Диссертация (Фитохимическое исследование клубней топинамбура и создание лечебно - профилактических средств на его основе), страница 9

Определение суммы полисахаридов в гранулятереакции49Около 0,2 г (точная навеска) гранулята, эквивалентного 0,15 г сухогоэкстракта, помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 75 млводы очищенной и перемешивали до растворения осадка. К полученномуизвлечению прибавляли 2 мл 10% раствора свинца ацетата, перемешивали иоставляли на 10 минут, затем прибавляли 2 мл 5% раствора натрия фосфата,перемешивали, оставляли на 5 мин, доводили объем раствора в колбе водойдо метки, перемешивали (раствор А).Далее проводили определение по методике описанной в разделе«Определение суммы полисахаридов в сухом сырье».Содержание суммы фруктозанов и фруктозидов в грануляте в процентахпри пересчете на инулин и абсолютно сухой гранулят (Х) вычисляли поформуле:Х D  100  100  25  100D  500000; где498  m  5  5  100  W  498  m  100  W D – оптическая плотность испытуемого раствора;показатель498–удельныйпоглощенияпродуктовреакциивзаимодействия инулина с резорцином в кислой среде;m – масса сухого экстракта (г);W – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.5.Количественное определение суммы полисахаридов в капсулахВзятые дляанализа капсулы(20 штук)вскрывали, извлекалисодержимое, взвешивали.

Вычисляли среднюю массу гранулята однойкапсулы. Гранулят помешали в ступку и перемешивали.Около 0,2 г, (точная навеска), эквивалентная 0,15 г сухого экстракта,помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, заливали 75 мл воды ивзбалтывали до растворение. К полученному извлечению прибавляли 2 мл10% раствора свинца ацетата, перемешивали и оставляли на 10 минут, затемприбавляли 2 мл 5% раствора натрия фосфата, перемешивали, оставляли на 5мин, доводили объем раствора в колбе водой до метки, перемешивали(раствор А). Далеепоступали по методике, описанной в разделе«Определение суммы полисахаридов в грануляте».50Содержание суммы полисахаридов (фруктозанов и фруктозидов) в однойкапсуле в граммах, вычисляли по следующей формуле:Х D  100  100  25  bD  100  b; где498  m  5  5  100498  mD – оптическая плотность испытуемого раствора;498–удельныйпоказательпоглощенияпродуктовреакциивзаимодействия инулина с резорцином в кислой среде;m – масса навески в граммах;b - средняя масса гранулята одной капсулы;5.Количественноеопределениеполисахаридов(фруктозановифруктозидов), в настойке гомеопатической матричной из клубней топинамбураВ коническую колбу вместимостью 250 мл помещали 60 мл водыочищенной, 1 мл настойки, 1 мл 10% раствора ацетата свинца, перемешивалии оставляли на 2 мин.

Затем добавляли 2 мл 5% раствора натрия фосфата,перемешивалииоставлялина2мин,затемфильтроваличерезфильтровальную лабораторную марки "Ф" в мерную колбу вместимостью100 мл.Коническую колбу и осадок на фильтре промывали 30 мл воды, сливалив мерную колбу и доводили объем раствора в колбе до метки (раствор А).В две конические колбы вместимостью 50 мл помещали по 5 мл 0,1%спиртового раствора резорцина и по 10 мл 30% раствора кислотыхлористоводородной. В первую колбу помещали 1 мл раствора А(анализируемый раствор), во вторую колбу 1 мл воды (раствор сравнения).Обе колбы нагревали до 80 0С на водяной бане в течение 20 мин, затемохлаждали под струей холодной воды до комнатной температуры,содержимое колб количественно переносили в мерные колбы вместимостью25 мл, доводили объем раствора в колбах до метки 30% раствором кислотыхлористоводородной, перемешивали.Измеряли оптическую плотность анализируемого раствора с помощьюспектрофотометра при длине волны 483 ± 3 нм в кювете с толщиной слоя 10мм, относительно раствора сравнения.51Содержание суммы фруктозанов и фруктозидов в пересчете на инулин впроцентах (Х) вычисляли по формуле:D  100  25D  2500; где498  v1  v 2498Х D – оптическая плотность испытуемого раствора;498–удельныйпоказательпоглощенияпродуктовреакциивзаимодействия инулина с резорцином в кислой среде;v1- количество настойки, взятое для очистки и разведения, мл;v2-количество раствора А, взятое для анализа, мл;2.2.6.

Дубильные веществаДля количественного определения дубильных веществ в лекарственномрастительном сырье использовали перманганатометрическое титрование вприсутствии индигосульфокислоты – метод Левенталя в модификации А.Л.Курсанова, приведенный в ст. ГФΙ, вып.1. и ГФ ХΙΙΙ ОФС.1.5.3.0008.15 [26,30].2.2.7. Экстрактивные веществаСодержание экстрактивных веществ в сырье определяли по ст. ГФ ХΙ,вып.1. и ГФ ХIII ОФС 1.5.3.0006.15 [26,30].2.2.8.

