part4 (1116454), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Следующими выходят пики аммония и калия. Их электрическиеподвижности одинаковы, поэтому без специальных мер, они выходятодним общим пиком. Для разделения аммония и калия в состав ведущегоэлектролита вводят специальную добавку краун-эфира (18-краун-6),который уменьшает электрическую подвижность ионов калия, не оказываяв то же время заметного влияния на подвижность других ионов. Врезультате становится возможным полное разделение катионов щелочныхи щелочно-земельных элементов. Далее, один за другим выходят пики158натрия, магния, лития, стронция, бария и кальция. При анализе природныхвод на электрофореграмме могут наблюдаться дополнительные пики,принадлежащие другим катионам, в частности, катионам двухвалентныхмарганца и железа.
Пик марганца выходит вслед за пиком стронция, а пикжелеза – после пика кальция.Приборы и реагентыЭлектрофоретическая установка «Капель»со спектрофотометрическим детектором («Люмэкс», Россия).Капилляр кварцевый длиной 1м и внутренним диаметром 75 мкм.Ввод пробы давлением (30 мбар, 15 сек).Регистрирующая система – програмно-аппаратный комплекс«МультиХром».0,5 М раствор NaOH.1 М раствор HCl.Рабочий буферный раствор, содержащий 6 мМ растворабензимидазола, 2,5 мМ винной кислоты и 2 мМ 18-крауна - 6.Стандартные растворы аммония, калия, натрия, стронция икальция (50 мг/мл), магния и бария (25 мг/мл).Выполнение определения.
Готовят 3 градуировочных раствора,содержащих смесь определяемых ионов, в интервале концентраций 5 ─ 25мг/мл. Приготовленные растворы помещают в виалы и последовательноанализируют,записываяэлектрофореграммы.Длярегистрацииэлектрофореграмм используют программу «МультиХром», определяютвремена миграции катионов, площади их пиков и основные параметры(селективность разделения и разрешение пиков).По полученнымзначением площади пиков строят градуировочные зависимости площадьпика – концентрация, уравнения, которых заносят в табл.35.Затем получают электрофореграмму образца водопроводной воды.Проводятидентификациюпиковнаэлектрофореграммеобразцаводопроводной воды по временам их миграции. Вычисляют концентрацию159компонентов в образце водопроводной воды по ранее полученнымградуировочным зависимостям, принимая относительную погрешностьопределения равной 20%.
Результаты вносят в таблицу, аналогичнуютабл.34.Таблица 35. Времена миграции катионов и уравнения градуировочныхзависимостей для них№Анион1.Аммоний2.Калий3.Натрий4.Магний5.Стронций6.Барий7.КальцийРабота6.ВремяУравнениемиграции,градуировочнойминпрямойОпределениепримесей(никотиновойиγ-аминомасляной кислот) в лекарственном препарате пикамилонУстойчивость лекарств является предметом постоянной заботыфармацевтов. В последнее время значительное внимание уделяетсяизучению факторов, которые влияют на стойкость составных частейлекарств и могут её повысить или влияют на качество вспомогательныхсредств, необходимых для приготовления готовых лекарственных форм.Благодаря быстроте определения и простоте приборов тонкослойнаяхроматография оказывается наиболее употребительным аналитическим160методом при исследовании стабильности лекарственных средств, вчастности,приоценкестабильностипрепаратов,содержащихникотиновую кислоту.
Одним из таких препаратов является пикамилон –натриевая соль N- никотиноил--аминомасляной кислоты.Большойинтересклиницистовкпикамилонуопределяетсяуникальным сочетанием его фармакологических свойств. Пикамилонулучшает кровоснабжение и функциональное состояние мозга, улучшаетмикроциркуляциюартериальногоигемодинамикукровоснабженияглаз,способствуетвнутреннихорганов.улучшениюОбладаетноотропными, антигипоксическими и антиоксидантными свойствами;длительно удерживается в тканях организма; малотоксичен. Кроме того,пикамилон оказывает транквилизирующий, не вызывая миорелаксакции,сонливости и вялости, и психостимулирующий эффекты, восстанавливаетфизическую и умственную работоспособность при переутомлении,уменьшает угнетающее влияние этанола на центральную нервную систему.Препарат назначают при состояниях, сопровождающихся тревогой,страхом, повышенной раздражительностью, показан при астеническихсостояниях,обусловленныхразличныминервно-психическимизаболеваниями или связанными с повышенным физическим и умственнымнапряжением;депрессивныхрасстройствахвпожиломвозрасте,сенильных психозах.При оценке чистоты лекарственного препарата пикамилона вкачестве посторонних примесей в нем оценивают содержание никотиновойи γ-аминомасляной (ГАМК ) кислот, которое не должно превышать 0,4 и0,1 % соответственно.Никотинамид и никотиновая кислота представляют собой две формывитамина В5.
