Диссертация (1090334), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Обзор аналитических методик количественного определенияцианокобаламинаВвидупораженияэпителияглазавируснымибактериальнымвозбудителями, сопровождающимся образование фолликулов, изъявлением споследующимрубцеваниемтканейглаза,логичнымявляетсявведениерепаративного агента в состав глазных капель. Цианокобаламин обладаетвозможностью эндогенного синтеза пуриновых нуклеозидов, к которымотносится ацикловир, что теоретически позволяет предположить усилениепротивовирусного эффекта.Цианокобаламин и его аналоги можно идентифицируются по атомукобальта.
Поскольку они представляют собой довольно прочные комплексныесоединения,поэтомуприанализеонипредварительноподвергаютсяминерализации. Полученный при этом нитрат кобальта образует окрашенныйпродукт с азокрасителем пиридоксина в водно-ацетоновой среде при рH 7 смаксимумом поглощения при 515–520 нм [14]. Кобальт обнаруживается (по ФС)послесплавленияцианокобаламинасгидросульфатомкалия.Окраскасохраняется после добавления хлороводородной кислоты и кипячения в течение1 минуты [14].Для испытания подлинности и чистоты, а также количественногоопределенияцианокобаламина используетсяУФ-спектрофотометрия.Прииспытании подлинности устанавливают наличие максимумов поглощения 0,002%водного раствора цианокобаламина при 278, 361 и 550 нм. Устанавливают такжеотношение величин оптической плотности при 361 нм и 278 нм (1,7–1,88), а такжепри 361 нм и 550 нм (3,15–3,40).
Расчет содержания цианокобаламина (не менее95%) выполняют по оптической плотности ГСО [58].34Для анализа репаративного агента, в роли которого был выбранцианокобаламин, используется в основных мировых фармакопеях как методВЭЖХ, сравнительный анализ которого представлен в таблице 4, так ититриметрический метод, а также ТСХ.Таблица 4 – Сравнительная характеристика методов анализа цианокобаламинаметодом ВЭЖХ в различных фармакопеях мираФармакопеи,странаПодвижнаяфазаУсловия хроматографированияСкоростьДеКоличеВремяЧислопотока,тектор,ствохроматеоретиобъемдлинапритограческихпробыволны, месей фирования тарелокДанные отсутствуют0,25 м и0,8УФ,Сумма 3х-кратноеНевнутренниммл/мин, 361 нм. примесвремяуказанодиаметром30 мклей неудержи4 мм, cболееваниясиликагелем3%цианооктилсилилькобаланым 5 мкм;минаКолонкаГФ XIIБФ26,5 метанола(белорусР и 73,5скаяобъемовфарма- раствора 10 г/копея)динатриягидрофосфатаР, доведенногодо рН 3,5BP26,5 объемов 25 см * 4 мм0,8УФ,(британ- метанола исмл/мин,20 361 нмская73,5 объемов октадециольмклфарма10 г/лнымкопеярастворасиликагелем2013)калиядлягидрофосфат хроматографа до рН 3,5 сии 5 мкм.фосфорнойкислотойEPh26 объемов 25 см, ширина0,8361 нм,(еврометанола и4 мм,мл/мин,УФпейская 75,5 объемаоктадеци20 мклфарманатрияльныйкопеягидрофосфасиликагеля2010)та до рН 3,5дляс фосфорной хроматогракислотойфиии 5 мкмСуммапримесей неболее3%тройноевремяудерживанияцианокобаламинаНеуказаноСуммапримесей неболее3%3хкратноевремяудерживанияцианокобаламинаНеуказаноКак видно из таблицы 4, в ведущих международных фармакопеяхтребования к анализу цианокобаламина идентичны, однако европейскаяфармакопея 2010 г.
регламентируется несколько различное содержания объемаметанола и натрия гидрофосфата в составе подвижной фазы, а британская35фармакопея 2013 г. регламентирует включение в состав подвижной фазы калиягидрофосфата. Однако рН растворов в трех рассмотренных методиках остаетсянеизменным. Также ни в одной из рассмотренных фармакопей не приводитсяколичество теоретических тарелок для пика цианокобаламина.1.7.
