Диссертация (Роль нарушения оксидативного статуса у больных системной красной волчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний)

Московский Государственный Университет имени М.В. ЛомоносоваФакультет фундаментальной медициныНа правах рукописиСмирнова Елена ВладимировнаРоль нарушения оксидативного статуса у больных системной краснойволчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний14.01.04 – внутренние болезниДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:академик РАН, профессор, д.м.н.,Мухин Н.А.Москва20182ОГЛАВЛЕНИЕСПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………….4ВВЕДЕНИЕ ..................................................................................................

7ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................ 141.1 Оксидативный статус в условиях нормальных физиологическихреакций. ................................................................................................... 151.2. Свободные радикалы .......................................................................

151.2.1. Активные формы кислорода ...................................................... 151.2.2. Активные формы азота. ............................................................. 161.2.3. Радикал кофермента Q (убихинол). ........................................... 161.3 Антиоксиданты ................................................................................. 181.4 Маркёры оксидативного стресса. .................................................... 201.5 Оксидативный стресс и воспаление. ............................................... 231.6 Системная красная волчанка............................................................ 271.6.1. Клинические проявления и классификация СКВ. ....................

271.6.2 Этиология..................................................................................... 301.6.3 Патогенез СКВ ............................................................................. 311.7 Оксидативный стресс у больных СКВ. ........................................... 371.7.1 Источники АФК при СКВ ........................................................... 381.7.2 Снижение антиоксидантной защиты при СКВ .......................... 391.7.3 Маркеры оксидативного стресса у больных СКВ ..................... 401.8 Значение оксидативного стресса в ускоренном развитииатеросклероза при СКВ …………………………………………………42ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ....................... 452.1 Группы исследованных больных…………………………………...452.2 Методы обследования больных .......................................................

482.3 Специальные методы исследования ................................................ 492.4 Статистическая обработка данных .................................................. 55ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ......................................... 573.1 Исследование функциональной активности нейтрофилов под3действием искусственных стимулов…………………………………...573.2 Исследование доли окисленного альбумина………………………593.4 Исследование антиоксидантной активности плазмы крови……...603.5 Исследование связи иммуновоспалительной реакции и поражениявнутренних органов с нарушением оксидативного статуса…………..613.6 Исследование частоты сердечно-сосудистых заболеваний игиперлипидемии в группе больных СКВ………………………………653.7 Исследование значения показателей функциональной активностинейтрофилов в прогнозировании развития факторов сердечнососудистого риска……………………………………………………….66ГЛАВА 4.

