Хроматографические и электрофоретические методы исследования

Лекция №7

Хроматографические и электрофоретические методы исследования

1 Хроматография, как наука. Классификация хроматографических методов

1 Хроматография, как наука. Классификация хроматографических методов

Хроматография – это процесс разделения веществ, основанный на разделении компонен­тов смеси между неподвижной (стационарной) и подвижной (мо­бильной) фазами. В зависимости от строения разделяемые вещества в различной степени удерживаются той или иной фазой и вследствие этого могут быть отделены друг от друга. Хроматографический метод используют для разделения и очистки смесей веществ.

Под действием диффузии молекулы разделяемых веществ пере­секают поверхность раздела фаз и в зависимости от свойств удержи­ваются той или иной фазой. При продвижении компонентов смеси в разделяющей среде такой процесс перехода между фазами осуще­ствляется многократно, причем каждый раз достигается небольшой эффект разделения (или обогащения).

"6 Дефляция почв и методы борьбы с ней" - тут тоже много полезного для Вас.

Хроматографические методы классифицируют по принципу разделения в зависимости от агрегатного состояния под­вижной фазы (элюента) (жидкостная и газовая) и по форме непод­вижного слоя (бумажная, тонкослойная, колоночная).

В основе газовой хроматографии лежат процессы распределения и адсорбции. Свойства подвижной фазы (газа-носителя) имеют второстепенное значение для процесса разделения. В жидкостной хроматографии процесс разделения в значительной степени опре­деляется составом подвижной фазы. Га­зовую хроматографию применяют главным образом для аналити­ческих целей, в то время как жидкостную хроматографию чаще ис­пользуют для получения отдельных очищенных фракций вещества.

Все более широкое применение в анализе различных малолетучих и термически нестабильных соединений (нуклеотидов, углеводов, пестицидов, кислот, наркотических и лекарственных препаратов и других соединений) находит метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Это – метод разделения веществ на мелко­зернистых сорбентах с размером частиц менее 15 мкм при повышен­ном давлении. ВЭЖХ основывается на распределительном, адсорб­ционном, ионообменном, аффинном принципах разделения.

Собственно хроматографические методы обеспечивают только разделение многокомпонентных смесей, однако они не позволяют установить химическую природу веществ. Для этой цели использу­ют детекторы – приборы для распознавания компонентов анали­зируемой смеси, выходящих из хроматографической колонки. Детектор преобразует изменение состава элюента в электрический сигнал, который после усиления фиксируется регистратором.

В хроматографии используют следующие детекторы: спектрофото­метрические, поляриметрические, рефрактометрические, электрохи­мические, флуориметрические, масс-спектрометрические и ядерного магнитного резонанса.

Для анализа многих классов веществ наиболее всего подходят два типа детекторов: спектрофотометрические (регистрируют по­глощение в УФ- и видимой области спектра) и рефрактометричес­кие (измеряют разность показателей преломления стандартной и исследуемой проб).