Диссертация (Молекулярно-генетические аспекты развития гестоза у женщин северо-западного региона Hоссии)

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙУНИВЕРСИТЕТ»ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ«НАУЧНО – ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ АКУШЕРСТВА, ГИНЕКОЛОГИИ ИРЕПРОДУКТОЛОГИИ ИМ. Д.О.ОТТА»На правах рукописиВашукова Елена СергеевнаМОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЗВИТИЯ ГЕСТОЗА УЖЕНЩИН СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО РЕГИОНА РОССИИСпециальность: 03.02.07 - генетикадиссертацияна соискание ученой степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:член-корр. РАН, з.д.н., д.м.н., профессор В.С. БарановСанкт-Петербург – 20172ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ ........................................................................................................................................... 4ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................................................

101.1 Гестоз. Клиническое описание ................................................................................................... 101.2 Терминология и классификация гестоза .................................................................................... 111.3 Этиология и патогенез гестоза .................................................................................................... 121.4 Результаты генетико-эпидемиологических исследований.......................................................

151.5 Молекулярно-генетические аспекты патогенеза гестоза ......................................................... 171.6 Гены, ассоциированные с развитием гестоза ............................................................................ 181.7 Выбор генов и полиморфных сайтов для настоящего исследования ..................................... 221.7.1 Гены системы свертывания крови ........................................................................................... 221.7.2 Гены регуляции артериального давления ............................................................................... 281.7.3 Гены дисфункции эндотелия....................................................................................................

321.7.4 Гены метаболизма липидов ...................................................................................................... 361.7.5 Межгенные и ген-средовые взаимодействия ......................................................................... 391.8 Роль микроРНК в развитии гестоза ............................................................................................

40ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ............................................................................................ 432.1 Материалы исследований ............................................................................................................ 432.2 Методы выделения нуклеиновых кислот из биологического материала ............................... 452.3 Анализ полиморфных сайтов генов с помощью гибридизации на ДНК-биочипе ................ 462.4 Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ-метод) ...............

512.5 Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) .................................................................... 522.6 Анализ образцов малых РНК на секвенаторе "Ion Torrent" ..................................................... 542.7 Статистическая обработка данных ............................................................................................. 552.8 Анализ результатов секвенирования ..........................................................................................

57ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ................................................................................................................... 583.1 Связь вариантов исследуемых полиморфных сайтов с развитием гестоза ............................ 583.1.1 Клиническая характеристика исследуемых групп ................................................................. 583.1.2 Сравнительный анализ частот вариантов исследуемых полиморфных сайтов у беременныхс гестозом и в группе сравнения ....................................................................................................... 623.1.3 Особенности ассоциации вариантов исследуемых полиморфных сайтов с риском развитияразличных клинических форм гестоза ............................................................................................. 653.1.4 Сочетания вариантов исследуемых полиморфных сайтов при гестозе ...............................

843.1.5 Прогностическая значимость выявленных генетических маркеров гестоза ....................... 8833.1.6 Ассоциация вариантов исследуемых полиморфных сайтов с клинико-лабораторнымипоказателями....................................................................................................................................... 913.2 Содержание микроРНК в плаценте при гестозе и в норме ...................................................... 983.2.1 Клиническая характеристика исследуемых групп ................................................................. 983.2.2 Анализ данных секвенирования ..............................................................................................

993.2.3 МикроРНК, содержание которых изменено в образцах плаценты при гестозе по сравнениюс нормой ............................................................................................................................................ 100ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ ...............................................................................................................

102ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................................................ 122СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .............................................................................................................. 124СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................................................ 128Приложение A ..................................................................................................................................

157Приложение Б ................................................................................................................................... 1704ВВЕДЕНИЕАктуальность. Проблема гестоза является одной из важнейших в современномакушерстве. Частота гестоза по разным оценкам составляет от 5 до 20% всех беременностей[Серов, 2005]. В России гестоз осложняет каждую 5-6 беременность [Айламазян и Мозговая,2008]. Согласно Росстату в 2013 году симптомы гестоза были зарегистрированы у 15,9%женщин, закончивших беременность [http://www.gks.ru].

Особое значение гестоза обусловленовысоким уровнем материнской и детской заболеваемости и смертности. На долю гестозаприходится 15–25% случаев материнской смертности [Айламазян и Мозговая, 2008].Неблагоприятные исходы для плода при гестозе превышают средние показатели в 5-7 раз[Серов, 2005]. Гестоз может быть причиной преждевременной отслойки нормальнорасположенной плаценты (ПОНРП), массивных кровотечений во время и после родов,рождения детей с малой массой тела [Репина, 2005]. Осложнениями гестоза также являютсяплацентарная недостаточность и синдром задержки развития плода (ЗВУР) [Репина, 2005;Радзинский и Галина, 2007]. Преждевременные роды при гестозе наблюдаются в 25-41%,частота оперативного родоразрешения составляет 40% [Соколов и Сельков, 2012].

Отдаленныйпрогноз женщин, перенесших гестоз, связан с повышенной частотой развития сахарногодиабета, ожирения, ишемической болезни сердца, инсультов [Bellamy et al., 2007; Pouta et al.,2004; Tenhola et al., 2006]. Дети женщин с гестозом чаще страдают различнымиметаболическими, гормональными и сердечно-сосудистыми заболеваниями (ССЗ) [Duley et al.,2004; Tenhola et al., 2006].Несмотря на длительную историю изучения, этиология и патогенез гестоза остаются попрежнему малопонятными.

В связи с этим большое значение имеют молекулярно-генетическиеисследования, которые позволяют приблизиться к выяснению причин возникновения гестоза,пониманию молекулярных механизмов его развития, а в перспективе, сделают возможнымпроведение ранней диагностики, своевременной профилактики и адекватного лечения этогогрозного осложнения беременности [Chappel et al., 2006; Mutze et al., 2008; Баранов, 2009;Павлова, 2011].Степень разработанности темы. Наиболее распространенным направлением в областимолекулярной генетики гестоза является изучение полиморфизма ДНК. Основываясь на данныхо патогенезе гестоза, результатах исследований, полученных на модельных объектах,полногеномном анализе сцепления и аллельных ассоциаций, идентифицировано свыше 100генов-кандидатов этого осложнения беременности [http://www.hugenavigator.net].

К нимотносятся гены системы свертывания крови, гены, кодирующие белки ренин-ангиотензиновой5системы, ферменты системы детоксикации, плацентарные факторы, компоненты иммуннойсистемы, гены, ответственные за функцию эндотелия, синтез гормонов, гены метаболизмалипидов и другие. За последние годы было проведено немало исследований, посвященныхпоиску ассоциаций вариантов полиморфных сайтов генов-кандидатов с риском развитиягестоза.

Тем не менее, проблема наследственной предрасположенности к гестозу далека отрешения. Точно не известны гены, которые определяют развитие данной патологии.Недостаточно данных об этнических и популяционных особенностях гестоза, ген-генных и генсредовыхвзаимодействиях,молекулярныхмеханизмахразвитияэтогоосложнениябеременности, о генетических предикторах гестоза, об ассоциации генетических факторов сразличными клиническими формами гестоза.Сравнительно недавно начаты исследования по изучению роли микрорибонуклеиновыхкислот (микроРНК) в патогенезе гестоза.