Диссертация (Молекулярно-генетические аспекты развития гестоза у женщин северо-западного региона Hоссии), страница 11

LXR β образуют гетеродимеры с ретиноидным Х рецептором(RXR) и активируют гены, вовлеченные в обратный транспорт холестерина, участвуют врегуляции углеводного обмена и врожденного иммунитета [Mouzat et al., 2011]. Рецепторы LXRβ найдены в различных тканях организма [http://www.ncbi.nlm.nh.gov/]. Ген NR1H2экспрессируется и в плаценте, где его активность возрастает по мере прогрессированиябеременности [Mouzat et al., 2011].

Есть указания на участие LXR β в контроле процессовинвазии трофобласта [Mouzat et al., 2011].В гене NR1H2 зарегистрирован 351 полиморфный сайт [http://www.ncbi.nlm.nh.gov/].Некоторые варианты ассоциированы с сахарным диабетом 2 типа и ожирением [Dahlman et al.,2009; Solaas et al., 2010]. Показана связь замены в промоторной области гена NR1H2 -103T>C(rs2695121) с гестозом (p=0,003) [Mouzat et al., 2011].Ген СЕТР картирован на 16 хромосоме (16q12-q21), содержит 16 экзонов и кодируетбелковый транспортер эфиров холестерина плазмы СЕТР (cholesterol ester transfer protein)[http://www.ncbi.nlm.nh.gov/],которыйучаствуетвобратномтранспортехолестерина.Осуществляет перенос эфиров холестерина с ЛПВП на липопротеины, содержащиеаполипопротеин В, с последующим их захватом клетками печени [Schierer et al., 2012].В гене идентифицированы 798 полиморфных участков, в том числе точечная замена2490C>A (rs3764261) [http://www.ncbi.nlm.nh.gov/].

Частота аллели A в разных популяцияхварьирует, у европейцев она почти вдвое выше, чем у азиатов (28-36% и 17-19%)[http://www.ensembl.org/]. Аллель A считается протективной в развитии ССЗ. У носителей этойаллели повышен уровень ЛПВП и снижено САД [Schierer et al., 2012]. Есть исследования, вкоторых аллели rs3764261 гена СЕТР рассматриваются в качестве фактора риска развитиягестоза [Belo et al., 2004; Bernard et al., 2007].391.7.5 Межгенные и ген-средовые взаимодействияВ работе Dalmaz C.A.et al.

(2006) описано совместное влияние генов MTHFR, F2, F5 иPAI1 при гестозе. Обнаружено повышение риска развития гестоза при сочетаниифункционально неблагоприятных аллелей полиморфных сайтов генов MTHFR rs1801133, F2rs1799963, F5 rs6025 и PAI1 rs1799768 [Dalmaz et al., 2006]. В исследовании норвежских авторовбыло выявлено взаимодействие между генами MTHFR и F5 у пациенток с гестозом. Рискразвития гестоза у носителей генотипа ТТ был повышен в 2 раза (ОР=2,0; 95%ДИ=1,0-4,1), приналичии мутации Лейден - в 2,5 раза (ОР=2,5; 95%ДИ=1,1-5,7). Сочетание генотипа ТТ смутацией Лейден увеличивало риск развития гестоза почти в 5 раз (ОР=4,6; 95%ДИ=1,0-21)[Vefring et al., 2004]. Tempfer C. B. et al (2004) установили, что вероятность возникновениягестоза повышается при сочетании, по крайней мере, двух неблагоприятных генотипов посайтам генов F5 rs6025, NOS3 rs1800779, NOS3 rs1799983 и ESR1 (ген рецептора к эстрогену 1типа) rs2234693.Исследований по взаимодействию генетических факторов и других факторов рискагестоза очень немного.

Группой авторов из Австралии и Новой Зеландии была выявленаассоциация rs11091046 (3123A>С) гена AGTR2 с гестозом у пациенток с индексом массы тела(ИМТ)≥25 кг/м² [Zhou et al., 2013]. Таким образом, при изучении гестоза важно рассматриватьне только генетические факторы риска, но и учитывать их сочетания с индивидуальнымиклиническими данными больных.Анализ литературы показывает, что на сегодняшний день накоплено много фактов овозможнойпричастностивыбранныхгеновиизмененийвихнуклеотиднойпоследовательности к возникновению гестоза.

