part5 (1116455)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

7. Особенности эксплуатации колонок для ВЭЖХХроматографическаяколонкаявляетсяглавнымузломхроматографической системы. При возникновении проблем с разделениемчасто бывает очень сложно определить, связаны ли они с самой колонкойили другими элементами хроматографической системы. Вместе с тем,причины проблем ищут в первую очередь в состоянии колонки, хотя вбольшинстве случаев эти проблемы вызваны другими факторами,например, изменениями состава подвижной фазы (ПФ), ее расхода,колебаниями температур в системе и окружающей среде, различиемобразцов и т.д. При возникновении проблем, приводящих к неисправностиколонки, необходимо предпринять своевременные грамотные действия поустранению причин, чтобы избежать этого в будущем.7.1. Подготовка растворителя и пробыСпособ подготовки растворителя для ВЭЖХ зависит от того, какогокачестварастворительимеетсявналичииидлякакихзадачпредполагается его использовать.

Имеет значение также устойчивостьрастворителя к действию тепла, света и кислорода воздуха. Еслииспользуют растворители высокой чистоты, например, перегнанные встекляннойаппаратуре,специальноочищенныедляВЭЖХипрофильтрованные через фильтр с порами диаметром 0.5 мкм, ихподготовка для работы проста: готовят смесь растворителей нужногосостава, как правило, смешением по объему и дегазируют ее тем или инымспособом. Если используют растворитель более низкого качества, вособенности технический, его подвергают нескольким дополнительнымстадиям очистки: перегонке или ректификации в стеклянной аппаратуре,частоспредварительнойхимическойобработкой,осушкойисобязательным фильтрованием перед дегазацией через фильтр с порами177диаметром 0.2 – 0.5 мкм.

Пригодность подготовленного растворителяпроверяютнепосредственночувствительностиинарасходов,схроматографекоторымивпредстоитдиапазонеработать.Недостаточную чистоту растворителя устанавливают по шумам нулевойлинии, превышающим допустимые, по большому дрейфу нулевой линии,по невозможности отрегулировать нулевое положение регистрирующегоустройства на чувствительных шкалах детектора. Такая проверка особенноважна при работе в градиентном режиме, для которого необходимырастворители наиболее высокого качества.Выделяющиеся из недеаэрированной ПФ пузырьки воздуха приводятк нестабильности нулевой линии детектора, ухудшают эффективностьколонок для эксклюзионной хроматографии, заполненных полужесткимигелями, могут вызвать окисление лабильных соединений и некоторыхпривитых фаз.

Поэтому необходима деаэрация ПФ. Ее проводяткипячением, продувкой гелием, воздействием вакуумом или ультразвуком.Особенности работы с водными растворителямиВода и элюенты, готовящиеся на ее основе, нуждаются в особовнимательном отношении, так как вода очень легко загрязняется,поглощая газы и летучие вещества из воздуха лабораторного помещения.Некоторые водные растворы, особенно буферные фосфатные, являютсяпитательной средой, в которой быстро размножаются многие бактерии,образуя частицы колоний. Эти частицы способны засорять фильтры,нарушать работу клапанов, портить колонки и т.д.

Дегазированные водныерастворы очень быстро поглощаю кислород и воздуха. Следует, какправило,использоватьбидистиллированнуюводу.дляВЭЖПриготовивсвежеприготовленнуюрастворитель,дегазировать его, отфильтровать и затем быстро использовать.178следуетЕсли растворитель стоял некоторое время, его нужно перед работойпроверить его на отсутствие взвесей и опалесценции, профильтровать идегазировать. Лучше всего готовить и использовать растворитель вколичестве, необходимом на день работы.Подготовка раствора пробыРаствор пробы, как правило, нужно готовить в том же растворителе,который используют для работы. Этот способ является наилучшим, так какне дает (или почти не дает) ложных пиков на хроматограмме, связанных свытеснительнымипиками,прохождениемчерездетектордругогорастворителя и откликом детектора на изменение при этом показателяпреломления.Если в пробе присутствуют нерастворимые примеси (соли, полимерыи др.), анализ которых не представляет интереса, такие пробы послерастворения должны быть профильтрованы через фильтр с порами 0.2 –0.5 мкм под вакуумом или, что более удобно, под давлением; можноотделять твердые частицы на центрифуге.Если пробу не удается приготовить из компонентов рабочегорастворителя из-за плохой растворимости образца, следует попытатьсяподобратьрастворители,используялитературныеданныепорастворимости или метод проб и ошибок.

Важно, чтобы этот растворительбыл совместим с ПФ. Когда растворитель выбран, всегда до того, какввести приготовленный раствор пробы, сделайте холостой тестовый вводтакого же объема выбранного растворителя, но без растворенного образца.Это дает возможность оценить, какие ложные пики при вводерастворителя будут образовываться. Наконец, следует ввести растворобразца в этом растворителе.

