Диссертация (Многофакторный анализ особенностей течения, диагностики и лечения акне средней и тяжелой степеней тяжести как основа совершенствования качества медицинской помощи), страница 13

Лейкомассуразводили в 2 раза средой 199 с содержанием гепарина (25 ЕД/мл) (ПанЭко,Россия). Ее наслаивали на градиент плотности фиколл-урографина (Pharmacia,США, плотностью 1,077 г/см3) и центрифугировали при 400g 40 мин. Послецентрифугирования МЛПК, образовавшееся интерфазное кольцо, собирали,переносили в другую пробирку. Суспензию МЛПК трижды промывали средой188 в 10-кратном объеме среды и осаждали центрифугированием по 10 мин при250g. Затем концентрацию клеток доводили до 106 кл/мл RPMI-1640 (ПанЭко).Чтобы стимулировать продукцию цитокинов в культуру добaвляли 10 мкг/млPHA (ПaнЭко).

Плaншeты инкубирoвали 15-60 мин при 37°С, 5% сoдержанииСО2. После этого в лунки вливали 10 мкг/мл Berefeldin A (e-Bioscience.com, США)и помещали в СO2-инкубaтор при температуре 37°С на 15 чaс. Из каждой лункиудaляли по 1 мл жидкости, а осaдок хорошо пeремешивали.Определение экспрессии Толл-подобных рецепторов (TLR2, TLR4, TLR9) наМЛПК и клетках кожи изучали с использованием проточного цитометра FC-500(фирмы Beckman Culter, США) с применением моноклональных aнтител (МКА,фирмы Caltag Laboratories, США) против соответствующих антигенoв согласноинструкции фирмы производителя.

После отмывания холодным фосфатносолевым буфером (ФСБ) с 1% фетaльной телячьей сывороткой (ФТС) клеткиокрашивали FITC- и PE-меченными антителами. Далее клетки дважды промывали68ФСБ с 1% ФТС и проводили цитометрию. Гейт (окнo) популяции клетокустанавливали на основе комбинации прямого и боковoго светорассеяния ирaзмера клеток. Результат бaзировался на подсчете 5000 клеток в гейте.Определение уровней α-дефенсина HNP1 в сыворотке крови определяли cпомощью твердофазной ИФА с использованием тест-систем (HNP1, LF, Elisa Kit,Hycult biotech, Netherlands).2.2.6.

Оценка качества жизни пациентовДля определения качества жизни использовали Кардиффский индекссоциальной дезадаптации (Cardiff Acne Disability Index – CADI), индекс оценкипсихологического и социального эффекта акне (Assessment of Psychological andSocial Effect of Acne – APSEA) и русифицированную версию Дерматологическогоиндекса качества жизни (ДИКЖ) (Кочергин Н., 2001г.). Индексы оценены до ипосле окончания терапии всем 534 пациентам.Индекс CADI состоит из 5 вопросов (приложение 2) и вычисляетсясуммированием баллов за каждый вопрос (от 0 до 3). Чем выше количествобаллов, тем в большей степени акне нарушают качество жизни пациента.Максимальное значение – 15, минимальное – 0.Индекс APSEA состоит из 6 вопросов и содержит четыре варианта ответа.Оценка их проводится с градацией через 3 балла: 9(а), 6(b), 3(c), 0(d)). В неговходят и 9 вопросов визуально-аналоговой шкалы от 10 до 0 баллов(приложение 3).

Максимальное значение индекса может достигать 144 балла,минимальное – 0. Чем выше индекс APSEA, тем больше нарушено качествожизни пациента.Русифицированная версия опросника Дерматологический индекс качестважизни (Dermatology Life Quality Index(DLQI)) состоит из 10 вопросов(приложение 4). Влияние акне на качество жизни оценивается по шести основнымпараметрам: 1, 2 вопросы – симптомы/самочувствие; 3 и 4 – ежедневнаяактивность; 5, 6 – досуг; 7 – работа/учеба; 8, 9 – личные отношения; 10 – лечение.69Даны четыре варианта ответа: «очень сильно» – 3 балла, «сильно» – 2балла, «не очень» – 1 балл и «вообще нет» – 0. Результат может варьировать от0 до 30 баллов. Чем выше количество баллов, тем негативнее влияниедерматоза на качество жизни.2.2.7.