Однако существует необходимость дальнейших,клинически и генетически углубленных исследований этой проблемы. Почти отсутствуютсистематические исследования. Только для некоторых генов изучена ассоциация с гестозом взависимости от тяжести патологии. Очень мало исследований, в которых учтены данныеанамнеза больных, ген-генные и ген-средовые взаимодействия. Крайне фрагментарны сведенияо связи этих генов с особенностями клинического проявления гестоза. Важно также отметить,что за исключением ранее изученной нами делеции гена PAI1 -675 5G>4G (rs1799768)[Мозговая, 2003], сведения об ассоциации остальных вышеперечисленных генов-кандидатов ивариантов их полиморфных сайтов с гестозом у женщин Северо-Западного региона Россиипрактически отсутствуют. В этой связи представляется актуальным изучение ассоциациивыбранных генетических факторов с гестозом в популяции Северо-Западного региона России сучетом клинико-анамнестических особенностей и анализ их влияния на вариабельностьпатогенетически важных лабораторных показателей и клинических признаков патологии.401.8 Роль микроРНК в развитии гестозаЗначение регуляторных микроРНК в патогенезе гестоза в настоящее время активноизучается МикроРНК (miRNA) – это класс малых некодирующих молекул РНК длиной 22нуклеотида, которым отводится важная роль в негативной регуляции трансляции мРНК [Gunelet al., 2011; Chen and Wang, 2013; Morales-Prieto et al., 2014].

Свое действие микроРНКпроявляют путем связывания с 3'-нетранслируемой областью (3'-НТО) специфических мРНК,приводя к их деградации или репрессии трансляции [Chen and Wang, 2013]. При этом однамолекула микроРНК может взаимодействовать с несколькими (до 20) мРНК.К настоящему времени в геноме человека идентифицировано более 1000 микроРНК.Предполагается, что они могут регулировать синтез около 30% всех протеин-кодирующихгенов [Ziebarth et al., 2012]. Имеются убедительные доказательства того, что микроРНКвовлеченывомногиебиологическиепроцессы,включаяэмбриональноеразвитие,дифференцировку, апоптоз, пролиферацию, иммунный ответ, метаболизм и другие [Slaby et al.,2009; Gunel et al., 2011].

Содержание ряда микроРНК изменяется при различных заболеваниях[van Empel et al., 2012; Li et al., 2013].Недавние исследования позволяют предположить участие микроРНК в процессахрепродукции [Li et al., 2013]. Показано, что микроРНК являются необходимыми компонентамидля развития беременности и могут регулировать такие процессы, имплантация, инвазиятрофобласта, формирование плаценты, установление иммунологической толерантностиорганизма матери к тканям плода, развитие плода и др. [Fu et al., 2013]. В плацентесинтезируется от 300 до 600 типов микроРНК, а также белки Drosha, Exportin 5, Dicer,Argonaute 2 и DP103, необходимые для биогенеза микроРНК [Chen and Wang, 2013; Rudov et al.,2014].

Изменение содержания некоторых плацентарныхмикроРНК ассоциировано сразличными осложнениями беременности: гестационным сахарным диабетом, задержкойвнутриутробного развития плода, невынашиванием беременности и гестозом [Zhao et al., 2013a;Morales-Prieto et al., 2014].Pineles B. L. с соавт. (2007) впервые сообщили об изменении содержания плацентарныхмикроРНК при гестозе.

