Диссертация (Роль нарушения оксидативного статуса у больных системной красной волчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний), страница 10

Для распределения, отличающегося от нормального,результаты представлены в виде медианы и интерквартильного размаха.Для изучения связи между данными использовали коэффициентранговой корреляции Спирмена или параметрический корреляционныйметод Пирсона. Достоверность различия между двумя группами оценивали спомощью непараметрического критерия Манна-Уитни или параметрическогокритерия Стьюдента. Для анализа различия между несколькими группамиприменяли параметрический дисперсионный анализ или непараметрический56метод сравнения Краскела-Уоллиса.Поиск параметров, позволяющих прогнозировать динамику развитиязаболевания, осуществляли с помощью бинарной логистической регрессии.Вероятность наступления события оценивали в зависимости от значениянезависимых переменных (показателей оксидативного стресса отдельно и всочетаниисклинико-лабораторнымипараметрами).Вероятностьнаступления события вычисляли с помощью формулы:p1, где z  b1  X1  b2  X 2  ...

 bn  X n  a .1  e zXi – значение независимой переменной, характеризующей объясняющийпризнак (фактор риска), bi и a – регрессионный коэффициент и некотораяконстанта,соответственно,полученныеврезультателогистическогорегрессионного анализа.Во всех случаях различия признавали статистически достоверными приуровне значимости p < 0,05.57ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ3.1 Исследование функциональной активности нейтрофилов поддействием искусственных стимуловПри сравнении больных СКВ с группой контроля оказалось, что длябольных СКВ характерна более высокая удельная пиковая активностьнейтрофилов A1*. Выявленные различия статистически значимы (p <0,0001)А1*, ×10–2 имп/(с*кл)(Рис.

3).*ПациентыКонтрольРисунок 3. Удельная пиковая активность нейтрофила A1* в группепациентов и группе контроля, *p<0,05У больных СКВ также статистически значимо более выраженаудельная интегральная активность нейтрофила S*, по сравнению с группойконтроля (p <0,0001) (Рис. 4).S*, имп/(кл)58*ПациентыКонтрольРисунок 4. Удельная интегральная активность нейтрофила S* в группепациентов и группе контроля, *p<0,05Также у больных СКВ удельная спонтанная хемилюминесценцияАсп*, ×10–2 имп/(с*кл)нейтрофила достоверно выше, чем в группе контроля (р <0,0001) (Рис.

5).*ПациентыКонтрольРисунок 5. Удельная спонтанная хемилюминесценция нейтрофила вгруппе пациентов и группе контроля, *p <0,05Отличий при оценке коэффициента затухания респираторного взрыванейтрофилов между группой больных и группой контроля не былообнаружено (Рис.6).Kd*, имп/(кл)59ПациентыКонтрольРисунок 6. Коэффициент респираторного взрыва в группе пациентов игруппе контроля, *p<0,053.2 Исследование доли окисленного альбуминаПриопределенииДОАспомощьюфлуоресцентногоанализаобнаружено, что в подавляющем большинстве случаев этот параметрпринимал отрицательные значения, что являлось следствием наличия вплазмекровикомпонентов,вносящихвкладвтриптофановуюфлуоресценцию.

Предположено, что подобными мешающими компонентамимогут являться ЦИК.После предварительного отделения ЦИК с помощью методики сприменением ПЭГ-6000 [155] провели измерение доли окисленногоальбумина (ДОА) методом флуоресцентного анализа (n = 53). Междугруппой больных СКВ и группой контроля не обнаружено статистическизначимого отличия: результаты, полученные для группы больных (средняяДОА 24%, s = 18%) сопоставимы с таковыми для группы контроля (средняяДОА 24%, s = 16%), p = 0,35 (критерий Манна-Уитни). Следовательно,можно сделать вывод, что при СКВ альбумин не претерпевает значительнойокислительной модификации, что свидетельствует о сохранности третичной60структуры белка.3.4 Исследование антиоксидантной активности плазмы кровиУ больных СКВ АОА плазмы крови была выше, по сравнению сконтрольнойгруппой(p=0,0059).ЗначенияS(АОА)(медианаиинтерквартильный размах) составили для группы больных – 315·103 имп(200·103 – 480·103), для группы контроля 220·103 имп (190·103 – 260·103)3S(АОА)×10 , имп(Рис.7).*ПациентыКонтрольРисунок 7.

