Диссертация (Молекулярно-генетические аспекты развития гестоза у женщин северо-западного региона Hоссии), страница 6

Однако при исследовании 10полиморфных сайтов этого гена у 340 женщин с гестозом и 357 здоровых беременныхассоциация ROCK2 с гестозом не подтвердилась [Peterson et al., 2009].Эксперименты на животных позволили идентифицировать ген СОМТ, кодирующийфермент катехол-О-метилтрансферазу [Kanasaki et al., 2008]. У мышей с делецией гена COMTпри беременности развивались классические признаки гестоза: подъем АД, протеинурия игипоксия плода. Этот факт позволил предположить, что развитие гестоза связано с дефектами вгене COMT.

Наибольшее внимание ученых привлек полиморфный сайт rs4680 в 4 экзоне этогогена (однонуклеотидная замена 472G>A), поскольку у носителей аллели A активность ферментаснижена в 3-4 раза [Roten et al., 2011]. Согласно данным корейских ученых у женщин сгенотипом AA повышен риск развития гестоза (ОШ=1.97; 95% ДИ: 1.02-3.83), его тяжелыхформ (ОШ=3.29; 95% ДИ: 1.60-6.77) и рождения детей с низкой массой тела при гестозе(ОШ=4.05; 95% ДИ: 1.78-9.22) [Lim et al., 2010]. В то же время в работе Nackley A.G.

et al.(2006) показано, что активность COMT может зависеть от комбинации нескольких аллелейэтого гена. В крупном популяционном исследовании, выполненном в Нидерландах, былаобнаружена связь повторного гестоза с гаплотипом rs4680G-rs6269A, ассоциированного снизкой активностью фермента (p=0,018) [Roten et al., 2011].

Неожиданные результаты получилиисследователи из Чили, вероятность возникновения гестоза была снижена у носителей21гаплотипа rs6269A-rs4633C-rs4818C-rs4680G, ассоциированного с низкой активностью COMT[Hill et al., 2011].Опубликованы результаты трех полногеномных анализов ассоциаций (Genome-wideAssociation Studies, GWAS) при гестозе. Первое, проведенное в 2012 году на выборке изавстралийской популяции (538 пациенток с гестозом и 540 женщин группы контроля), выявилосвязь гестоза с 14-ю полиморфными сайтами, однако, после коррекции на множественныесравнения ассоциацию показали только rs7579169 (p=3,58×10-7; ОШ=1,57 для аллелей) иrs12711941 (p=4,26×10-7; ОШ=1,56 для аллелей), локализованные на 2-ой хромосоме (2q14.2)недалеко(15т.п.о.)от3' нетраслируемойобластигенаингибинабета(INHBB).Ресеквенирование образцов ДНК пациенток с гестозом и женщин контрольной группы выявилотретий сайт (rs7576192), ассоциированный с гестозом (p=1,48×10-7; ОШ=1,59 для аллелей),сцепленный с rs7579169 и rs12711941 (r2>0.92).

Однако анализ на выборках женщин изНорвегиииФинляндии,неподтвердилассоциациимежду этимиизменениямивпоследовательности ДНК и гестозом [Johnson et al., 2012]. Второе полногеномное исследованиеассоциации проведено в США (177 пациенток с гестозом и 116 женщин без осложненийбеременности). Оно позволило выявить ассоциацию гестоза с 4-мя полиморфными сайтами на4-ой, 1-ой, 3-ей и 12-ой хромосомах вблизи генов KIAA1239, ESRRG, LMCD1 и IFLTD1: rs14264(p=2,58×10-2 для аллелей), rs17686866 (p=1,97×10-5 для аллелей), rs9831647 (p=9,36×10-6 дляаллелей) и rs10743565 (p=1,64×10-5 для аллелей), которая не подтвердилась после введенияпоправки на множественные сравнения (p>0,05) [Zhao et al., 2012a].

Еще одно полногеномноеисследование, выполненное на небольших выборках из разных популяций (афро-карибы,испанцы и европейцы) позволило идентифицировать 18 потенциальных маркеров гестоза,однако после коррекции на множественные сравнения ни один из них не подтвердилассоциации с гестозом (p>0,05) [Zhao et al., 2013b].Помимоописанныхвыше,проведеномножествоассоциативныхисследованийвариантов полиморфных сайтов функциональных генов-кандидатов гестоза.

Первые работы,выполненные в 90-х годах прошлого века, показали важную роль полиморфизма генов главногокомплекса гистосовместимости в развитии гестоза [Павлов и Иванов, 2005]. Самоекрупномасштабное исследование, включающее 190 функциональных генов-кандидатов (775ДНК-маркеров), позволило обнаружить пять наиболее значимых сайтов, ассоциированных сгестозом: rs17639446 гена COL1A1, rs3783550 гена IL1A, rs633876793 гена COL4A2, rs17252991гена PTGER2 и rs17882765 гена IL12RB1 [Goddard et al., 2007]. В связи со сложнойпатофизиологией гестоза список генов-кандидатов очень велик и постоянно пополняется.

Кнастоящему времени опубликованы исследования ассоциаций гестоза примерно с 360 генамикандидатами [http://www.hugenavigator.net], примерно для 100 из них хотя бы в одной работе22получены положительные результаты (приложение А).

