Диссертация (Патофизиологическое значение ацетилхолина в пролиферации опухолевых клеток толстой кишки in vitro и in vivo), страница 19

В предложенной нами модели,влияние Ах сведено к минимальному, но важным является то, что существуетнормальная динамика уменьшения его концентрации. В первые трое сутокпосле операции, это определяет пролиферативную активность энтероцитов взоне альтерации, и таким образом формирует условия к нормальнойрепарации тканей с минимальными дефектами клеток, но в условияхдлительного нахождения в тканях в условиях перестройки, этот жефизиологический механизм может стимулировать рост трансформированныхклеток.В-пятых, учитывая активность системы эпидермального фактора роста вответ на действие Ах, и связанных с ним матриксных металлопротеиназ 3 и 9типов, исследования этого направления требуют продолжения и болеедетального уточнения роли следующих биологически активных веществ:124оксида азота, рецепторов к Mg2+, G-белков, а также никотин-чувствительныхальфа-7 рецепторов (nα7AcHR) к Ах в норме, при воспалении и приначальных этапах опухолевого роста.3.3.

Анализ причин летальности и осложненийПри моделировании АОМ-индуцировнного опухолевого роста в проведенном исследовании летальность не выявляли. Это было связано сналичием информации о гепатотоксическом действие вещества, и, согласноэтих данных, мы использовании заведомо не летальные дозы АОМ.При моделирование язвы кишки были выявлены следующие причинысмертности: кровотечения первых 3 послеоперационных суток (до 20%животных за все серии экспериментов), ранние и поздние пневмонии (10-25%за все серии экспериментов), нарушения моторной активности кишечника ижелудка(10% за все серии экспериментов). Пики летальности приходились на24-72 час и на 7-9 сутки после операции. При адаптации модели по Okabe, длямоделирования язвы толстой кишки на начальном этапе смертность достигала2 животных из 10 (20%), что было связано с неустановленной силойвоздействия кислоты и, таким образом, формированием отверстий в кишке.Всего умерло 8 животных.

Пик летальности (5 животных) приходился на 3-иесутки, когда концентрация Ах резко возрастала, и видимо возникалиизменения со стороны самих сосудов толстой кишки, что выражалось вразвитии кишечного кровотечения. При вскрытии трупов животных, умершихв первые 1-12 сутки после моделирования язвы было установлено однотипноеизменение серозной и слизистой оболочки ТК. Характерным изменением быладлительно сохранявшаяся отечность тканей, с резко выраженным сосудистымрисунком. Область наложения аппликатора возвышалась над поверхностьюсерозной оболочки кишки до 3-5 суток, после чего образовывалоськратерообразное опущение в сторону просвета кишки.Вторым по распространенности осложнением были послеоперационныепневмонии.

Одной из неожиданностей в нашей работе оказалось действие125анестетика Zoletil100, которое не описано в литературе по методам работы слабораторными животными. При прохождении 2-ой фазы наркоза препаратмог провоцировать регургитацию, что проявлялось в виде звуков икоты,рвотныхпозывови/илиотрыжки.Пневмонииутакихживотныхпредотвращать не получилось.Аспирационныеранниепневмонииопределялиу10%прооперированных животных (1 из 10). Клиническая картина этого типазаболеваниябыладостаточнотипичной:началосо2-ыхсутокпослеоперационного периода и самостоятельное разрешение к 15-ому дню.Заболевание начиналось остро, с полидипсии (55±1,5 мл воды), угнетениядвигательной активности. Животные много спали, аппетит был снижен и к 12ому послеоперационному дню составлял 10,0±1,5 г (контрольные животные –30,5±2,2 г). При этом послеоперационный шов заживал без особенностей,потеря веса не превышала 12%. К пятому-шестому дню температура телапостепенно возвращалась к норме, и составляла 38,9 ± 0,1°С.

Так какинъекционные лечебные манипуляции с животными были затруднены ввидуналичия шва брюшной поверхности тела, введение лекарственных препаратовбыло заменено физиотерапевтическим лечением, которое включало в себяместное облучение животных УФ и тепловые процедуры.Для этого клетку с животным помещали на 3 минуты в луч света УФ изатем на 15 минут под свет настольной лампы с патроном накаливания на15Вт. Манипуляции животные воспринимали положительно. В последующихисследованиях таких животных в эксперименте не использовали.Вдальнейшем,дляуменьшениярискавозникновенияпослеоперационной пневмонии животных лишали корма за 24 часа дооперации, после введения Zoletil100 обеспечивали покой в темном месте,после операции помещали в индивидуальную клетку в боковом положении, налевый бок с возвышенным головным концом (за счет подложки изпрессованных опилок) и обеспечивали доступ к воде через 5-7 часов послеоперации.