Анализ ципрофлоксацина гидрохлоридаЦипрофлоксацин, представляя собой производное фторхинолонов, обеспечитькомплексное действие разрабатываемых глазных капель, направленное противприсоединения вторичной инфекции [51,60]. Рассматривая методы анализаципрофлоксацина в современной литературе, было установлено, что во всехмировых фармакопеях используется метод ВЭЖХ. Полученные результатыпредставлены в таблице 5.Таблица 5 – Сравнительная характеристика методов анализа ципрофлоксацинаметодом ВЭЖХ в различных фармакопеях мираФармакопеи,странаПодвижнаяфазаГФ XII[3]Условия хроматографированияКолонкаСко- Детектор,Колиростьдлиначествопотока, волны,примесейобъемпробыДанные отсутствуютВремя Числохрома- теоретитографи ческихрования тарелокБФ (белорусскаяфармакопея)[4]ацетонитрилР – раствор 2,45 г/лкислотыфосфорной Р,доведенныйдо рН 3,0триэтиламиномР, (13:87,об/об)0,25 м *4,61,5мммл/мин,силикагель 50 мклоктадецилсилильный 5 мкм;УФ,278 нмОбщаясуммапримесейне более0,5%,2-хкратноевремяудерживанияНеуказаноBP(британскаяфармакопея2013)[5]Смесь из 13объемовацентонитрилаи 87 объемов2,45 г/лрастворафосфорнйкислоты до рН3,0 стриэтиламином25 см *4,6 мм1,5о 5 мкм, мл/мин,50 мкл.УФ278 нмНе более0,5%суммапримесейДвойноевремяудерживанияНеуказано36USP 36Подвижная фаза(американацетонитрил иская0,025 Мфармакопея)фосфорная[6]кислота,доведениетриэтиламиномдо рН 3,0+– 0,1(13:87)EPh13 объемов(европейская ацетонитрила ифармакопея87 объемов[7]2,45 г/л раствором фосфорнойкислоты, рН 3,0с триэтиламином4,6 мм*25 см, 1,5частицымл/минL1,темпера- 10 мклтура колонки30 градусовУФ,278 ни25 см *4,6 мм, 1,5УФ 278 нмс октаде- мл/мин,цильный50 мклсиликагель5 мкм,Не более1,5%Времяудерживания6,4-10,8минНеменее2500Не более0,5%ДвойноеНевремя указаноудерживанияКак видно из таблицы 4, требования к анализу ципрофлоксацина в ведущихфармакопеях в целом одинаковы.
В ГФ XII не приводится информация об анализеципрофлоксацина методом ВЭЖХ. Только USP 36 в качестве одного изпоказателей пригодности хроматографической системы выдвигает «количествотеоретических тарелок», изменение в USP 36 температуры колонки до 30градусов Цельсия, а также четко регламентируется.37ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫВ ходе проведенного литературного обзора установлено, что в настоящеевремявирусные конъюнктивиты остаются одной из главных проблемсовременной офтальмологии,и, несмотря на успехи в профилактике этогозаболевания,приоритетнымнаправлениемвпредупреждениивирусныхконъюнктивитов являются их медикаментозные профилактика и лечение.Обращает на себяфармацевтическомрынкевнимание и тот факт, что на российскомотсутствуютпротивовирусныепрепаратыпролонгированного действия, что вызывает необходимость многократногоприменениясуществующих препаратов, а учитывая достаточно низкуюбиодоступность глазных лекарственных форм (75% теряется при использованиивследствие носослезного дренажа), становится очевидна необоснованная потеряфармакологически-активных веществ.
Сложившаяся ситуация может быть решенаприразработкеконкурентоспособныхкомпозитныхпрепаратовпролонгированного действия.Учитывая широту терапевтической активности ацикловира, его высокуюпротивовирусную активность, актуальным является его использование в качестведействующего вещества при разработке противовирусных глазных капель.Проведенный литературный обзор также показал актуальность примененияцианокобаламинавантиоксидантнойактивностью,пуриновыеразрабатываемомнуклеозидывпрепарате,способностьювосстановленномчтоопределяетсяподдерживатьсостояниииегоэндогенныедоказаннымрепаративным действием.Такоесочетаниедействующихкомпонентовпозволит реализоватьмногофакторную терапию вирусных конъюнктивитов и, по возможности,добиться синергичности фармакологического эффекта, а также расширитьассортиментпротивовирусных препаратов, представленных на российском рынке.38Дляадекватнойоценкиправильноститехнологическогопроцессапроизводства, определения стабильности препарата и его сроков годности особоевнимание следует уделять аналитическому обеспечению препарата.