Если растворитель сильно отличается оттого, который используют для элюирования, то кроме, образованияложных пиков возможно выпадение части образца в осадок в колонке или179инжекторе, когда проба смешивается с элюентом. Иногда при смешиваниитаких разных растворителейсущественно падаетэффективностьразделения или возможно даже исчезновение пиков компонентов пробы.7.2.

Типичные неисправности, способы обнаружения и устраненияВ табл. 43 –47 приведены наиболее общие проблемы, приводящие кнеисправности колонки, вместе с возможными причинами и способами ихграмотного устранения. Обращаясь к данной таблице, вы сможете точноопределить причину неисправности и устранить её. Если в системеслишком высокое давление, необходимо последовательно двигаясь отнасоса к колонке, найти место засорения и устранить его.Таблица 43. Проблема – существенное изменение времени удерживанияодного и того же пика (более чем на 10%).Возможная причинаНеобходимые действия1.Загрязнение колонки.Промойте или замените колонку.2.

Потеря привитой фазыЗамените колонку3. Колонка не уравновешена.Промойте колонку подвижной фазойобъемом не менее семигеометрических объемов колонки.4. Колонка перегружена.Уменьшите количество вводимогообразца.5. Изменился расход подвижнойПроверить расход элюентафазы6. Изменился состав подвижнойЗаменить элюентфазы7. Изменилась температураПроверить термостат180Таблица 44.

Проблема – слишком высокое давление в системеВозможная причинаНеобходимые действия1. Загрязнён входной фритПромойте колонку медленнымколонки.обратным потоком подвижной фазы (в5-6 раз меньшим, чем рабочий прямойпоток) для удаления механическихчастиц или замените входной фрит.2. Загрязнён фильтрующий элемент Замените фильтр."in-line" фильтра (предколоночногофильтра) между инжектором иколонкой.3.

Загрязнена предколонка.Замените предколонку.4. Используется колонка с малымУменьшите расход подвижной фазы.внутренним диаметром.5. Колонка набита сорбентом сИспользуйте более короткую колонку.малым размером частиц.6. Неисправен манометр,Проверьте давление другимтензопреобразовательманометром, замените указательдавления.7. Загрязнено устройство вводаПромыть или заменить инжекторпробы8. Забит капиллярЗаменить капилляр9. Загрязнена ячейка детектора.Промыть ячейку детектора10. Увеличилась объемная скорость Проверить расход элюента181Таблица 45. Проблема – снижение эффективности колонки (числатеоретических тарелок)Возможная причинаНеобходимые действия1. В колонке образовалось пустоеЗамените колонку.пространство (проседание сорбентаили образование канала).2.

"Износилась" предколонка.Замените предколонку.3. Экстраколоночные эффектыМинимизировать факторы,(повреждение или неправильнаявызывающие эффекты, проверить иустановка фитингов и соединений)переустановить соединения5. Увеличение объёма вводимогоПроверить систему или программуобразцаввода образца6. Растворение образца в другом,Изменить пробоподготовкуболее сильном по элюирующейспособности, чем подвижная фаза,растворителе7. Изменения в составе подвижнойЗаменить подвижную фазуфазы7.3.

Методические аспекты обеспечения высокой эффективностиколонкиБольшинство пользователей хроматографических колонок хотели бымаксимальнопродлитьсрокслужбыэтоговажнейшегоэлементахроматографа. Рассмотрим три основные причины выхода из строянаиболее распространённого на сегодняшний день типа колонок - колонок,заполненных обращённо-фазовыми сорбентами.182Первая причина - потеря химически привитой фазы. В настоящее времяоколо 90% всех анализов методом ВЭЖХ выполняются на химическипривитых фазах.

Разрушение химических связей между привитымигруппами и силикагельной матрицей приводит к изменению времёнудерживания и разрешения, а также к тому, что пики "хвостят". Причина гидролиз силоксановых связей силикагелевой матрицы с привитымигруппами или эндкэпирующим реагентом, применяемым для устранениявлиянияТаблица 46. Проблема – раздвоение пиков, наличие «хвостов» у пиковВозможная причинаНеобходимые действия1. Загрязнена колонка.Промойте или замените колонку.2. Входной фрит колонки забитЗамените входной фрит колонки.механическими примесями.3. Потеря привитой фазы.Замените колонку.5. Проседание сорбента.Замените колонку.6. Образование канала в сорбенте.Замените колонку.7. Износилась предколонка.Замените предколонку.8.Экстраколоночные эффектыМинимизировать факторы,(повреждение или неправильнаявызывающие эффекты, проверить иустановка фитингов и соединений)переустановить соединения9.

Колонка перегружена10. Изменения состава подвижнойфазы (концентрации буферногораствора, рН, количества ионпарного реагента и т.д.)11. Компоненты пробы выпадают восадок12. Изомеризация, диссоциация,таутомерные превращениякомпонентов пробыУменьшить объем вводимой пробыЗамените подвижную фазу183Изменить пробоподготовку, составподвижной фазыИзменить состав подвижной фазыостаточных силанольных групп на поверхности силикагеля.

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов книги