Анализ 157 микроРНК показал, что у пациенток с гестозом повышеносодержание двух микроРНК miR-210 и miR-182 [Pineles et al., 2007]. За этим пилотнымисследованием последовали и другие работы по изучению содержания микроРНК при гестозе(таблица 4).41Таблица 4 - Результаты исследований по изучению содержания микроРНК в плаценте при гестозеИсследованиеСтранаМетодPineles et al.,2007Hu et al., 2009СШАОТ-ПЦРРВ(157микроРНК)Микрочип "CapitalBio Corp"(677 зондов)Г (n=9)К (n = 9)Г (n=4)К (n = 4)pcor<0,1,FC≥2p<0,05,FC≥2,0Валидация ОТ-ПЦР РВГ (n=24)К (n = 26)ГТС (n = 15)К (n = 11)КитайГруппыКритерийp<0,05p<0,05,FC≥1,8181a, 584, 30a-3p, 210, 152, 517*,518b, 519e*, 638, 296, 362101, 10b, 218, 590, 204, 32, 126*,18a,19a, 411, 377, 154*, 625, 144, 195, 150, 1,18b, 542-3p, 363, 450, 223, 3741, 34c-5p, 139-5p, 328, 500, 584, 1247Микрочип "Exiqon" (455зондов)Enquobahrie etal., 2011Mayor-Lynn etal., 2011Noack et al.2011Ishibashi et al.,2012СШАМикрочип "Invitrogen" (1295зондов) и ОТ-ПЦР РВМикрочип "Invitrogen" (1213зондов) и ОТ-ПЦР РВОТ-ПЦР РВ (162микроРНК)Полногеномноесеквенирование (Illumina) иОТ-ПЦР РВ (677микроРНК)Микрочип "LC Sciences"(894 зонда)Микрочип "AffymetrixGeneChip miRNA" (847зондов)Г (n=20)К (n = 20)Г (n=7)К (n = 6)ГТС (n=5)К (n = 5)Г (n=8)К (n = 10)pcor<0,05,FC≥1,5p<0,05,FC≥1,5p<0,05,FC≥2,0p<0,05,FC≥1,5ГТС (n=3)К (n = 3)Г (n=9)К (n = 9)p<0,05Микрочип "PANArray" (158зондов)Микрочип "CapitalBio Corp"ГТС (n=10)К (n = 10)ГТС (n=3)К (n=3)КитайWang et al.2012Betoni et al.,2013СШАChoi et al., 2013КореяXu et al., 2014КитайСШАВалидация ОТ-ПЦР РВ214, 658, 532-3p , 423-5p, 491-5p, 612,508-5pКитайГерманияМикроРНК с повышеннымсодержанием181a, 195, 222, 16, 29b, 26b, 335, 126,7f, 565, 20b, 27a, 141, 519b-3p, 451,450a, 520g, 30e, 522, 486-3p16, 26b, 29b, 181a, 195, 335, 222Zhu et al., 2009СШАМикроРНК с пониженнымсодержанием182, 210210-15b7b, 104, 128a, 133b, 182*, 302*10b, 18a, 19a, 20a, 22, 126, 142–3p, 144,146b-5p, 185, 193b, 193b*, 210, 451,517c, 518c, 518f, 519e, 520a-3p, 525–5p, 526b, 59020b, 516a-5p, 512–3p, 2277, 524224p<0,05,FC≥1,5210, 193bp<0,05,FC≥2,0p<0,05,FC≥1,592b, 197, 342-3p, 296, 26b, 25, 296-3p,26a, 198, 202, 191, 95, 204181a, 584, 30a-3p, 151, 31, 210, 17-3p,193b, 638, 525*, 515-3p, 519e*, 518b,524, 296, 362210, 30a-3p, 518b, 524, 17-3p, 151,193b520b, 502-5p, 24-1, 363, 329, 221, 199b5p, 218, 493, 520f, 520c-3p, 196b, 128,551b, 192, 505, 519c-3p, 26b, 454, 29c, 7f,140-5p, 223, 214, 196a, 224, 542-3p, 489,101, 145, 20a21, 223151, 146a, 192, 34c-5p214, 218, 590, 18a, 19a, 379, 411, 195,223, 363, 542-3pГТС (n=14)p<0,05195, 223, 218, 18a, 379, 411К (n = 33)Weedon-FekjærНорвегия Полногеномноеранний Г (n=23)pcor<0,05,17 микроРНК (ранний Г)12 микроРНК, включая 223, 224, 1301et al., 2014секвенирование (Illumina)поздний Г (n=26) прочтения >(ранний Г), 210 (поздний Г)К (n = 23)50Примечание - Г - гестоз, ГТС - гестоз тяжелой степени, К - контроль, ОТ-ПЦР РВ - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени, FC –fold change - кратность изменения содержания, pcor - p с учетом поправки Бенжамини–Хохберга, * обозначены фиксированные в формалине парафинизированные ткани плаценты,жирным отмечены микроРНК, для которых результаты совпадают, по крайней мере, в двух независимых исследованиях.42Как видно из таблицы 4, все работы, посвященные анализу содержания микроРНК пригестозе, выполнены зарубежными исследователями, в то время как в России такихисследований не проводилось.