ОБСУЖДЕНИЕ………………………………………………...70ВЫВОДЫ .................................................................................................... 77ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ…………………………………...79ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………….80СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.....………………………………………………894СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАБАП – 2,2’-азо-бис(2-амидинопропан)дигидрохлоридАДФ – аденозиндифосфатАКР – Американская коллегия ревматологовАЛТ – аланинаминотрансферазаАНА – антинуклеарные антителаАОА – антиоксидантная активностьАСТ – аспартатаминотрансферазаАТФ – аденозинтрифосфатАФА – активные формы азотаАФК – активные формы кислородаАФС – антифосфолипидный синдромвкДНК – внеклеточная ДНКВН – волчаночный нефритВЭБ – вирус Эпштейн-БаррВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматографияГИБП – генно-инженерный биологический препаратГКС – глюкокортикостероидГ-КСФ – гранулоцитарный колониестимулирующий факторГМ-КСФ – гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующийфакторГНП – гранулoцит низкой плотностиГПО – глутатионпероксидазаДГЭА – дегидроэпиандростеронДНК – дезоксирибонуклеиновая кислотаДОА – доля окисленного альбуминадсДНК – двуспиральная ДНКИЛ-1β – интерлейкина-1βИФА – иммуноферментный анализ5ИФН-α – интерферон альфаЛДГ – лактатдегидрогеназаЛПВП – липопротеины высокой плотностиЛПНП – липопротеины низкой плотностиМДА – малоновый диальдегидмРНК – матричная рибонуклеиновая кислотаМС – мочевой синдроммтДНК – митохондриальная ДНКНАДФН – никотинамидадениндинуклеотидфосфатНВЛ – нейтрофильная внеклеточная ловушкаНС – нефротический синдромПОЛ – перекисное окисление липидовПЭГ-6000 – полиэтиленгликоль-6000САР – супероксидный анион-радикалСАЧ – сывороточный альбумин человекаСКВ – системная красная волчанкаСОД – супероксиддисмутазаСОЭ – скорость оседания эритроцитовСРБ – С-реактивный белокФМА – форбол-12-миристат-13-ацетатФМЛФ – формил-метионил-лейцил-фенилаланинФНО-α – фактор некроза опухоли αХЛ – хемилюминесценцияЦИК – циркулирующий иммунный комплексЦНС – центральная нервная системаЭПР – электронный парамагнитный резонанс8-ОН-дГ – 8-гидрокси-дезоксигуанозинApoE-/- – нокаутирование гена аполипопротеина ЕBAFF – фактор, активирующий В-клетки (B-cell activating factor)CRAMP – кателицидин6DNMT1 – ДНК-(цитозин-5)-метилтрансфераза 1 (DNA (cytosine-5)methyltransferase)ERK – киназа, активируемая внеклеточным сигналом (extracellularsignal-regulated kinase)HLA – человеческий лейкоцитарный антиген (human leukocyte antigen)Ig – иммуноглобулин (immunoglobulin)MMP-9 – матриксная металлопротеиназа 9 (matrix metalloproteinase 9)NF-κB – ядерный фактор транскрипции κB (nuclear factor kappa-lightchain-enhancer of activated B cells)NOX4 – НАДФН-оксидаза 4 (NADPH oxidase 4)NRF2 – ядерный фактор эритроид 2-связанный с фактором 2 (nuclearfactor (erythroid-derived 2)-like 2PAD-4 – ядерная пептидиларгинин деиминаза 4 (protein argininedeiminase 4)SDI – шкала для оценки повреждения органов, накопленное с моментаначала заболевания (Systemic Lupus International CollaboratingClinics/American College of Rheumatology Damage Index)SLEDAI-2K – шкала для оценки активности СКВ (Systemic LupusErythematosus Disease Activity Index)TLR9 – толл-подобный рецептор 9 (toll-like receptor 9)7ВВЕДЕНИЕАктуальность работыВведениевтерапевтическуюпрактикусовременныхиммуносупрессивных средств значительно изменило течение системнойкрасной волчанки (СКВ), поэтому в настоящее время важную роль средипричин смертности при СКВ играют отдаленные осложнения, связанные сразвитием раннего атеросклероза и, как следствие, развитие сердечнососудистых заболеваний.

В исследовании [1] было обнаружено, что частотаинфаркта миокарда среди больных СКВ женского пола в возрасте от 35 до 44лет более чем в пятьдесят раз превышает таковую в популяции женщинаналогичного возраста; по данным мета-анализа десяти популяционныхисследований частота ОНМК у больных СКВ в 2,53 раза превышала таковуюв общей популяции [2]; также у больных СКВ были отмечены более частыесубклинические проявления атеросклероза (толщина комплекса интимамедиа и количество атеросклеротических бляшек в сонных артериях) [3, 4],при этом наличие традиционных факторов риска не способно в полной мереобъяснить подобное явление.

Среди возможных причин ускоренногоразвитиянарушениеатеросклерозаобсуждаютсяоксидативногостатуса,персистирующееприводящиеквоспалениеидисфункциииповреждению эндотелия.Негативное действие оксидативного стресса при СКВ связывают собразованием окисленных форм белков и ДНК, повреждением липидныхмембран [5]. В исследовании [6] было продемонстрировано, что повышенныйуровень окисленных липопротеинов низкой плотности является факторомриска развития сердечно-сосудистых заболеваний у больных СКВ. Такжесуществуют данные о влиянии оксидативного стресса на индукцию апоптозаи нетоза при СКВ, образование аутоантигенов и повреждение тканей.Нейтрофилы являются одним из основных источников активных формкислорода (АФК) и, соответственно, оксидативного стресса, в организме8человека.