Они широко используются в виде пищевых добавок длячеловека и животных. Недостаток витамина В5, в пище приводит кхарактерным заболеваниям — пеллагре у человека и «чёрному языку» у161животных.Согласно литературным данным, для разделения никотинамида иникотиновой кислоты с помощью метода ТСХ предложено несколькоэлюирующих систем: н-пропанол—10%-ный NH3 (95:5); уксусная кислота—ацетон—метанол—бензол(5:5:20:70);пропанол-2—метанол—хлороформ—10% -ный NH3 в различных соотношениях. Так какникотиновую кислоту и её амид разделяют на флуоресцентных слоях,обнаружение ведут в ультрафиолетовом свете.
Идентифицировать этисоединения можно также действием раствора п-аминобензойной кислоты ипарами бромциана. Никотинамид окрашивается в оранжевый, а кислота —в красный цвет.ГАМК принято считать медиатором торможения ЦНС, онаявляетсятакженейромодулятором,поддерживающимвнервныхструктурах баланс между процессами возбуждения и торможения.При определении ГАМК методом тонкослойной хроматографиииспользуют подвижную фазу: четыреххлористый углерод – метиловыйспирт – уксусная кислота (30:7:4). В качестве проявителей для γаминомасляной кислоты наиболее часто используют изатин (лиловоеокрашивание) и нингидрин (фиолетовое окрашивание).Реагенты и аппаратураПикамилон , 1% раствор в этиловом спирте.Никотиновая кислота, 0,1% раствор в этиловом спирте.γ-Аминомасляная кислота, 0,1% раствор в смеси этиловый спирт-вода(1:1).Нингидрин, 0,2% раствор в этиловом спирте.Подвижная фаза хлороформ-этанол-уксусная кислота (7,5:1,75:1) илитолуол-изопропанол-ацетон-уксусная кислота (7:2:0,5:0,5).Камера для ТСХ.Пульверизатор для опрыскивания хроматограмм.Микрошприц на 10 мкл.Установка для нанесения проб на пластинку ТСХ – УСП – 1м.162Фен для сушки пластин для ТСХ.Сушильный шкаф.Видеоденситометр Сорбфил.Пластинки Сорбфил ПТСХ-АФ-В-УФ.Выполнение работы.
Готовят разбавлением стандартных растворов 2серии водно–спиртовых растворов: пикамилона с содержанием 0,1; 0,5; 0,7и 1,0 %; смеси кислот с содержанием 0,02; 0,03; 0,04 и 0,05 % никотиновойи 0,01; 0,02; 0,03;0,04 и 0,05 % и γ-аминомасляной кислот, соответственно.Для приготовления раствора образца препарата “Пикамилон” 2таблетки пикамилона по 0,05 г растирают в ступке и растворяют в 2 млводно-спиртовой смеси. Полученную взвесь (содержит и вспомогательныевещества: крахмал, магния карбонат основной, сахар, кальция стеарат,тальк) фильтруют через бумажный фильтр.На пластинке карандашом проводят линию старта на расстоянии 1,5см от края и закрепляют пластинку на столике ТСХ – УСП-1м, которыйподогрет до 500С.
С помощью микрошприца наносят пробы стандартныхрастворов пикамилона( 2 мкл), никотиновой и γ–аминомасляной кислот(по5 мкл) и образца (5 мкл). Нанесение проб может проводиться такжеавтоматически с помощью автоматического аппликатора.Пластинку с нанесенными пробами помещают в герметичнуюхроматографическую камеру, куда предварительно наливают 10 млподвижной фазы. Пластинку выдерживают в камере около получаса, такчтобы фронт растворителя поднялся на 7-10 см. Затем пластинкувынимают из камеры, высушивают феном.
Для обнаружения никотиновойкислоты и пикамилона пластинку просматривают при облучении УФизлучением при длине волны 365 нм. Для обнаружения γ-аминомаслянойкислоты пластинку опрыскивают раствором нингидрина из пульверизатораи нагревают 10-15 мин в сушильном шкафу при температуре 1000С допоявления окрашенных пятен.163Обработка хроматографических данных. Проявленные пластинкипомещают в камеру денситометра и с помощью видеокамеры и системыAverTV Studio вводят запись видеоизображения пластины в памятькомпьютера. Затем в программе видеоденситометра Sorbfil обрабатываютполученный видеоролик. Обработка включает:1. Расстановку линий старта и фронта2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