АОА плазмы крови в группе пациентов и группе контроля, *p<0,05Корреляционный анализ не подтвердил наличия связи между уровнемАОАиконцентрациеймочевойкислоты(коэффициенткорреляцииСпирмена r = 0,02, p = 0,86, n анализируемых пар = 53).Для определения влияния цитостатиков на АОА плазмы кровисравнивали группы больных, получавших комбинированную терапиюцитостатиками и ГКС (n = 25), и больных, получавших монотерапию ГКСили ГКС в сочетании с гидроксихлорохином (n = 28).В группе больных, получавших комбинированную терапию ГКС сцитостатиками, обнаружено статистически значимое увеличение АОАплазмы крови (p = 0,037 для критерия Манна-Уитни) (Рис.

8).3S(АОА)×10 , имп61*Группа,получавшая цитостатикиГруппа,не получавшая цитостатикиРисунок 8. АОА плазмы крови в группах пациентов, получавших и неполучавших лечение цитостатиками, *p<0,05В исследовании in vitro АОА преднизолона составила 14,8±0,5 мкМ, аАОА метотрексата = 3,6±0,1 мкМ в единицах концентрации аскорбатанатрия. Следовательно, АОА, связанная с приемом иммуносупрессивныхпрепаратов, может составлять до 80% от общей АОА плазмы крови.Поскольку оба препарата обладают антиоксидантным действием, можнопредположить,чтоповышениеАОАплазмыкровипритерапиицитостатиками связано как с их способностью вызывать гиперурикемию, таки с их собственной АОА.3.5Исследованиесвязииммуновоспалительнойреакцииипоражения внутренних органов с нарушением оксидативного статусаУ больных СКВ с поражением и без поражения внутренних органовпоказатели радикал-продуцирующей активности нейтрофилов не отличались.Однако при анализе больных СКВ с ВН было обнаружено снижениеудельной спонтанной активности нейтрофила у больных активным ВН с НСпо сравнению с больными активными формами ВН без НС, неактивными62Асп*, ×10–2 имп/(с*кл)формами ВН и без поражения почек (p = 0,045) (Рис.9).*Группа АГруппа ВРисунок 9.

Удельная спонтанная активность нейтрофила в группе сактивным ВН с НС (Группа А) и группе с активными формами нефрита безНС, неактивными формами нефрита и без поражения почек (Группа В), *p<0,05У больных с различной степенью активности заболевания, оцененнойс помощью индекса SLEDAI, показатели функциональной активностинейтрофилов статистически значимо не отличались.В группах больных СКВ с различным повреждением органов:значительным, минимальным или его отсутствием, оцененным с помощьюиндекса SDI, также не было отмечено статистически значимых отличийисследуемых параметров.Между больными СКВ, получающими активную иммуносупрессивнуютерапию и поддерживающее лечение, не было обнаружено статистическизначимого отличия.В объединённой выборке больных была выявлена корреляциякоэффициента затухания респираторного взрыва нейтрофилов с уровнемСОЭ (коэффициент корреляции Спирмена r = 0,36, p = 0,02, n анализируемыхпар = 53).63Корреляции показателей функциональной активности нейтрофилов сдругимипараметрами,отражающимииммунологическуюактивностьзаболевания (СРБ, фибриноген, антитела к ДНК, компоненты системыкомплемента) не были обнаружены.В соответствии с предположением о праймированном цитокинамисостояниинейтрофилов,прикоторомпроисходитувеличениеихпотенциальной функциональной активности, обеспечивающим переход сначального уровня с низкой скоростью протекания биохимических процессоввактивированноесостояние,проведеновоздействиеестественнымистимулами (ИЛ-1β, ГКС-Ф) на нейтрофилы образцов крови 5 больных.

