Диссертация (Роль нарушения оксидативного статуса у больных системной красной волчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний), страница 7

Кроме того, былопоказано, что концентрация вкДНК у больных с активным ВН значительнопревышает таковую у больных с заболеванием в неактивной фазе. Былаотмечена прямая корреляция уровня вкДНК с выраженностью протеинурии,общим количеством нейтрофилов и их фракции с низкой плотностью.Потипупосттрансляционноймодификации(ацетилирование,цитруллинирование или метилирование) гистонов (Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4)можно установить вид клеточной смерти, которой подверглись нейтрофилы,а также оценить их активность [104, 105].

Так, было показано, что при СКВуровень ацетилирования и триметилирования лизина в гистонах (Н4-К8, Н4К12, Н4-К16, Н2В-К12) в НВЛ значительно выше, по сравнению сконтрольной группой [106]. Кроме того, было установлено, что приобразовании НВЛ происходит цитруллинирование линкерного гистона Н1поддействиемферментаPAD-4.Следуеттакжеотметить,чтомодифицированный гистон играет роль в патогенезе СКВ, являясь важнымаутоантигеном.Выявление в сыворотке крови больных СКВ белков, входящих в состав36гранулнейтрофилов,можетуказыватьнаповышениеактивностинейтрофилов. Было обнаружено, что нейтрофильные α-дефензины всыворотке могут служить независимыми маркёрами активности ВН, приэтом была отмечена прямая корреляция их концентрации с выраженностьюпротеинурии и активностью заболевания [107].Липокалин,белокнейтрофильныхгранул,выделяющийсявовнеклеточную среду в процессе нетоза и ассоциированный с желатиназойнейтрофилов, считают на данный момент одним из наиболее перспективныхмаркеров активности ВН [108].

Было показано, что его уровень коррелируетс активностью заболевания и степенью необратимого повреждения тканей, атакже с ответом на лечение. Тем не менее, очевидно, необходимыдальнейшие исследования на больших группах больных для более точнойоценки чувствительности и специфичности выше указанных биомаркеров.В ходе нескольких исследований было показано, что нейтрофилыявляются не только ключевым звеном при осуществлении реакцийврожденного иммунитета и способны продуцировать провоспалительныецитокины, но также они участвуют в регуляции адаптивного иммунитета, чтоиграет особую роль в патогенезе СКВ. В исследовании на больных СКВ имышиных моделях заболевания [109] было обнаружено, что в костном мозгенейтрофилыявляютсяглавнымиисточникамиИФН-1 ицитокинов,являющихся стимулами для В-клеток: APRIL (лиганда А, индуцирующегопролиферацию)ПредставляетсяиBAFFвероятным,(фактора,чтоактивирующегонейтрофилывселезёнкеВ-клетки).способныактивировать В- и Т-клетки, так как снижение уровня нейтрофилов вызываетуменьшение количества В-клеток в герминативных центрах лимфатическихузлов и ИНФγ+ Т-клеток, а также снижение экспрессии BAFF и уровняаутоантител.При изучении метилирования ДНК нейтрофилов при СКВ былообнаружено стойкое деметилирование группы генов, связанных с регуляциейэкспрессии ИФН-1 [110].

В связи с этим можно предположить, что37высвобождение гипометилированной ДНК, способной активировать TLR-9,нейтрофилами в процессе нетоза при СКВ может приводить к повышениюпродукции ИФН-1.Необходимо дальнейшее исследование механизмов, приводящих кувеличению образования НВЛ и нарушению их деградации у больных СКВ.Кроме того, требуют дальнейшего изучения терапевтические возможностиподавления продукции НВЛ при данном заболевании.

В соответствии свышеупомянутыми исследованиями [111, 112] на грызунах, потенциальноетерапевтическое действие с подобной направленностью могут оказыватьингибиторы PAD4, фермента, необходимого для формирования НВЛ.Также изучение НВЛ поможет расширить представления о механизмахдействия препаратов, уже успешно применяемых в клинической практикедля лечения СКВ. Например, было показано, что хлорохин способенподавлять образование НВЛ in vitro [113]. Также было обнаружено, чтоаналогичное действие оказывает циклоспорин А - ингибитор кальциневрина,кальций-зависимой фосфатазы, участвующей в регуляции экспрессииНАДФН-оксидазы(оксидазывосстановленнойформыникотинамидадениндинуклеотидфосфата), имеющей важное значение прииндукции нетоза [114].1.7 Оксидативный стресс у больных СКВПолагают, что оксидативный стресс лежит в основе патологическоговоздействия сигналов клеточной смерти, возникающих при СКВ.