Они включают гены системысвертывания крови, гены, кодирующие белки ренин-ангиотензиновой системы, гены факторовэндотелия, гены, кодирующие ферменты системы детоксикации, гены плацентарных факторов,гены компонентов иммунной системы, гены метаболизма липидов, гены синтеза гормонов идругие.Ксожалению,ниодинизнихнеявляетсяобщепризнаннымгеномпредрасположенности к гестозу. Для большинства этих генов (их полиморфных сайтов)ассоциация с риском развития гестоза показана лишь в единичных работах.

Для других данные разных авторов редко совпадают, и противоречивость результатов возрастает по мереувеличения числа исследований. Вероятно, это обусловлено этническими факторами,различным дизайном исследования (использованием разных классификаций гестоза приформировании групп больных), методическими ошибками и небольшим размером выборок[Chappell and Morgan, 2006].

В ряде исследований показано, что риск развития гестоза, как илюбой другой мультифакторной патологии, может быть связан не только с отдельнымигенетическими факторами, но и со сложными взаимодействиями между ними и с другимифакторами риска [Vefring et al., 2004; Tempfer et al., 2004; Dalmaz et al., 2006; Zhou et al., 2013].Учитывая многообразие клинических форм и патогенетических механизмов гестоза, можнопредположить, что список генов-кандидатов гестоза и их полиморфных сайтов на сегодняшнийдень не является полным, в то время как известные гены изучены недостаточно.

Вполневозможно, что дальнейшие исследования позволят найти причины противоречий, уточнитьроль каждого гена (изменений его нуклеотидной последовательности) в патогенезе гестоза иполучить новые данные о генетике этого осложнения беременности.1.7 Выбор генов и полиморфных сайтов для настоящего исследованияВ настоящее исследование были включены гены нескольких функциональных групп,полиморфные сайты которых могут быть ассоциированы с повышенным риском развитиягестоза. Ниже приведено краткое описание этих генов, функции их белковых продуктов ивыбранных полиморфных сайтов.1.7.1 Гены системы свертывания кровиГены системы свертывания крови могут вносить особый вклад в развитие гестоза.Распространенными осложнениями при гестозе являются различные нарушения свертывания23крови, прежде всего тромбофилия (склонность к тромбообразованию) [Репина, 2005; Бицадзе идр., 2012; Зайнуллин и др., 2007].

Предполагается, что повышенная склонность ктромбообразованию у беременных может проявиться в виде дефектов процессов имплантации,недостаточной глубиной инвазии трофобласта, аномальной плацентацией, микротромбозами игипоксическими изменениями в маточно-плацентарных сосудах с развитием эндотелиопатий[Репина, 2005; Бицадзе и др., 2012, Зайнуллин и др., 2007].

Помимо этого, тромбофилия,вероятно, способствует возникновению тромбозов в сосудах внутренних органов беременной иразвитию тяжелых форм гестоза, включая, полиорганную недостаточность, эклампсию иHELLP-синдром [Зайнуллин и др., 2007].Сегодня известны десятки полиморфных сайтов в генах, кодирующих белки системысвертываниякрови,которыепоказалиассоциациюсповышеннойсклонностьюктромбообразованию [Баранов и др., 2009]. В ряде исследований продемонстрировано, чтонекоторые из вариантов этих сайтов могут влиять на риск развития гестоза и другихакушерских патологий [Баранов и др., 2009]. Для изучения связи с гестозом наибольшийинтерес представляют полиморфные сайты генов F7 rs6046, F5 rs6025, F2 rs1799963, FGBrs1800790, ITGB3 rs5918, ITGA2 rs1126643 и PAI1 rs1799768.Ген F7 расположен в локусе 13q34, по протяженности составляет более 12,8 т.п.н.,состоит из 9 экзонов [http://www.ncbi.nlm.nh.gov/].

Белковый продукт гена - фактор свертываниякрови VII (F7), вырабатывается в печени при участии витамина К. F7 активируется факторамисвертывания крови IXa, Xa, XIIa или тромбином и после взаимодействия с фактором III (F3),активирует фактор X (F10), запуская "внешний" путь каскада коагуляции. F7 вместе с F3 такжеможет активировать фактор IX ("внутренний" механизм коагуляции) [Laasanen et al., 2002].В гене F7 выявлено 656 полиморфных участков [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/].Функционально значимой и хорошо изученной является нулеотидная замена 10976G>A(rs6046), обуславливающая аминокислотную замену аргинина на глутамин в положении 506(Arg506Gln) в F7. Частота аллели A в европейской популяции составляет 9-20%, в азиатской - 46%, у американцев - 8-14%, у африканцев - 7-13% [http://www.ensembl.org/].

У носителей аллелиА экспрессия гена и, соответственно, содержание F7 в крови снижены (до 72% контрольногоуровня у гомозигот АА [Girelli et al., 2000], что приводит к ослаблению коагуляционногокаскада. Благодаря этому вариант A и генотип АА являются защитными в развитии тромбозов иинфаркта миокарда [Girelli et al., 2000; Zee et al., 2009]. Согласно Zee R. и соавт. (2009), наличиеаллели А уменьшает риск идиопатической венозной тромбоэмболии у женщин (p=0.008; pcor(поправка Бенжамини–Хохберга )=0.12,КР (коэффициент риска) =0.54; 95%ДИ: 0.35-0.86). Имеютсяисследования, в которых замена 10976G>A (rs6046) рассматривается в качестве фактора рискаразвития гестоза [Laasanen et al., 2002].24Ген F5 находится в локусе 1q23, состоит из 80 т.п.н., включает 25 экзонов,экспрессируется в печени и во многих других клетках, в том числе фибробластах и лимфоцитах[http://www.ncbi.nlm.nh.gov/].