На мышиных моделях атеросклероза было обнаружено, чтоингибирование ферментов, обеспечивающих образование АФК в ходереспираторного взрыва: НАДФН-оксидазы и миелопероксидазы (МПО) –подавляет прогрессирование атеросклероза [7]. В исследовании [8] уровеньМПО сыворотки крови был значимым предиктором тяжелых сердечнососудистых осложнений. По современным данным, нейтрофилы участвуют впатогенезе СКВ, а также играют важную роль в развитии атеросклерозаблагодаря способности образовывать нейтрофильные внеклеточные ловушки(НВЛ) в ходе нетоза, одного из механизмов клеточной смерти, характерногодлянейтрофилов.Былопоказано[9],чтонестабильностьатеросклеротических бляшек коррелирует с уровнем нетоза нейтрофилов,инфильтрирующихбляшки.продемонстрировано,чтоНамышиныхподавлениемоделяхобразованияатеросклерозанейтрофильныхвнеклеточных ловушек (НВЛ) уменьшает атеросклеротическое поражениесосудов.Однако,донастоящегомоментасистемногоизученияоксидативного статуса у больных СКВ не проводилось.Цель исследования: оценить особенности оксидативного статуса убольных СКВ и их взаимосвязь с риском развития сердечно-сосудистыхосложнений.Задачи исследования1.

Определить показатели функциональной активности нейтрофилов какисточников активных форм кислорода и уточнить выраженностьоксидативного стресса по доле окисленного альбумина.2. Оценить антиоксидантную активность плазмы крови.3. Изучить взаимосвязь выраженности иммуновоспалительной реакции ивисцеритов с нарушением оксидативного статуса.4. Выявитьчастотусердечно-сосудистыхгиперлипидемии в группе больных СКВ.заболеванийиразвития95. Изучить взаимосвязь нарушения оксидативного статуса у больных СКВсрискомразвитиясердечно-сосудистыхосложненийигиперлипидемией.Научная новизнаВпервые была изучена функциональная активность нейтрофиловбольныхСКВ,связаннаясобразованиемсвободныхрадикаловсприменением хемилюминесцентных методик с двухстадийной стимуляциейи регистрацией кинетической кривой хемилюминесценции.

Показано, чтонейтрофилы больных СКВ находятся в активированном и праймированномсостоянии по сравнению с нейтрофилами здоровых доноров, активированноеипраймированноесостояниенейтрофиловприСКВиндуцируютсяпровоспалительными цитокинами, в частности, интерлейкином-1β (ИЛ-1β).Впервые показано, что показатели функциональной активностинейтрофилов: удельная интегральная и пиковая активности нейтрофилакоррелируют с уровнем общего холестерина сыворотки, а удельнаяинтегральнаяактивностьнейтрофилаявляетсяпредикторомгиперлипидемии.Впервые показано, что при СКВ не происходит значительнойокислительной модификации альбумина, что свидетельствует о сохранноститретичной структуры белка. Показано, что концентрация ЦИК при СКВопосредовано может быть оценена с помощью измерения триптофановойфлуоресценции.Комбинация терапии цитостатическими препаратами приводит кповышению антиоксидантной активности плазмы.Практическая значимость работыПолученные данные расширяют представления о роли оксидативногостресса при СКВ и могут служить основой для дальнейшего изучения вкладанарушения оксидативного статуса в патогенез самого заболевания и развитие10сердечно-сосудистых осложнений.Предложены новые методы оценки оксидативного стресса в кровибольныхСКВ:определениефункциональнойактивностилюминол-активированнойстимуляцией,антиоксидантнойнейтрофиловсактивностипомощьюхемилюминесценцииопределениесодержанияплазмыикинетическойсдвухстадийнойокислительноймодификацииальбумина с помощью спектрофлуориметрии.Данныеметодикимогутбытьиспользованывдальнейшихисследованиях клинического значения показателей оксидативного статуса убольных СКВ.Применениеудельнойинтегральнойактивностинейтрофила,отражающей его функциональную активность, имеет клиническое значениедля прогнозирования раннего развития атеросклероза, и, следовательно, длясвоевременнойкомпенсациигиперлипидемииипредупреждениявозникновения сердечно-сосудистых осложнений.Повышениеантиоксидантнойактивностиплазмыкровиприназначении цитостатиков свидетельствует об их протективном эффекте вотношении развития гиперлипидемии и, следовательно, для своевременнойкомпенсации гиперлипидемиии и предупреждения возникновения сердечнососудистых осложнений.Повышениеантиоксидантнойактивностиплазмыкровиприназначении цитостатиков свидетельствует об их протективном эффекте вотношенииразвитиягиперлипидемиии,следовательно,сердечно-сосудистых осложнений..Основные положения, выносимые на защиту:1.