Диссертация (Антибластомная активность и безопасность 4-алкил-замещенного производного аминохромена), страница 6

Такой подход позволяет избежать проведения дополндополнительной стадии и, таким образом, повысить выход целевых продупродуктов [61, 67,97-99].9]. Кроме традиционно используемых в данной реакции катализаторов,таких как пиперидин и триэтиламин, применяются и другие каталитическиесистемы, в частности,частности фталимид калия [100-102],2], окись алюминия [[103], оксид меди [104]4] и другие.Альтернативнымтернативным методом синтеза 4-замещенных4 замещенных 22-аминохроменов является взаимодействие 2-иминобензохроменов2 иминобензохроменов с метиленактивными соедсоединениями (рис. 1.8).33Рисунок 1.8 – Схема альтернативного синтеза 2-аминохро2 аминохроменовТакой подход является наиболее актуальным, а иногда и единственновозможным, в тех случаях, когда соответствующий альдегид труднодоступенили не существует [10105-111].Последние годы ознаменованы большим прогрессом в нашем понимпонимании и осознании роли молекулярно-биологическихмолекулярно биологических механизмов в формирформированиинии и прогрессии злокачественных новообразований.

Это, в свою очередь,предопределило наступление новой эры таргетной или направленной тертерапии опухолей вообще и рака легкого, в частности. Инновационные терапетерапевтические стратегии основываются на идентификацииидентификации специфических молмолекулярных мишеней в процессе формирования опухоли и опухолевой прпрогрессии, что позволяет прицельно, максимально эффективно и безопасновоздействовать на опухоль.Генетические изменения, идентифицируемые в опухолевых клетках,как правило, сопровождаются онкогенной дизрегуляций тумортумор-супрессивныхмеханизмов или активацией (гиперэкспрессией) генов, участвующих в опопухолевом росте.Так, структурные изменения в рецепторном аппарате тирозинкиназыприводят к пролиферации злокачественных клеток и являются мишенью пеперсонализированного химиотерапевтического воздействия. В частности, ииспользование анти-EGFREGFR-TKIили ALK-ингибиторов создает новые перспеперспек34тивы направленной терапии пациентов с аденокарциномой легкого.

Однако,резистентность даже к таким препаратам направленного действия являетсяосновным препятствием достижения значимых клинических результатов.Сегодня созданы беспрецедентные условия для идентификации новыхбиологических мишеней и создания новых высокоэффективных химиотерапевтических средств направленного воздействия.В частности, в нашей стране пристальный интерес исследователей привлекли соединения, представляющие собой производные 2-аминохроменов.Наиболее перспективным веществом является соединение АХ-554, являющееся предметом реализации настоящего диссертационного проекта.35ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯМатериалы и методы, используемые при проведении настоящего диссертационного исследования, отвечают требованиям надлежащей лабораторной практики и современному уровню развития фармакологической науки.

Вчастности, уровень доказательности заявляемых свойств лекарственногосредства определяется применением общепринятых экспериментальных методов, рекомендованных национальным регулирующим органом для подобного рода исследований, достаточным количеством теплокровных животных,на которых получены ветеринарные свидетельства и сертификаты.

Приборыи лабораторное оборудование находились в исправном состоянии, прошлиплановую поверку. Теоретические расчеты выполнены с использованием современных методов вычислительной математики. Анализ данных осуществлен с использованием корректных методов медицинской статистики и лицензионного программного продукта.Протокол исследования прошел этическую экспертизу на заседанииКомиссии по биоэтике ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М.

Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), протокол № 05-19 от 10.04.20192.1 Лекарственные вещества, изученные в работе. Принципы выбора доздля исследованияВработеизученосоединение2-Аминия-7-(диэтиламино)-4-(4-метоксибензо[d][1,3]диоксол-5-ил)-4Н-хромен-3-карбонитрилаN-ацетил-аминоэтаноат (лабораторный шифр АХ-554), синтезированное в отделе химии, технологии синтетических лекарственных средств и аналитическогоконтроля АО «ВНЦ БАВ» (Россия). При проведении экспериментальных исследований использована фармацевтическая субстанция вещества АХ-55436(серия 1 с, чистота 98,75%), представляющая собой мелкокристаллическийпорошок желтого цвета без запаха, плохо растворимый в воде.В настоящем исследовании в зависимости от решаемых задач в соответствии с требованиями «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению противоопухолевой активности лекарственных средств»[112] в качестве препаратов сравнения (референтных противобластомных лекарственных средств) использовали представители блокаторов синтеза опухолевой ДНК из группы препаратов платины (цисплатин) и противоопухолевый антибиотик доксорубицин, с доказанной эффективностью в отношениинемелкоклеточного рака легкого [113]:1.

