Диссертация (Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного), страница 6

Сигнал Н-12 – мультиплет при ~ 5,15-5,35 м.д.[46,55,117].Производныеолеананаиурсанаразличаютсяпомультиплетности сигналов СН3-групп. В первом случае семь синглетов, вовтором – из семи сигналов два дублета с КССВ ~7 Гц [117]. Иногдавследствие наложения сигналов метильных групп однозначный выбор междуолеанановым или урсановым производным затруднен. Положение имультиплетностьсигналаН-18позволяетрешитьэтузадачу:Н-18олеаноловой кислоты дает дублет дублетов 2,82 м.д., урсоловой – дублет при2,08 м.д.

[55,117]. Появление ОН-группы при С-2 дает в 1Н ЯМР спектредублет Н-3 и мультиплет Н-2 в области 3,0-3,9 м.д. [117]. С помощью данных1Н ЯМР спектра решается вопрос о конфигурации заместителей при С-2 и С-3. Для варианта 2α,3α КССВ сигнала Н-2 составляют 11,0; 9,0-10,0; 3,0 Гц,для варианта 2α,3β соответственно 11,0; 3,5-4,0; 3,0 Гц [6,117].38Окисление молекулы терпеноида может иметь место по циклам Dи E.Наличиегидрокси-группыприС-19впроизводныхурсаначеткофиксируется мультиплетностью аллильного протона Н-18 – синглетныйсигнал при 2,52-2,55 м.д.

[81,117]. Отнесение этого сигнала осуществляетсяспециальными методом НМВС, фиксирующим корреляцию с С-12 и С-13[83].Наличие ОН-групп в цикле Dпри С-15 и С-16 фиксируется дублетнымисигналами в1Н ЯМР спектре при 3,93-4,00 м.д. (Н-16) и 4.63-4,76 м.д. (Н-15) вd-пиридине [83]. В работе [121]наоборот сильнопольный сигнал относится кН-15 (4,48 м.д.), а слабопольный к Н-16 (5,05 м.д.), в d-пиридине. Подобнаяизолированная группа–СНОН–СНОН– может присутствовать в цикле Е.Сигналы Н-21 и Н-22 – дублеты при 3,79-3,81 м.д.

и 3,60-3,66 м.д.соответственно (ДМСО-d6) [79]. Значение КССВ вицинальных протонов Н-15и Н-16 или Н-21 и Н-22 указывает на конфигурацию заместителей. Большаяконстанта(~9,5-10,0Гц)характернадлятранс-диаксиальноговзаимодействия [79,112]: 21β, 22α-конфигурация ОН-групп. Меньшеезначение (~3,0-4,0 Гц) характерно для цис-аксиально-экваториальноговзаимодействия [83,112,121]: 15α, 16α-конфигурации ОН-групп.13С ЯМР спектроскопия.13С ЯМР спектроскопия на сегодняшний день является стандартнымметодом и часто применяется при рассмотрении вопроса о структуретритерпеноидов.

За последний 15-20 лет практически каждая статьясодержит данные поотнесениемвсех13С ЯМР спектроскопии этих соединений с полнымсигналов.Характеристическимиявляютсясигналыуглеродов карбонильных групп, дезэкранированных наиболее сильно. Этисигналы образуют отдельную область в самом слабом поле: 176-186 м.д.[72,81,97,114]. Олефиновые углероды Δ12 резонируют в следующиххарактеристическихобластях:δС-12122-129м.д.,δС-13 138-145м.д.[72,81,97,114]. И, наконец, углеродные атомы, замещенные в α-положениикислородными функциями (в основном ОН-группы), дают сигналы в области3966-84 м.д.

[72,81,97,112,114]. Все три группы сигналов прежде всегопринимаются во внимание при анализе спектров 13С ЯМР.Так строение эускафиковой кислоты в работе [70] подтвержденопараметрами сигналов атомов углерода: δС-2 66,1 м.д.; δС-3 79,2 м.д.; δС-19 72,7м.д.; δС-28 181 м.д.; δС-12 128 м.д.; δС-13 139 м.д. В работе [81] приводятсяданные13С ЯМР спектров эускафиковой (δС 67,2; 73,9; 80,1; 129,0; 140,4;185,6) и торментоловой (δС 69,5; 74,1; 84,6; 128,6; 140,8; 186,4) кислот безотнесения, которые не составляет труда сделать самостоятельно на основевышеизложенного.В ряде тритепреноидов СН3-группа при С-17 окислена не полностью докарбоксильной группы. В работе [112] рассматривается строение активногоантимикробного компонента Pittosporum tobira – R-1-барригенола.