Напервом этапе при сравнении со здоровыми донорами в ответ на стимуляциютолькоИЛ-1βвовсехслучаяхнаблюдаливыраженныйхемилюминесцентный ответ нейтрофилов (вид типичной кривой представленна Рис. 8;доноров = 2,52×103, имп/с (n = 6),*больных СКВ = 4,53×103,*имп/с (n = 6); p <0,05). При предварительной стимуляции ИЛ-1β отмечалидвухфазное праймирующее действие этого цитокина после воздействияосновного стимула ФМЛФ, при этом у здоровых доноров данный эффектбыл выражен слабо (Рис.

10). Полученные данные свидетельствуют о том,что у больных СКВ ИЛ-1β является как выраженным стимулом, так ипраймирующим агентом.I(ХЛ)×103, имп/с64t, минРисунок 10. Хемилюминесцентный ответ нейтрофилов крови больногоСКВ С. на стимуляцию ФМА, ФМА+ФМЛФ, ИЛ-1β, ИЛ-1β + ФМЛФ.При стимуляции ГКС-Ф были получены сопоставимые эффекты вгруппе здоровых и больных (*доноров = 1,12× 103, имп/с (n = 6),*больных СКВ = 1,27×103, имп/с (n = 6); p = 0,13).При исследовании связи иммуновоспалительной реакции и поражениявнутренних органов с долей окисленного альбумина обнаружено, чтоуровень общей триптофановой флуоресценции безглобулиновой плазмыкрови отражает содержание в ней ЦИК. Был предложен новый экспрессныйпараметр, отражающий общую триптофановую флуоресценцию образцаплазмы крови, зависящую от количества остатков триптофана, соедржащихсявЦИКиальбумине.Trp*(САЧ+ЦИК) = I*trpЕгореал/I0рассчитываютtrpтеор,где I*trpследующимреалобразом:— интенсивностьфлуоресценции безглобулиновой плазмы при 353 нм (λex=260 нм), I0 trp теор —интенсивность флуоресценции триптофана, соответствующая концентрацииальбумина, определенной биохимическим методом.

Таким образом, он можетбыть использован в качестве экспрессного показателя, отражающего общуютриптофановую флуоресценцию образца плазмы крови, зависящую от65количества остатков триптофана, содержащихся в ЦИК и альбумине.Уровень триптофановой флуоресценции безглобулиновой плазмыкрови, отражающей интенсивность образования ЦИК, значимо выше вгруппе с поражением внутренних органов (n = 33, среднее Trp* 2,21, s =0,53), по сравнению с группой без поражения внутренних органов (n = 20,среднее Trp* 1,83, s = 0,60) (p = 0,032); в группе пациентов с активным ВН (n= 29, среднее Trp* 2,24, s =0,55), по сравнению с пациентами без пораженияпочек (p = 0,030); коррелирует с концентрацией антител к ДНК(коэффициент корреляции Спирмена r = 0,39, p = 0,008, n анализируемых пар= 53) (p = 0,008) и значимо выше в группе получающих активнуюиммуносупрессивную терапию (n = 12, среднее Trp* 2,43, s =0,58), посравнению с группой, получающей поддерживающую терапию (n = 41,среднее Trp* 1,96, s = 0,53) (p = 0,01).Проведено исследование связи иммуновоспалительной реакции ипоражения внутренних органов с уровнем АОА плазмы крови.