Корма размачивали в воде первые два дня. Подстил меняли126ежедневно, а его слой увеличивали до 6 см, чтобы животное моглозакапываться и активно двигаться.Развитие пневмонии позднего послеоперационного периода (всего15голов из 100 прооперированных) профилактировать описанным способом неудавалось. Все заболевавшие животные имели слабую конституцию – былиузкогрудыми, тонкокостными, имели деликатное строение черепа, легковозбудимую нервную систему, могли проявлять агрессию к человеку впроцессе чистки клетки. При оценке экстерьера на себя обращали вниманиемногочисленные покусы и ссадины, полученные от других животных.Клиническая картина пневмонии у этих животных существенноотличалась от описанной – гипертермия 40,2±0,2°С наступала к 7 суткам,сопровождалась резким снижением двигательной активности, присутствовалаинспираторная отдышка и цианоз видимых слизистых.

Запах от животныхизменялся, полидипсия сопровождалась полиурией, и к 15-ым суткампослеоперационного периода животное погибало. При осмотре трупавыявляли анатомические особенности строения: (1) наличие дополнительнойдоли легкого, (2) вариативность положения и/или длины селезенки, чтоспособствовало ее завороту на желудок и далее, за него.Таким образом, при моделировании язвы были выявлены наиболеекритические сроки для развития послеоперационных осложнений – 3 и 79 сутки изученные осложнения (в основном наблюдали пневмонии).

Примоделировании язвы и сочетания с введением канцерогена АОМ, этиосложнения встречались чаще.127ВЫВОДЫЦелью работы было определение патофизиологического значенияацетилхолина в пролиферации клеток эпителия слизистой оболочки толстойкишки in vivo и in vitro. Для достижения этой цели были решены задачи попараллельному моделированию системы in vitro и in vivo. Были сделаныследующие выводы:1.In vitro, на клеточной опухолевой линии SW620, установлено, чтоацетилхолинвызываетускорениеклеточногоделения,усилениемиграционной способности клеток, а эффекты носят время- и дозозависимыйхарактер.

Максимально свои свойства слабого митогена ацетилхолинпроявляет в низких концентрациях (10-4 М и ниже) при 72 часах экспозиции,его действие носит однонаправленный характер, способствующий активациисинтеза матриксных металлопротеиназ и эпидермального фактора роста.Установлено отсутствие влияния ацетилхолина на экспрессию молекулглавного комплекса гистосовместимости обоих типов.2.In vivo разработана модель индукции опухолевого роста на фоневоспаления, определены факторы, влияющие на рост полипов толстой кишкиу крыс с разным способом индукции первичной трансформации.3.In vivo разработана модификация химически-индуцированного ростаопухолей толстой кишки без применения детергентов. Показано, чтодвукратное внутрибрюшинное введение 1,2-азоксиметана с интервалом 14дней провоцирует рост и развитие полипов слизистой оболочки толстойкишки.

Вызванный канцерогеном полиполипоз носит микроскопическийхарактер.4.Показано, что Ах вовлечен в процесс заживления язвы. Его концентрациянарастает к 3-5 дню, и снижается с 12 дня и далее до концентрации, неотличимой от контрольной группы.Данный подъем характеризуетсяучащением осложнений со стороны дыхательной системы. Таким образом,изменение концентрации Ах в ранний послеоперационный период является128маркеромвоспалительногопроцессаиосложненийраннегопослеоперационного периода.5.Ацетилхолин изменяет синтез матриксных металлопротеиназ 3 и 9 типови эпидермального фактора роста в экстрактах слизистой оболочки толстойкишки у крыс и способствует ускорению митоза.Практические рекомендацииДляпроведенияэкспериментальногоизученияацетилхолинацелесообразно использовать подход параллельного изучения эффектов отвещества: In vitro и in vivo симуляцию, что позволит определитьизолированность эффектов от нейромедиатора и уточнить степень его влиянияна патофизиологические условия в изучаемой системе.

При моделированииопухолевого роста в толстой кишке у крыс важным является фактор наличияскрытого воспалительного процесса, как фактора активации опухолевогороста. Маркером наличия воспалительной реакции может быть измерениеконцентрации ацетилхолина в образцах тканей экспериментальных животных.Перспективы дальнейшей разработки темыИммуногистохимическое исследование в образцах тканей толстойкишки для определения наличия рецепторов к ацетилхолину как маркерарезистентности к факторам опухолевой супрессии является клиническизначимой задачей. Однако дальнейшее исследование влияния измененияконцентрации ацетилхолина при воспалении толстой кишки и связанного сэтим воспаления органов дыхания являеьтся наиболее перспективным и легкоосуществимым исследованием в экспериментальной работе и в клиническойпрактике.129СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1. Абелев Г.И., Эрайзер Т.Л.

На пути к пониманию природы рака. Обзор //Биохимия. 2008. № 5 (73). C. 605–618.2. Байсханова Д.М., Омаров Р.Т. Биологически активные продукты на основепробиотических культур и растительных экстрактов // Биотехнология. Теорияи практика. 2012. (2). C. 27–34.3. Барышников А.Ю. Взаимоотношения опухоли и организма // Практическаяонкология. 2003. № 3 (4).