Активацияи дальнейшая передача сигнала клеточной смерти иммунной системойзапускаетвысвобождениефрагментовядраизапоптотическихинекротических клеток, стимулирует продукцию антиядерных антител, споследующим воспалением, повреждением тканей и органов. Избыточнаяпродукция и неэффективная защита от АФК вносят свой вклад в развитиеСКВ [115, 116].381.7.1 Источники АФК при СКВОсновным источником АФК являются митохондрии, в Т клеткахбольныхСКВобнаруживаютмитохондриальнуюдисфункцию(гиперполяризация внутренней мембраны). Кроме того, в периферическихлимфоцитах больных СКВ были обнаружены повышенная продукция АФКили сниженный уровень восстановленного глутатиона [22].

Была обнаруженаповышенная продукция АФК фагоцитирующими клетками и, в меньшейстепени, эндотелиальными, Т- и В-клетками [117, 118].В понимание нарушения функции митохондрий при СКВ вносят вкладгенетические исследования. На мышиных моделях было обнаружено, чтоснижение экспрессии гена Sle1c2 (сублокус мышиного основного генапредрасположенности к СКВ Sle1) кодирует ядерный эстроген-связанныйрецептор γ, участвующий в регуляции оксидативного метаболизма ифункции митохондрий, в Т клетках приводила к увеличению суммарноймассы митохондрий, которая была оценена по увеличению количествапотенциал-зависимых анионных каналов. Кроме того, было обнаружено, чтонесинонимичные полиморфизмы в НАДФН-дегидрогеназе и АТФ-синтазедыхательной цепи, кодируемые в митохондриальной ДНК, связаны с рискомразвития СКВ [119, 120].

Также неактивные аллели гена UCP2, кодирующегобелок термогенин, или митохондриальный разобщающий протеин 2,участвующий в регуляции продукции АФК митохондриями, связаны спредрасположенностьюкнекоторымаутоиммуннымзаболеваниям:рассеянному склерозу, ревматоидному артриту, СКВ, гранулёматозу сполиангиитом, болезни Крона и неспецифическому язвенному колиту.Полагают, что повышение уровня АФК при СКВ может быть связано снакоплением избыточного количества митохондрий, в результате повышенияих образовании и снижения деградации в Т-клетках.

Это явление, согласноисследованиям на больных СКВ и мышиных моделях заболевания, являетсярезультатом снижения в Т-клетках DRP1 (динамин-1-подобного белка),регулирующего процессы деления митохондрий и митофагии [121].39Источником АФК при СКВ также могут быть фагоцитирующие клетки:макрофаги и гранулоциты, экспрессирующие НАДФН-оксидазу.Было показано, что нейтрофилы обладают патологической оксидативнойактивностью, по сравнению с группой здорового контроля, по мнениюавторов, это может быть связано с нарушением функции рецепторовкомпонентовсистемыкомплементанейтрофиловирецепторовFcγ(кристаллизующемуся фрагменту иммуноглобулина γ), участвующих врегуляции фагоцитарной активности нейтрофилов [122].При СКВ были обнаружены мутации NCF2 (гена, кодирующегоцитозольный фактор нейтрофилов 2), компонента комплекса НАДФНоксидазы, что, возможно, способно влиять на продукцию АФК.Кнастоящемувремениполученыпротиворечивыеданныеофункциональной активности нейтрофилов, связанной с продукцией АФК.

Содной стороны, было показано, что для СКВ характерна повышеннаябазальнаяиStaphylococcusстимулированнаяaureusиинактивированнымиPseudomonasaeruginosaкультурамипродукцияАФКнейтрофилами, по сравнению с группой контроля здоровых людей,независимо от активности заболевания или повреждения органов, оцененныхс помощью индексов SLEDAI и SDI, соответственно, но коррелирующая сналичием поражения почек [123].

