Диссертация (Фитохимическое исследование клубней топинамбура и создание лечебно - профилактических средств на его основе), страница 4

Отмечается нормализация обмена веществ, функцийпечени и почек.Применение биологически активных добавок к пище является одним изпутей коррекции питания [14,100].19В этой связи имеется ряд разработок в области создания биологическиактивных добавок на основе топинамбура [6,11,12,22,29,46,48,118].В качестве БАД разработан концентрат топинамбура (сушеный),растворимыйпорошокикриопорошокизклубнейЭкспериментальные[10,13,22,49,95,100,126].топинамбурафармакологическиеисследования подтвердили широкий спектр биологической активностиполученных продуктов: адаптогенную антистрессорную, иммуноактивную[2,13,100].

Каксчитают венгерские ученые противораковыйэффект,иммуностимулирующее действие топинамбура обеспечивается высокимсодержанием ионов магния, цинка, селена, а инулин способствует усвоениюорганизмом кальция, железа, активирует работу поджелудочной железы иоказывает влияние на сахарный обмен в печени [28,29,67].

Пектин,содержащийся в топинамбуре, обладает противоязвенной, гемостатической,антифибринолитической,гинохолеотеринемическойактивностьюидр.[11,29,46,67,93,154,166,167]. Экспериментально определено, что пектинснижает уровень холестерина и сахара в крови, нормализует внутриклеточныепроцессы обмена веществ, повышает устойчивость к аллергическим реакциям[29,46,67,93].В России выпускается концентрат топинамбура – продукт переработкитопинамбура элитных сортов по патентоохранным технологиям – подмарками «топинамбур сушеный» и «Перуанская роза» (производстваконцерна«Отечественные[11,48,62,94,95,96].Наинновационныеосновеконцентрататехнологии»)топинамбураидр.,созданыбиологически активные добавки; природный инулиновый комплекс смикроэлементами и препарат «Долголет» (производство Московского заводаДиод, мелкодисперсный порошок из клубней топинамбура «Дар» [23, 47].201.4.Физико - химические свойства, методы анализа основныхдействующих веществ топинамбураИсходя из литературных данных о химическом составе клубнейтопинамбураможновыделитьосновныегруппывеществ,которыеопределяют фармакологическое действие: углеводы, включая полисахариды,свободные и связанные сахара, аминокислоты, дубильные вещества,витамины и др.1.4.1.

Анализ углеводов в лекарственном растительном сырьеУглеводы играют большую роль в жизни растительных и животныхорганизмов. Они являются основными питательными и главным опорнымматериалом клеток и тканей. Их разделяют на 2 группы – монозы(моносахариды) и полиозы (полисахариды), которые находят разнообразноеприменение в медицине [103,110,116,118,124,131].Белоусова А.Л.

[11] свободные сахара в траве топинамбура определялареакцией Бертрана по образованию осадка меди (I) оксида при нагреванииравных объемом водного извлечения из травы топинамбура и реактиваФелинга,атакжеметодомхроматографии.Такимобразомбылиидентифицированы фруктоза, глюкоза и арабиноза. В продуктах гидролизаизвлечения из травы топинамбура методом хроматографии в присутствиистандартных образцов идентифицировали связанные сахара галактозу,ксилозу, арабинозу и рамнозу.В траве очанки после гидролиза водных извлечений серной кислотойметодомбумажнойхроматографиинисходящимспособомкоротковолосистой идентифицировали моносахариды. Способом сравнениясо стандартами образцами установлено, что моносахаридами углеводныхфракций являются глюкоза, галактоза, арабиноза и ксилоза [15,17,136].Содержание свободных сахаров определяли методом прямофазнойВЭЖХ, связанных сахаров -методом капиллярного электрофореза.

В почкахчерной смородины связанных сахаров (арабиноза, глюкоза и галактоза)21больше (9,55%) чем свободных (6,85%), представленных глюкозой ифруктозой [102,134].Все органы первоцвета лекарственного (цветки, листья, корневища скорнями) богаты углеводами. Свободные сахара содержатся только в цветкахи представлены глюкозой, фруктозой и сахарозой.

