Диссертация (Изучение фармакологических свойств Caragana Jubata), страница 10

Контрольные животные получали анало-54  гичные по объему и месту нанесения аппликации дистиллированной водой.Продолжительность исследования составляла 8 суток с ежедневным нанесением исследуемых препаратов. На 9-е сутки всех животных выводили из эксперимента с последующим взятием образцов кожного лоскута для исследования тензиометрии.В ходе эксперимента для оценки эффективности ускорения восстановительных процессов после нанесения линейной раны были использованы: морфологические показатели заживления раны (формированиерубца раны, воспалительная инфильтрация в области раны); длина раневой поверхности в см; оценка скорости эпителизации раны в баллах по шкале:0 баллов – отсутствие эпителизации, 1 балл – начало эпителизации с краев раны, 2 балла – эпителизация более 50% раневой поверхности, 3 балла – полная эпителизация раны [Костырко Я.А.,Алексеев К.В., 2014].Дополнительным критерием патологического воспалительного процесса служило появление у животных гнойного отделяемого из раны.Указанные параметры фиксировали ежедневно после индукции патологии в течение 9 суток лечения.

После окончания периода лечения оценивалась тензиометрия участка кожи (раневого рубца), на который наносиласьлинейная рана.Оценка тензиометрии раневого рубцаУ подвергнутых эвтаназии животных вырезали участок раневой поверхности кожи с участком рубца длиной 1 см и шириной 3 см (по 1,5 см вобе стороны от рубца).

С помощью модифицированных аптечных весовопределяли прочность рубца на разрыв, добавляя груз увеличивающейсямассы, воздействующий своим весом на лоскут кожи. Данные тензиометрических измерений для животных из разных групп подвергали статистическойобработке и сравнивали между собой.55  2.6.4. Исследование капилляропротекторной активностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастойна модели ксилоловых петехийИсследования капилляропротекторной активности полученного лиофилизированного водного извлечения караганы проведены на модели ксилоловых петехий согласно «Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (2012 г.).Эксперименты осуществляли на 40 аутбредных белых крысах-самцахмассой 200–220 г.

После завершения 14-дневного карантина все животныебыли случайным образом разделены на группы (табл. 7).Таблица 7Группы исследуемых животных№группы1234НазваниегруппыИнтактнаяn=10Контрольнаяn=10Опытнаяn=10Сравненияn=10Описание группыКрысам не вызывали поражения капилляров и не вводили исследуемые препаратыКрысам на фоне поражения капилляров внутрижелудочно вводили дистилированную водуКрысам на фоне поражения капилляров внутрижелудочно вводили раствор ЛВИК, разведенного дистиллированной водойКрысам на фоне поражения капилляров внутрижелудочно вводили водный раствор измельченных таблеток«Аскорутина» (аскорбиновая кислота + рутозид) (ЗАО«Вифитех», Россия)Всем животным до начала эксперимента депилировали переднююбрюшную стенку. В течение 5 суток животным всех групп, кроме интактной,вводили исследуемые препараты.

Крысам опытной группы вводили растворЛВИК в дозе 308 мг/кг объемом 1,5 мл в пересчете на сухой остаток. Крысамгруппы сравнения вводили раствор «Аскорутина» в рекомендованной производителем дозе – 100 мг/кг. На 6-е сутки эксперимента всем животным, кро-56  ме интактной группы, внутрибрюшинно вводили 300 мкл 0,3%-ного водногораствора красителя трипанового синего («Биолот», Россия).

Через 10 мин накожу животных наносили 20 мкл ксилола. Далее регистрировали время появления первых петехий и их отчетливого окрашивания. Интенсивность и скорость появления окраски пораженного участка отражала степень поражениякапилляров.2.7. Методы исследования гепатопротекторной активностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастойна модели острого гепатита, индуцированного парацетамоломИсследование гепатопротекторной активности лиофилизированноговодного извлечения караганы гривастой проведено с использованием моделиострого гепатита, индуцированного парацетамолом, согласно «Руководствупо проведению доклинических исследований лекарственных средств»(2012 г.).Эксперименты осуществляли на 40 аутбредных белых крысах-самцахWistar массой 200–220 г.