Морфолого – анатомическое исследованиеМикроскопический и макроскопический анализ сырья изучаемыхрастений проводили в соответствии с техникой и требованиями, описанных вст. ГФ ХΙ вып.1 [26].2.2.9. Статистическая обработка результатовСтатистическую обработку результатов фитохимических исследованийпроводили в соответствии с ГФ ХΙΙΙ ОФС.1.1.0013.15 [30].52ГЛАВА 3.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ, ФИТОХИМИЧЕСКОЕИССЛЕДОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА НОРМАТИВНОЙДОКУМЕНТАЦИИ КЛУБНЕЙ ТОПИНАМБУРА3.1. Изучение анатомо-диагностических признаков клубнейтопинамбураДляразработкипоказателей«Микроскопия»внормативнойдокументации необходимы четкие микрофотографии. В литературе необнаруженоубедительнойинформациипомикроскопииклубнейтопинамбура, для включения в нормативную документацию.

Кроме того, наимеющихся опубликованных рисунках не указана величина основныханатомо-диагностических признаков. В связи с этим, необходимо былоизучить анатомо-диагностические признаки для включения в нормативнуюдокументацию.Длямикроскопическогоисследованияготовилимикропрепараты, которые впоследствии были изучены под микроскопомМБН-3. Результаты документировали микрофотографиями с помощьюфотоаппарата «Зенит» с микронасадкой МФН-12.Микроскопия. На поперечном срезе при малом увеличении видны узкаякоревая часть и широкий центральный цилиндр.

Наружный слой состоит изнескольких рядов опробовавших клеток перидермы желтовато-бурого цвета(Рис.1). Клетки с поверхности (Рис.1.) неправильной формы (округлой,прямоугольной, квадратной, комбинированной из перечисленных форм вочертании) с ровными стенками, почти изодиаметрические и немноговытянутые; длиной 41-167 мкм, шириной 41-100 мкм.По направлению внутрь клубня перидерма переходит в кору. Корасостоит из паренхимных клеток почти округлой формы более-менееизодиаметрических с тонкими стенками.

На границе первичной коры ицентральногоосевогоцилиндраобразуетсякольцоизсосудисто-волокнистых пучков (Рис. 3.2.). Центральный цилиндр отделен от коры слаборазличимой эндодермой (Рис.2, 10.). Линия камбия (Рис. 4, 5.) более-менее53четкая, камбий многорядный. Проводящие пучки (Рис.

3, 4.) коллатеральныеоткрытые с частично выраженным камбием. Флоэмная часть пучка хорошоразвита, состоит в основном из лубяной паренхимы, проводящие элементызанимаютнезначительнуючасть.Ксилемавключаетспиральные,лестничные и сетчатые сосуды, перфорация которых обнаруживается напродольных срезах (Рис. 6.), диаметром 16-42 мкм.Широкая сердцевина состоит из паренхимных клеток в основномвытянутыхчетырехугольной,веретеновидной,прямоугольно-веретеновидной формы с ровными стенками.

В сердцевине (Рис. 7, 8, 9.)встречаются отдельные сосуды и их группы (со спиральной, лестничной,сетчатой перфорацией).Рисунок. 1. Клубни топинамбура. Слева: Перидерм (срез с поверхности),ув. х 250. Справа: Поперечный срез: несколько слоев клетокперидерма и паренхима коры, ув. х 200.5412443Рисунок. 2. Клубни топинамбура. Поперечный срез через сосудистоволокнистые пучки, ув. х 70.

1 – эндодерма, 2 – флоэма, 3ксилема, 4 – секреторные каналы.Рисунок. 3. Клубни топинамбура. Поперечный срез через сосудистоволокнистые пучки, ув. х 125.44213Рисунок. 4. Клубни топинамбура. Поперечный срез через сосудистоволокнистые пучки, ув. х 125. 1–камбий, 2–флоэма,3–ксилема, 4–инулин.55221212Рисунок. 5. Клубни топинамбура. Поперечный срез. Многорядный камбий(1). Инулин в паренхиме (2) Ув. х 250.Рисунок. 6. Клубни топинамбура. Продольный срез через сосудистоволокнистый пучок. Сосуды ксилемы. Ув. х 125.Рисунок. 7.

Клубни топинамбура. Продольный срез. Сосуды в паренхимесердцевины. Ув. х 200.561212Рисунок. 8. Клубни топинамбура. Продольный срез. Сосуды (1) и инулин (2)в паренхиме сердцевины. Ув. х 125.2211Рисунок. 9. Клубни топинамбура. Поперечный срез.Сосуды (1) и инулин (2) в паренхиме сердцевины. Ув. х 125.12Рисунок. 10.

Клубни топинамбура. Поперечный срез. Слева: эндодерма (1).Справа: секреторные каналы в ксилеме (2) Ув. х 125.57Рисунок. 11. Клубни топинамбура. Секреторные каналы в паренхиме коры.Слева: продольный срез. Справа: поперечный срез. Ув. х 125.1122Рисунок. 12. Клубни топинамбура. Секреторные каналы в паренхимесердцевины, образующие каплю на месте среза (1).Инулин в паренхиме сердцевины (2).