Цисплатин – использовали официальную жидкую лекарственнуюформу «Цисплатин-ЛЭНС», концентрат 100 мл,0,5 мг/мл во флаконах производства «VeroPharm», серия 10616, годен до 07.2019.2. Доксорубицин – использовали твердую лекарственную форму «Доксорубицин-Тева», 50 мг лиофилизата доксорубицина гидрохлорида во флаконах, производитель Фармахеми Б.В.

(Нидерланды), серия 17с30LA срокомгодности до 02.2022.При выполнении токсикологического раздела исследования в качествереферентного противоопухолевого препарата, обладающего выраженным отрицательным цитогенетическим эффектом и хорошей биодоступностью привнутрижелудочном введении [114], использовали циклофосфамид (Эндоксан® 200 мг, порошок для приготовления раствора для внутривенного введения производства «Бакстер Онкология ГмбХ», Германия). Серия 7D160A,сроком годности до 04.2010.Исследуемое соединение и референтный препарат циклофосфамидвводили животным внутрижелудочно в 2% крахмальном геле с помощьюпластикового катетера G24 (ООО «Открытая наука», Россия) в объеме, непревышающем для мышей 1 мл, крыс – 3 мл и морских свинок – 5 мл.Дозы для исследования противоопухолевой активности в опытах in vivoи in vitroрассчитывали, исходя из значений показателей ЛД10, ЛД50 и ЛД90 для37мышей и крыс при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении соответственно.

Для изучения аллергизирующего, иммунотоксического, мутагенного, канцерогенного действия и влияния АХ-554 на репродуктивную систему животных использовали минимально-действующую (МДД), среднетерапевтическую (СТД) и высшую терапевтическую (ВТД) дозы, определенные на этапе изучения антибластомной активности вещества с применениемкоэффициентов биологического переноса дозы [115, 116] для крысы и морской свинки.Дозы цисплатина и доксорубицина определялись с использованием коэффициента переноса дозы со средне-терапевтической однократной (или суточной) дозы человека, указанной фирмой-производителем препарата в инструкции по медицинскому применению.2.2 Лабораторные животные и условия их содержания, выполнениеэтических процедурРабота выполнена на 81 самцах и 81 самках белых беспородных мышейвесом 18-22 г, 128 самцах и 188 самках белых беспородных крыс весом 180240 г, 126 морских свинках-самцах Агути весом 280-350 г, полученных в питомнике Филиала «Андреевка» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России; 295 самцах и35 самках инбредных мышей линии С57Bl/6, полученных в питомнике SPFживотных – филиале ФГБУН Институт биоорганической химии им.

академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (г. Пущино).Все манипуляции с животными проводились в строгом соответствии сПриказомМинистерстваздравоохраненияРоссийскойФедерацииот01.04.2016 г. №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторнойпрактики», ГОСТ Р 56701-2015 «Лекарственные средства для медицинскогоприменения. Руководство по планированию доклинических исследованийбезопасности с целью последующего проведения клинических исследований38и регистрации лекарственных средств»(Национальный стандарт РоссийскойФедерации), ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторнымигрызунами и кроликами» от 01.07.2016 Директивой Совета ЕС от 24 ноября1986 г.

о сближении Законов, постановлений и административных положений государств ЕС по вопросам защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (86/609/ ЕЕС).Во время эксперимента лабораторные животные содержались в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 22-240С, относительная влажность 55-60%. Для размещения лабораторных грызунов использовались пластиковые клетки, для размещения мышей С57Bl/6 – носителейопухолевой системы –индивидуальные вентилируемые клетки.В качестве подстилочного материала применялись автоклавированныедревесные опилки из экологически чистой древесины лиственных пород, отвечающие требованиям ТУ 5313-001-1897839-92. Для кормления животныхиспользовали автоклавированный экструдированный комбикорм ПК 120 – 1для лабораторных мышей и крыс производства ООО «Лабораторкорм» (Россия), комбикорм для морских свинок того же производителя. Вода питьеваяподавалась в стандартных питьевых бутылочках (250 мл). Подстил менялся 2раза в неделю, клетки и аксессуары - еженедельно, поилки для питья – еженедельно.Для выполнения исследования и получения репрезентативных результатов формировали группы из 6, 10 или 20 особей.