После завершения 14-дневного карантина все животные были случайным образом разделены на группы (табл. 8).Таблица 8Группы исследуемых животных№группы1234НазваниегруппыИнтактнаяn=10Контрольнаяn=10Опытнаяn=10Сравненияn=10Описание группыУ крыс не вызывали острый гепатит и не вводили исследуемые препаратыКрысам с острым гепатитом внутрижелудочно вводили дистиллированную водуКрысам с острым гепатитом внутрижелудочно вводили раствор ЛВИК, разведенного дистиллированнойводой.Крысам с острым гепатитом внутрижелудочно вводили водный раствор измельченных таблеток «Карсила»(экстракт сухой расторопши пятнистой) (Sopharma,Болгария)57  Продолжительность исследования составила 14 суток.

Введение исследуемых веществ животным проводили по схеме «профилактика + лечение».В течение 7 суток животным опытной группы и группы сравнения внутрижелудочно вводились исследуемые препараты. Опытной группе вводили раствор ЛВИК в дозе 308 мг/кг в пересчете на сухой остаток в объеме 1,5 мл.Группе сравнения вводили раствор измельченных таблеток «Карсил»  в рекомендованной дозе 140 мг/кг в объеме 1,5 мл.

Контрольной группе вводилидистиллированную воду. На 7-е сутки исследования животным всех групп,кроме интактных, через 1 ч после введения препаратов индуцировали острыйгепатит. Для индукции острого гепатита использовали парацетамол (ЗАО«Аптеки 36,6», Россия) в дозе 1000 мг/кг, 1 раз/сутки. После индукции патологии следующие 7 суток животные получали исследуемые препараты в техже дозах.На 15-е сутки всех животных выводили из эксперимента с взятием образцов печени для гистологических исследований и исследования антиоксидантной активности.Измерение гематологических показателейДля оценки функционального состояния печени определяли биохимические показатели крови исследуемых животных: АЛТ, АСТ, ЩФ, холестерин, общий билирубин.Образцы крови крыс отбирались из хвостовой вены в объеме 250 мклна 8-е (после индукции гепатита) и на 13-е сутки исследования (перед завершением исследования).

Кровь центрифугировали при 3000 об/мин в течение10 мин и отбирали сыворотку. Значения биохимических показателей в сыворотке крови определяли с использованием наборов фирмы Intermedica(США) на биохимическом анализаторе фирмы Biochem (США).Гистологические исследованияГистологическое исследование было выполнено на ткани печени. Производили вырезку пласта ткани печени сверху вниз. Полученную ткань раз-58  мером 1,5×1,5×0,7 см помещали в 10%-ный нейтральный забуференныйформалин, далее обрабатывали в аппарате гистологической проводки тканейи заливали в парафин. Парафиновые блоки нарезали на роторном микротомена серийные срезы толщиной 4 мкм, затем фиксировали их на предметныестекла, покрытые полилизиновым адгезивом (Mainzel Glaser, Германия), иинкубировали в термостате при 37 °С в течение 12 ч. Полученные препаратыдепарафинировали, регидратировали, окрашивали гематоксилином и эозиноми заключали под покровные стекла с использованием монтирующей средыShandon Mount.Анализ морфологических изменений проводили с помощью балльнойоценки воспаления в соответствии с индексом гистологической активностигепатита по Knodell: 0 – отсутствие воспаления, 4 – минимальное воспаление,5–8 – небольшое воспаление, 9–12 – умеренное воспаление, 13–18 – значительное воспаление.2.7.1.

Исследование антиоксидантной активности  лиофилизированного водного извлечения караганы гривастойметодом активированной хемилюминесценции АБАПв гомогенатах печени крыс, пораженных острым гепатитомДля определения АОА печень крыс выделяли, промывали холодным(+4 °С) физиологическим раствором и готовили 10%-ные гомогенаты (масса/объем). Для этого гомогенизировали 250 мг ткани печени в 2,25 мл холодного физиологического раствора и центрифугировали в течение 20 мин при8000 об/мин, супернатант отделяли и использовали для дальнейших исследований.АОА гомогенатов печени крыс определяли по ингибированию ими хемилюминесценции (ХЛ) люминола, индуцированной водорастворимыми пероксильными радикалами, образующимися при термическом разложенииАБАП [Чехани Н.Р., Теселкин Ю.О., 2012].