В другом исследовании [124] былообнаружено, что для нейтрофилов больных СКВ после стимуляции ФМА exvivo продукция АФК ниже, по сравнению с группой контроля здоровыхлюдей, однако, следует отметить тот факт, что большинство больных СКВнаходились в ремиссии или клинические проявления заболевания у них былиминимальны.1.7.2 Снижение антиоксидантной защиты при СКВСуществует предположение, что к развитию СКВ может приводитьснижение активности эндогенных антиоксидантных ферментов.

По даннымнекоторых исследований, для активного течения СКВ характерно снижениеуровня СОД1 [125].40Было показано, что для самок мышей нокаутных по nrf2 (гену,кодирующему ядерный фактор эритроид 2-связанный с фактором 2),участвующего в регуляции транскрипции антиоксидантных ферментов, былихарактерны меньшая продолжительность жизни, повышенное перекисноеокисление липидов, продукция антител к ДНК, спленомегалия, поражениепочек по типу гломерулонефрита.

В исследовании на больных с СКВ сдебютом в детском возрасте была обнаружена корреляция полиморфизмагена NRF2 с риском развития гломерулонефрита [126, 127].Также в Т-клетках больных СКВ было обнаружено снижение уровняглутатиона [128], а полиморфизм гена, кодирующего фермент глутатион-Sтрансферазу, связан с риском развития СКВ [129].Было обнаружено, что повышенная продукция АФА влияет наметилирование ДНК, и, следовательно, может играть роль в регуляциитранскрипции провоспалительных генов.

Было показано, что нитрозативныйстрессприводиткснижениюактивностиДНК-(цитозин-5)-метилтрансферазы 1 (DNMT1), обеспечивающей метилирование ДНК. Висследовании на CD4+ T-лимфоцитах больных СКВ было показано, чтоповышенная продукция АФА приводила к нитрованию протеинкиназы Cδ,что, в результате, подавляло активацию DNMT1 [130].1.7.3 Маркеры оксидативного стресса у больных СКВ1) Маркёры оксидативного повреждения липидовВ ряде исследований было обнаружено, что повышенный уровень МДАпри СКВ коррелировал с наличием поражения почек [131].

В исследованияхбылопоказано,чтолечениеN-ацетилцистеином,предшественникомглутатиона, приводило к снижению уровня МДА [132].Был обнаружен повышенный уровень 4-гидрокси-2-ноненаля у больныхСКВ и на мышиных моделях [133]. Данные исследований уровня F2изопростана в плазме и моче указывают на то, что этот маркёр являетсяточным показателем оксидативного повреждения сосудистого русла убольного СКВ, а также коррелирует с активностью заболевания [134]. F2-41изопростан является наиболее оптимальным маркёром ПОЛ при СКВ,поскольку он отражает достоверно уровень ПОЛ in vivo, он представляетсобой стабильное химическое соединение, его уровень может быть измерен сдостаточной точностью во всех тканях и биологических жидкостях и независит от содержания липидов в питании.2) Маркёры оксидативного повреждения белковКарбонильные производные белков и нитротирозин широко применяютв качестве биомаркёров оксидативного повреждения при СКВ [135].

Приэтом карбонильные производные белков являются наиболее подходящиммаркёром, так как отличаются наибольшей продолжительностью циркуляциив крови. В ряде исследований [136] была установлена корреляция междууровнемобщегоколичествакарбонильныхпроизводныхбелковиактивностью СКВ. Также было показано, что уровень 3-нитротирозинакоррелирует с наличием артритов, поражением почек и сердца при СКВ [137,138].3) Маркёры оксидативного повреждения ДНКМаркёром оксидативного повреждения ДНК может служить 8ОНдГ, егоуровень в моче коррелирует с активностью заболевания, и не зависит отхарактера питания человека [139, 140].4) Исследование содержания антиоксидантовСуществуют данные о том, что снижение уровня восстановленнойформы глутатиона [141] у больных СКВ коррелирует с наличиемгломерулонефрита, поражения ЦНС.