Выбор тактики лечения, критерии оценки эффективноститерапии изотретиноином. Разработаны критерии включения и исключениябольных из исследования.Критерии включения: наличие у пациентов акне средней и тяжелой степенитяжести и письменное информированное согласие больных на участие висследовании.Критерием исключения:Женщины,имеющиеванамнезе гинекологические заболевания:эндометриоз, миома матки, поликистоз яичников, гиперандрогения овариальногои смешанного генеза.Беременные, кормящие или планирующие беременность в периодисследования женщины.Патологии со стороны мочевыделительной системы: гломерулонефрит,пиелонефрит, мочекаменная болезнь.трактаНаличие в анамнезе заболеваний со стороны желудочно-кишечногоигепатобилиарнойсистемы:язвеннаяболезньжелудкаидвенадцатиперстной кишки, заболевания, сопровождающиеся цитолитическимсиндромом и печеночной недостаточностью.Наличие в анамнезе психических расстройств.Соматическая патология в стадии обострения.Патология со стороны эндокринной системыИзменения биохимических анализов крови до лечения (повышенныйуровень АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы и др.)Пациенты, которые нерегулярно принимали препарат (некомплаентныек терапии).70Добровольно отказавшиеся от участия в исследовании.Критерии оценки эффективности терапии:Динамика клинических проявлений акне по ДИА.Динамика дерматоскопической картины заболевания.Оценка частоты рецидивов в течение 3-5-летнего диспансерногонаблюдения.Оценка качества жизни до и после лечения.2.2.8.

Статистические обработка результатов исследования.Статистическую обработку материала проводили с использованием пакетастатистических программ «Statistica 16.0» для персонального компьютера.Данные анкет шифоровали в Excel. Описательная статистика количественныхпризнаков представлена средними и среднеквадратическими отклонениями (вформате M±m). Непараметрический критерий χ2 Пирсона использовали дляпроверки различий между двумя выборками парных изменений.

С помощьюкритериев Колмогорова-Смирнова и Spearman Rank Order Correlations изучаливзаимосвязи между переменными внутри групп. Гипотеза зависимости изучаемойпары переменных считалась при значимости р<0,05. Непараметрическийкритерий U- критерий Манна-Уитни использовали для сравнения независимыхвыборок между собой и с контролем, достоверность различий считалась прир<0,05.71ГЛАВА 3.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1.

Встречаемость акне в структуре дерматологической патологии(ретроспективный анализ)Проведенретроспективныйанализ30222амбулаторныхкартдерматологических больных, обратившихся на консультативный прием кдерматологам в консультативную поликлинику ГКБ №14 им. В.Г. Короленко (г.Москва) и Институт аллергологии и клинической иммунологии (г. Москва) затринадцать лет (2003-2015 гг.).Доля пациентов с различными клиническими формами акне в структуредерматологической патологии составляла 12,6% (3808 больных). Иными словами,каждый восьмой пациент имел ту или иную форму акне.Проведен анализ распределения всей выборки больных акне с учетомгендерных характеристик (Рисунок 3).36,563,5женщинымужчиныРисунок 3 – Распределение все выборки больных с акне с учетом пола(N=3808, %)72Женщины преобладали над мужчинами в 1,7 раза – 63,5% (2417) против36,5% (1391).

Это закономерно, т.к. женщины уделяют больше внимания своемувнешнему виду.Встречаемость больных с акне в динамике за 13 лет представлена нарисунке (Рисунок 4).40,137,539,837,234,738,237,935,433,335,734,234,637,52003г.2004г.2005г.2006г.2007г.2008г.2009г.2010г.2011г.2012г.2013г.2014г.2015г.0%10%20%59,962,560,262,865,361,862,164,666,764,365,865,462,530%40%мужчины50%60%70%80%90%100%женщиныРисунок 4 – Динамика ежегодной встречаемости больных с акне с учетом пола напротяжение 13 лет (2003-2015 гг.)На протяжении 13 лет (2004-2015 гг.) сохранялась четкая закономерностьсоотношения больных акне женщин к мужчинам 1:1,5-1,7.Возраст пациентов с акне был от 14 до 54 лет.

Дебют заболеваемости уженщин приходился на 13 лет, у мужчин – 16 лет (Рисунок 5).7310,5старше 50 лет3,22,441-50 лет31-40 лет17,2мужчины23,1женщины45,74721-30 лет2714-20 лет32,901020304050Рисунок 5 – Распределение пациентов с акне с учетом возраста (N=3808, %)Среди лиц обоего пола преобладала возрастная группа 21-30 лет – 46,4% (ж– 47%, м – 45,7%), при отсутствии достоверного отличия (р>0,05). Второе местозанимала возрастная группа 14-20 лет (ж – 32,9%, м – 27%), достоверные отличияотсутствовали (р>0,05).