Отзыв официального оппонента 2 (Получение рекомбинантного антагониста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойств)

Отзыв официального оппонента д.м.н. профессора Калининой Н,М. на диссертацию и автореферат диссертации Колобова Алексея Александровича на тему «Получение рекомбннантного антагониста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойств, представленную к защите на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.01.04 — биохимия Актуальность темы исследования Диссертационное исследование Колобова А.А., выполненное под руководством кандидата биологических наук, доцента Стефанова Василия Евгеньевича, посвящено проблеме лечения псориаза. Эта проблема остается актуальной, так как только в России этим тяжелым, в ряде случаев инвалидизнрующим заболеванием, страдает более 300 тысяч человек. Заболевание сопровождается гиперпродукцией провоспалительных цитокинов и в связи с этим для лечения среднетяжелых и тяжелых форм псориаза, особенно при суставной форме заболевания.

широко используется антицитокиновая терапия — моноклональные антитела к провоспалительным цитокинам Важную роль в активации и поддержания воспаления в коже при псориазе играют цитокины семейства интерлейкина (1Ь) 36 человека — 1Ь-Зби, 1Ь-36Д П.-Збу и специфический антагонист рецептора интерлейкина 36 — П.-36КА. В связи с вышесказанным блокада активации рецептора интерлейкина 36 оказывает лечебный эффект и уменьшает воспаление в коже.

Получение рекомбинантного безметионинового антагониста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойств стало целью диссертационного исследования Колобова А.А. Достаточно подробно соискателем была освещена степень разработанности темы, представлены основные группы ученых. которые занимаются созданием, исследованием и применением различных антицитокиновых препаратов. Описывая наличие системных побочных эффектов у ряда препаратов при парентеральном введении, диссертант обосновывает актуальность разработки препаратов, селективно действующих на уровне наружных кожных покровов.

Научная новизна, теоретическая и практическая значимость работы Научная новизна работы состоит в том, что технология получения безметиониновых белков, состоящая в создании штамма несущего плазмиду с геном интереса и плазмиду с геном метионинаминопептидазы применена к !Ь-36КА впервые. Впервые разработана технология получения биологически активного П.-36КА, позволяющая получать до 10 г высокоочищенного П.-36КА из 160 литров культуры в течение 3-недельного производственного цикла Теоретическая значимость исследования состоит в том, что представлены доказательства структурной схожести П,-36КА человека и мыши, что говорит об относительно недавнем возникновении семейства П.-36 в эволюции.

Практическая значимость состоит в том. что предложены абсолютно новые подходы к лечению распространенного псориаза. Достоверность и обьективность научных положений Соискателем сформулированы пять научных положений, выносимых на защиту, Достоверность научных положений была обеспечена обоснованностью исходных теоретических позиций. Объем проведенного автором исследования бьш достаточен для решения поставленных задач. Данные диссертационного исследования подтверждены первичной документацией. Общая оценка структуры и содержания работы Форма и способ изложения Колобовым А, А. материала диссертационной работы соответствует требованиям ВАК.

Диссертация состоит из введения. обзора данных мировой литературы по теме исследования, материалов и методов. результатов собственных исследований, и их обсуждения выводов и списка литературы. Работа изложена на 169 страницах. Библиографический список содержит 177 публикаций, причем 175 работ зарубежных авторов Основные положения диссертационной работы иллюстрированы 5 таблицами, 58 рисунками и 1 приложением. В крайне интересном обзоре литературы диссертант описывает научные достижения последних лет, которые отражают современные представления о патогенезе псориаза, о роли в иммунопатогенезе заболевания провоспалительных цитокинов и цитокинов семейства П -36 человека Объем методов, использованных для достижения цели, впечатляет: ° Создание генно-инженерных конструкций ° Создание штаммов-продуцентов безметионинового П.-36КА ° Культивирование штаммов-продуцентов 1Ь-36КА ° Иммуноферментный анализ ° Лизис биомассы штаммов-продуцентов П.-36КА ° Очистка растворов от ЛПС ° Различные виды хроматографии ° Оценка биологической активности!Ь-36КА С помощью описанных методов был осугцествлен выбор наиболее продуктивного штамма-продуцента безметионинового П,-36КА, Кроме этого, диссертант осуществил масштабирование культивирования штаммов- продуцентов безметионинового 1Ь-36КА.