Сумма свободных сахаров(9,24%). Связанные сахара содержатся во всех частях растения: арабинозой,ксилозой, глюкозой и галактозой. Наиболее богаты связанными сахарамикорневища и корни первоцвета [17].МетодомпрямофазнойВЭЖХвтравезвездчаткиустановленосодержание свободных сахаров, а методом капиллярного электрофорезадоказано наличие связанных сахаров. Свободные сахара глюкоза - 0,32%,фруктоза - 0,52%, связанные углеводы арабиноза - 2,18%, ксилоза - 0,70%,глюкоза - 3,28%, галактоза - 2,10% [103].По цветной реакции и методом хроматографии на бумаге установленуглеводный состав в сырье первоцвета весеннего: обнаружены гексоза иксилоза. Связанные сахара установлены после гидролиза извлечения сернойкислотой по вышеуказанным реакциям [116].1.4.1.1 ПолисахаридыПолисахариды–высокомолекулярныесоединения,образованныемоносахаридами или их производными, соединенные о – гликозиднымисвязями и образующие линейные и разветвленные цепочки [15,28,48,54,96].Наиболее ценным элементом углеводородного комплекса являетсяинулин, содержание которого в растении составляет (в зависимости отлокализации) - от 11 до 36% [28,43,148,149].

Молекула инулина состоит из 30- 35 остатков β - D - фруктофуранозы, цепь которых заканчиваетсяпередуцирующимся остатком α - D - гликопиранозы [72,134,142,164].Наибольшую молекулярную массу имеет инулин, выполняющийфункцию запасного питательного вещества во многих растениях, особенносемейства астровых (клубни топинамбура, корни цикория, корневища икорни девясила и др).22Наряду с инулином одной из важнейших групп полисахаридов являютсяинулоиды. Инулоиды – высокомолекулярные фуктозаны, относятся кгетерополисахаридам, состоят из одного остатка молекулы глюкозы и 10 – 12остатков молекул фруктозы [72,155,164].Инулин и инулоиды нерастворимы в 95% этаноле, легко растворим вводе (без нагревания) [72,155,158,163].Качественнойреакциейнаинулиниинулидыявляетсяихвзаимодействие с раствором Молиша, реакция Селиванова [164,166].В литературе представлен метод фотометрического определенияинулина со спиртовым раствором тимола после предварительного гидролизасерной кислотой, отмечается, что определению мешает присутствие другихсахаров [65].Для количественного определения инулина предложены различныефизико - химические методы анализа [72,138,142].Инулин определяют после мягкого кислотного гидролиза по Бертрану.Имеются различные модефикации указанного метода [28,98].Предложен рентгенодифрактометрический метод определения инулинаподземныхчастяхрастений,обладающийрядомпреимуществ:возможностью применения экспресс-методов определения и простотойподготовительных операций [49,64].Инулин и другие углеводы в инулиносодержащих растениях возможноопределить методами ВЭЖХ и ГЖХ [102,105,142,148,149,160].Предложен также быстрый способ определения инулина, основанный нахроматографическомразделениимоно-иполисахаридовиколориметрическим определении инулина после элюирования горячей водойс антроновым реактивом [142,148,159,174].USP XXV использует методики количественного определения инулина впрепаратах,основанныенавзаимодействиифруктозыскислотойтиобарбитуровой в присутствии кислоты хлористоводородной [169].23Часто используют бумажную хроматографию.

Хроматографируют вразличных системах растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5)этилацетат - уксусная кислота – вода (9:2:2) [72].ЦальО.Я.,РоговскаяхроматоспектрофотометрическийЛ.Я.,методБензельопределенияЛ.В.предложилиполисахаридоввпересчете на инулин. Извлечение полисахаридов проводили водой принагревании на водяной бане.

Извлечение хроматографировали на бумаге.Система растворителей пропанол - этилацетат – вода (6:1:3). Зоныполисахаридов элюировали, полученные растворы нагревали с антроновымреактивом и измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометрапри длине волны 622 нм. К числу недостатков данного метода следуетотнести продолжительность и трудоемкость методики [138].Фармакопейным методом количественного определения полисахаридовявляется гравиметрический метод [26].Выделение полисахаридов из сырья производят водой или этаноломразличной концентрации при нагревании.