Существуетширокийспектраналитическихметодикопределенияацикловира,ципрофлоксацина и цианокобаламина некоторые из которых были рассмотрены входе литературногообзора.Большаячастьизних требует сложнойпробоподготовки и дорогостоящего оборудования, кроме того адаптации подцели фармацевтического анализа, поскольку предназначены для работы сбиологическими объектами , что определяет научную актуальность разработкиуниверсальных методов анализа указанных соединений, позволяющих проводитьих определение при совместном присутствии в лекарственной форме [61].39ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Материалы исследованияТаблица 6 – Объекты исследованияНазваниеХарактеристикаИспользованнаясубстанцияАцикловир((2-амино-9-[(2гидроксиэтокси)метил]-1,9дигидро-6H-пурин-6-он)Белый или почти белыйкристаллический порошок.
Легкорастворим в диметилсульфоксиде,мало растворим в воде, очень малорастворим в спирте 96%,практически нерастворим вхлороформе.Suzhou Leader Imp.&Exp. Co., Ltd.(China), СAS5927789-3, c содержаниемацикловира ≥ 98%,USP 27/BP2000/BP1998Имеет сложную структуру, основойкоторой является корриновое кольцо.Цианокобаламин (альфа-(5,6Оказывает существенное влияние надиметилбензимидазолил)кобами процессы обмена веществ – белков,д цианид)синтез аминокислот, нуклеиновыхкислот, пуриновых основанийАнтибактериальное средство группыЦипрофлоксацин (1фторхинолонов II поколения.Циклопропил-6-фтор-1,4Бледный до слегка желтоватогодигидро-4-оксо-7-(1кристаллический порошок,пиперазинил)-3растворим в 0,1 н. соляной кислоте,хинолинкарбоновая кислота (впрактически нерастворим в воде ивиде гидрохлорида))этаноле.
Ципрофлоксацинагидрохорид растворим в воде.Бесцветная прозрачная жидкость,Мирамистинпенящаяся при встряхивании.(Бензилдиметил[3–(миристоиламино)пропил]аммоний хлорид, моногидрат)Бензидамина гидрохлорид(N,N-Диметил-3-[[1(фенилметил)-1Н-индазол-3ил]окси]-1-пропанамин (и ввиде гидрохлорида)Белый кристаллический порошокUSP 30USP 30USP 30USP 3040Таблица 7 – Вспомогательные вещества, использованные в работеНазваниеХарактеристикаУглевод, циклический олигомер глюкозы, получаемый ферментативнымпутём из крахмала. Белые кристаллический порошок, нетоксичный,Бетациклодекстринпрактически не имеющий вкуса.
Внешне – это белый кристаллический и(БЦД)аморфный порошок. Количество кристаллизационной воды варьирует от1 до 18 % в зависимости от методов сушки и приготовления препарата.Неионогенный простой эфир целлюлозы. Гигроскопичный порошок отбелого до желтовато-белого цвета без вкуса и запаха. Хорошо растворима вГидроксиэтилцеллюлоза воде, в смесях этанол-вода (30:70), и всех растворителях целлюлозы. В(ГЭЦ)водных растворах совместима с хлоридами, нитратами и карбонатами, сбольшинствомповерхностно-активныхвеществ(ПАВ),другимигидрофильными синтетическими и природными полимерами.Полиэтиленоксид легко растворяется в воде, а также во многихорганических растворителях: ацетонитриле, бензоле, хлороформе и пр.ПолиэтиленгликольДанное вещество относится к классу нетоксичных и входит в состав многих6000 (ПЭГ-6000)продуктов питания, косметологических препаратов и лекарственныхпрепаратов.Полимер N – винилпирролидона, растворимый в воде, спиртах, глицерине.Поливинилпирролидон Легко образует комплексы с витаминами, а/б.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