Изучено окисление и дезамидирование 1Ь-36КА. Соискатель уделил внимание не только масштабированию культивирования штаммов- продуцентов, но и оптимизации условий хранения П -36КА. В заключении диссертант проводит подробный анализ полученных результатов оригинального исследования. Следует отметить, что наработанный белок уже был использован при проведении доклинических исследований эффективности и безопасности разрабатываемого лекарственного средства для лечения тяжелых форм псориаза на основе 1Ь-36КА. Было показано отсутствие острой токсичности в дозах до 200 мг/кг (в 2000 раз превосходит расчетную терапевтическую дозу для человека), хронической токсичности (20 мг/кг, 90 дней).

репродуктивной токсичности, пирогенности, мутагенности и аллергенности. Представленные выводы полностью соответствуют поставленным задачам и результатам настоящего исследования, Работа изложена научным языком. иллюстрирована оригинальными таблицами и рисунками. В автореферате диссертации отражены основные положения и результаты диссертационного исследования.

и текст автореферата полностью соответствует диссертации. Внедрение результатов исследования Проведение доклинических исследований с благоприятными результатами являются первым этапом внедрением результатов исследования. Рекомендации по использованию результатов работы Необходимо провести первую и последующие фазы клинических испытаний с привлечением государственного финансирования. Апробация работы Результаты диссертационного исследования нашли свое отражение в 8 публикациях, в том числе 2 в научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России, получена справка о приоритетном праве по заявке на патентное изобретение «Способ получения безметионинового репепторного антагониста интерлейкина-36, штамм бактерий Е, со11 ВЬ21 - заявка № 2017103888(006832) от 06.02.2017 и т.д.

Вопросы и замечания Принципиальных замечаний к представленному диссертационному исследованию и автореферату нет. Однако в ходе ознакомления с работой возникли следующие вопросы: 1. Что принципиально нового вы предлагаете при получении рекомбинантного препарата 1Ь-36КА по сравнению с известным препаратом антагонистом рецептора 1Ь-1, созданным ранее в «ГосНИИ ОЧБ», Санкт Петербург' ! 2.

При каких еще дерматологических заболеваниях возможно местное использование 1Ь-36ВА 1исходя из общности патогенеза)7 Заключение Диссертационная работа Колобова А.А., выполненная под руководством кандидата биологических наук, доцента Стефанова Василия Евгеньевича, представленная к защите на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03,01.04— биохимия, является законченной научно-квалификационной работой, в которой на основании выполненных автором исследований решена актуальная научно-практическая задача, имеющая существенное значение для теории и практики исследования цитокинов и их рецепторных антагонистов и возможности терапии тяжелых форм псориаза, По своей актуальности. новизне результатов, степени обоснованности научных положений, представленных на защиту.

и практических предложений, значимых для создания продуцентов рекомбинантных белков и для терапии тяжелых форм псориаза, по отражению основных положений работы в печати, диссертационная работа Колобова Алексея Александровича соответствует требованиям п. 9-14 "Положения о присуждении ученых степеней", утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24.09.2013 г.

№ 842 гв редакции постановления Правительства Российской Федерации от 21.04.2016 №335; от 02.08.2016 г. № 748), предъявляемым к диссертациям на соискание ученой степени кандидата наук по специальности 03.01.04 — биохимия, а соискатель достоин присуждения искомой степени. Главный научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова» МЧС России.

д,м.н., профессор Н.М, Калинина Подпись руки Главного научного сотрудника отдела лабораторной диагностики ВЦЭРМ им А.М.Никифорова МЧС России заверяю: Начальник отдела кадров ФГБУ«Всероссийский центр экстренной и м. А.М.Никифорова» Ф ~.,' ~~Ж~~ +Ф;:-'«.'..': ":.'."~;„' Б . мирнова ~" "и' рбург, ул. Оптиков, д.54ч'-~: радиационной медиц МЧС России ины и «Л» Адрес: 197374 Санкт-Пете Телефон: (812) 702-63-47 е-пза11: щейс1пе'а пгсспп.гй, ~1ьЛЬйп ай11Ы,ггй и тмпгсегт,га .