Присопоставлении АОА плазмы крови между группами больных СКВ сразличной выраженностью повреждения внутренних органов и активностизаболевания статистически значимого отличия обнаружено не было. Присравнении групп больных СКВ, разделенных в зависимости от наличияпоражения внутренних органов, а также характера поражения почек, такжене было обнаружено статистически значимого отличия.3.6 Исследование частоты сердечно-сосудистых заболеваний игиперлипидемии в группе больных СКВЧастота сердечно-сосудистых осложнений в исследуемой группесоставила 13,2% (7 больных из них 3 больных с атеросклерозомпериферических артерий, 1 больной с церебро-васкулярной болезнью,атеросклерозом сонных артерий, 2 больных с ИБС, 1 больной с ИМ),гиперлипидемия(повышениеобщегохолестерина(6,0(2,1))илитриглицеридов (2,2 (1,4)) отмечена у 36% обследованных больных, что66значимо выше чем в популяции в целом, при том что возраст выборкисоставил 34,2 (11,5) года.3.7Исследованиеактивностизначениянейтрофиловвпоказателейпрогнозированиифункциональнойразвитияфакторовсердечно-сосудистого рискаПроведен анализ корреляции показателей функциональной активностинейтрофилов (удельногоуровняспонтанной ХЛ,удельной пиковойактивности нейтрофила, удельной интегральной активности нейтрофила икоэффициента затухания респираторного взрыва) у больных СКВ сфакторами риска сердечно-сосудистых заболеваний: возраста, длительностизаболевания, уровня артериальной гипертензии, показателей липидногоспектра (ЛПВП, ЛПНП, триглицериды, общий холестерин), СРБ, СОЭ.ВгруппебольныхСКВбылавыявленаположительнаякорреляционная связь удельной интегральной активности нейтрофила сконцентрациейобщегохолестеринасывороткикрови(коэффициенткорреляции Спирмена r = 0,35, p = 0,03, n анализируемых пар = 53) (Рис.

9), атакже положительная корреляционная связь удельной пиковой активностинейтрофиласконцентрацией общего холестеринасывороткикрови(коэффициент корреляции Спирмена r = 0,41, p = 0,009, n анализируемых пар= 53) (Риc. 11).Общий холестерин, ммоль/л67Рисунок11.КорреляцияS*, имп/(кл)удельнойинтегральнойактивностиОбщий холестерин, ммоль/лнейтрофила с концентрацией общего холестерина сыворотки крови.А1*, ×10–2 имп/(с*кл)Рисунок 12. Корреляция удельной пиковой активности нейтрофила сконцентрацией общего холестерина сыворотки крови.Дляостальныхфакторовсердечно-сосудистогориска(возраст,длительность заболевания, уровень артериальной гипертензии, ЛПВП,ЛПНП, триглицериды, СРБ, СОЭ) результаты статистического анализапоказали отсутствие значимой корреляции с показателями функциональнойактивности нейтрофилов.68При оценке прогностического значения показателей функциональнойактивности нейтрофилов была исследована зависимость качественногобинарного признака (наличие или отсутствие повышения уровня общегохолестерина сыворотки крови; наличие или отсутствие гиперлипидемии) отнезависимых переменных (стандартных клинико-лабораторных показателейи показателей функциональной активности нейтрофилов) с помощьюбинарной логистической регрессии.Оценивалииндивидуальноезначениекаждогоизпоказателейфункциональной активности нейтрофилов:- удельный уровень спонтанной ХЛ нейтрофила- удельная пиковая активность нейтрофила- удельная интегральная активность нейтрофила- коэффициент затухания респираторного взрываТакже провели оценку значимости вышеуказанных параметров всочетаниисоследующимистандартнымиклинико-лабораторнымипоказателями:- концентрация фибриногена в плазме крови- уровень СОЭ- уровень СРБДля всех больных, включённых в исследование, рассчитываливероятность (Р) одного из событий (наличие или отсутствие повышенияуровня общего холестерина сыворотки крови; наличие или отсутствиегиперлипидемии) на основе одного из показателей функциональнойактивностинейтрофилов,какнезависимойпеременной.Вероятностьнаступления события рассчитывали по формуле:p1, где z  b1  X1  b2  X 2  ...