Полученные водные либоспиртовые извлечения из сырья содержит помимо полисахаридов и простыхсахаров большое количество сопутствующих веществ.Для очистки извлечений от сопутствующих соединений применяютследующие способы [85,94,95]:1. осаждение сопутствующих веществ 10% раствором свинца ацетата,избыток которого удаляют 5% раствором натрия фосфата или смесью 30%раствора цинка сульфата и 15% раствора желтой кровяной соли. Для этихцелей также могут быть использованы растворы солей меди илифосфорновольфрамовой кислоты;4. очистка на хроматографической колонке с алюминия оксидом;5. смена растворителей.Крометогодляочисткиможноиспользоватьэлектрофорез,ультрафильтрацию, диализ, а для разделения полисахаридов - ионообменную24хроматографию (для разделения нейтральных и кислых полисахаридов) игельфильтрацию [61,62,72].1.4.2. Анализ аминокислот в растительном лекарственномсырье и фитопрепаратахВнастоящеевремяизразличныхрастительныхисточниковидентифицировано более 300 свободных аминокислот и продуктов ихметаболизма [11,68].Для большинства используемых в медицине видов лекарственныхрастений неизвестен качественный аминокислотный состав и количественноесодержание отдельных аминокислот в сырье и препаратах из него.

Поэтомулекарственные растения не рассматриваются в качестве источниковлегкоусвояемых форм аминокислот в комплексе с микроэлементами идругими фармакологически активными веществами. Однако, в последнеевремявозросинтерескопределениюаминокислотногосоставаиколичественного содержания аминокислот в растительном сырье.Как составная часть белков, аминокислоты участвуют в жизненноважных процессах животных и растений. Так, тирозин и фенилаланинявляется основными компонентами для биосинтеза флавоноидов растений[47,45]. Многие аминокислоты играют определенную роль в патогенезесахарного диабета, которые стимулируют выработку инсулина клеткамиподжелудочной железы [47].Для анализа аминокислот используют физические, химические и физико– химические методы анализа.Основным методом определения аминокислот в растениях является иххроматографиянаионитахвсочетаниинингидриновымметодомдетектирования, а также метод градиентной элюции.При использовании аминокислотных анализаторов доказано наличиеаминокислот в траве очанки различных видов (8 связанных и 7 свободныхаминокислот), траве лопуха (сумма свободных аминокислот составляет 71,2525мг, связанных аминокислот – 177,08 мг), в надземной части бурачника, всырье первоцвета, в валериане, сырье магнолии различных видов,морозниковОценено[16,38,52,53,54,63,127,128,131,150].содержаниеаминокислот в таких растениях, как бархат амурский, различные видытысячелистников, черная смородина различных сортов, кализия душистая[72,78, 98,103,113].Установлено, что траве топинамбура сумма свободных аминокислотсоставляет9,74%/кгсухогосырья.Качественноеиколичественноеопределение аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе(Amino Acid Analyzez G 200) [150].

Определено 15 аминокислот в свободномсостоянии. Преобладающими являются аланин, аргинин и глютаминоваякислота [11,12,28].1.4.3. Дубильные вещества и их анализВнастоящеевремянаиболеечастопользуютсяследующейклассификацией дубильных веществ:1. Гидролизуемые дубильные вещества характеризуются наличием в ихмолекуле сложно - эфирных или гликозидных связей, обычно в молекулахэтих дубильных веществ бензольные ядра соединены через атом кислорода,поэтому гидролизуемые дубильные вещества под влиянием ферментов икислот легко гидролизуются, распадаясь на более простые вещества:а) галлотанины - эфира галловой кислоты и сахаров; б) несахаридныеэфиры фенолкарбоновых кислот; в) эллаготанины - эфиры эллаговойкислоты и сахаров.2. Конденсированные дубильные вещества – не расщепляются придействии минеральных кислот, а образуют красно – коричневые продуктыконденсации называемые флабофенами.