочечного конца, Литература: Вегдег, $.Мс Вег!г, А.Л: Нагг!гоп, Тс Вьагр, Р.А. Бр1!сед аевпгепга а! 1Ье 5' 1еглипг о( адепот!гиа-2 1аге пгКХА: а го!е уог ЬегегоВепеощ пис!еаг КЫА гп пгапппа1гап се11а Со!6 Брг!пк НагЬог Бугпр.
Оиапг. Вю1. 42, 523-529, 1977. А. Были помечены 5'-концы молекул РНК. На радиоавтограмме проявляются лишь меченые фрагменты (рис. 9-25). Следовательно, если самые короткие фрагменты (те, которые доходят до конца геля) относятся к 5'-концу, то 5'-конец должен нести метку. Б. Полосы, соответствующие адениловым нуклеотидам в сигнальной последовательности АА~1ААА, отсутствуют в случаях полиаденилированной н расщепленной РНК (рис. 9-25, дорожки 3 и 4) потому, Клеточное ядро 403 что модификация любого из этих А препятствует расщеплению и полиаденнлированию. Таким образом, молекулы РНК, несущие единственную модификацию в сигнальной последовательности, не узнаются компонентами экстракта и в результате не выявляются ни в популяции полиаденилированных молекул (дорожка 3), ни в популяции молекул, подвергшихся расщеплению (дорожка 4).
В. Полоса А, указанная на рис. 9-25 стрелкой, отсутствует в случае полиаденилированной РНК, однако выявляется в расщепленной РНК, поскольку модификация этого А не препятствует расщеплению, но мешает полиаденилнрованию. Именно поэтому молекулы РНК с модификацией этого А в популяции расщепленных молекул содержатся, а в популяции полиаденилированных молекул — нет (дорожка 3). Г. Проведенный в пунктах Б и В анализ отсутствующих полос показывает, что для расщепления молекул РНК-предшественника важна сигнальная последовательность АА()ААА, а для полиаденилирования необходимы эта последовательность и еще один А. Д.
Если пометить другой, а именно 3'-конец молекулы РНК, то можно определить, принимают ли участие в полиаденилировании какие-либо из А и С на Зсконце участка расщепления. Такие эксперименты были проведены, и оказалось, что ни одна модификация на 3'-конце участка полиаденилирования не препятствует полиаденилированию. Лнтератураз Солнау, Сс ПГскелз, М.
Апа!уз!з оГ пЖ!ЧА эсенам Гоппайоп Ьу гпогГГГ1саг!оп ппегГегепсе: Гбе оп1у гпогГ!Г1саг)опз вЫсЬ ргетепг ргосезяпк 1!е 1п ААГГААА апгГ Гйе ро1у(А) з!Ге. БМВО Г. б, 177-4184, 1987. 3' 6ТСТС6АТ6АААССА 5' Человек ! ! ! ! ! ! г'АУ 5' гаэ6-ИН6661Л!АСАССПС1ЛЛЛГА6ААГЛШСПСПА6П 3' 177-млРНК человека ! ! ! !! ! ! ! ! ! 3 ' ТТСТССА6ААА66С 5 ' Мышь 111! ! !1! ! 3' Т66ТССАСАААСААА 5' Обобщенная последовательность Рис. 9-43. Спаривание между тремя скнгонуклеотндами и 1.17-мяРНК чезоаека (ответ 9-31). 9-31 А. Ваша идея состояла в том, чтобы добиться расщепления РНК, входящей в состав мяРНП. Эта РНК, как вы полагаете, взаимодействует с консервативной последовательностью на 3'-конце предшественника гистоновой мРНК.
Если взаимодействие мяРНП с РНК-предшсственником сводится к гибридизации, то олигонуклеотид, комплементарный последовательности в составе РНК-предшественника, должен гибридизоваться с мяРНК. Образование гибрида ДНК-РНК сделает мяРНК чувствительной к расщеплению РНКазой Н. Расщепление же мяРНК в этом важном участке взаимодействия должно привести к потере экстрактом способности осуществлять процессинг предшественника.
Этот результат вы и получили для обобщенного олигонуклеотида и олигонуклеотида мыши. Б. Неспособность олигонуклеотида человека блокировать процес- синг — зто неожиданный результат опыта, в котором использовали экстракт из клеток человека. Однако изучение гибридов, которые могут образовываться между различными олигонуклеотидамн и ()7-мяРНК, показывает, что обобщенный олигонуклеотид н олигонуклеотид мыши образуют совершенные гибриды длиной 9 и ! О нуклеотидов соответственно (рис. 9-43). Напротив, продукт гибри- 404 Глава 9 9-32 Рнс.
9-45. Сплайсннг лндерной РНК н актнновой РНК с образова- нием актнновой мРНК (ответ 9-33). Подчеркнуты О1/ в 5ьсайте сплай- синга лндерной РНК н АО в 3'-сайте сплайсннга актнновой РНК. Подчеркнуты также лндерные фрагменты, идентифицированные путем сравнения посчедователь- ностей, н сайты начала трансляции. 9-33 А. Лидерная РНК Акгиновая РНК 6ПА САСПАААААС ПААПСАААЬ)1ж 5' С ПААП САААА1) 6 Актиновая мРНК Рне.
9-44. Сумма отличий от последовательности гена )5-глобнна коровы (ответ 9-32). Последова- тельность гена )3-глобнна коровы сравнивали по каждому нуклеотнду с последовательностями генов р-глобнна шести других видов. Суммарное число различий по данной позиции приведено под каждым нуклеотндом последова- тельности для )3-глобнна. Общие суммы различий с каждой стороны границы зкзон/ннтрон (пунктнрная линия) приведены внизу. 66Т66ТСА66СССТ666СА6!'6ТА66ТАТСССАСТТАСАА6 00312100211100012000!00311023345553332333 15 53 Зкзон 1 Интрон дизации с олигонуклеотидом человека содержит один неспарившийся нуклеотид, который делит молекулу на два фраз. мента размером б и 4 нуклеотида (рис.
9-43). Стабильность спаривания двух отдельных фрагментов не так велика, как у молекулы, все основания которой спарены. Следовательно, олигонуклеотид человека не будет спариваться с той эффективностью, которой было бы достаточно, чтобы сделать П7-мяРНК чувствительной к расщеплению РНКазой Н. Литература: Моигу, К./..; 5ге!гз, А А. 14епг!Ггса!!он 01 Ьшпап 137 знКХР аз опе о1 зечега! !асгогз 1пчо!чег1 !и 1Ье Заела ша!цгабоп о( Ьйгоне ргешемеакег КХАз. Яс!енсе 238, 1682 1687, 1987. Поскольку интроны эволюционируют быстрее, чем экзоны, онн и варьируют у разных видов в болыпей степени, чем экзоны.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