Вмолекуле этого тритерпеноида нет карбоксильной группы – степеньокисления СН3-17 до СН2ОН. Соответственно отсутствует в 13С ЯМР спектресигнал карбонильного углерода. Наличие сигналов С-атомов при 67,4, 67,7,72,3, 77,1, 78,0, 78,3хорошо согласуется с присутствием 6 ОН-групп вмолекуле, отнесенных к С-15, С-28 (СН2-ОН), С-16, С-22, С-3, С-2. Областьрезонанса олефиновых углеродов – 124,4 (С-12) и 144,6 (С-13).В некоторых случаях с помощью специальных методов13С ЯМРспектроскопии решаются вопросы тонкой структуры молекулы. В работе [72]рассматривалось строение γ-лактона машериновой кислоты.

Предложеннаянесколькими десятилетиями ранее [130] структура подтверждена. ПоложениеОН- при С-21 и связь с СООН-группой при С-17 подтверждено методомHMBC, показывающим корреляцию Н-21 с СН3-30. Кроме того, авторамиполучен перацетат, в13С ЯМР спектре которого С-21 имеет такой жехимсдвиг (83,7 м.д.), как и в исходном лактоне машериновой кислоты (84,3м.д.), т.е. ОН- при С-21 связан.В работе [114] на основе δС исправлена структура энтагеновой кислотыс 3β,21α,22α на 3β,15α,16α-тригидрокси. Вывод сделан на основании того,что в случае отнесения сигналов 68,6 и79,7 м.д. к С-21 и С-22 сигнал 31 м.д.40(С-20)долженпретерпетьслабопольноесмещениезасчетэффектазаместителя при С-21.

Этого не наблюдается, следовательно, сигналы 68,6 и79,7 м.д. обусловлены С-15 и С-16. Таким образом, вышеизложенноепоказываетзначительнуюроль13СЯМРспектроскопиивхимиитритерпеноидов.1.5.2. Биологическая активность тритерпеноидовОлеаноловаяиурсоловаякислоты,содержащиесявшалфеелекарственном, широко распространены в растительном мире [85]. Ихбиологическая активность отмечалась достаточно давно [62,63,73].

Вуказанной работе отмечена гипотензивная активность олеаноловой кислоты вгликозидной форме [62], желчегонная активность олеаноловой и урсоловойкислот [62,63], влияние урсоловой кислоты на электролитный баланс(выведение ионов Naи K) [63], антибиотическое действие урсоловой кислоты[63,77].В более поздних работах описано углубленное изучение биологическойактивностиназванныхсоединенийирасширеннаборизучаемыхтритерпеноидов. Японские ученые в работе [82] показали активностьолеаноловой и урсоловой кислот в отношении энтерококков, устойчивых кванкомицину. Минимальная подавляющая концентрация олеаноловой иурсоловой кислот 8 и 4 μg/ml соответственно.

Эти кислоты также активны вотношенииStreptococcuspneumoniaизолотистогостафилококка,устойчивого к метициллину [82]. Дополнительное углубленное изучениебиологической активности олеаноловой и урсоловой кислоты показалоналичие цитотоксического действия[96], конкретно на клетки карциномыкишечника человека HCT 15 [94,111]. В работе [112] отмечено ценноеантимикробноемикрофлору,действиетритерпеноидавызывающуюпротивогрибковуюбарригенолапарадонтиты.активностьАвторыэускафиковой,напатогенную[81]изучалиторментоловойи41мириантиковой кислот.

Последняя содержит ОН-группу при С-23, и какотмечают авторы, этот фактор резко увеличивает ее антигрибковуюактивность. Подавляющая рост грибков концентрация мириантиковойкислоты 3μg, эускафиковой и торментоловой 100 μg. Эти кислотыобразуются в поврежденных плодах, подавляя грибковые плесени.Работа [84]вносит вклад в корреляцию зависимости биологическойактивности от строения молекул. Так, по данным авторов [84] наличие 19αОН-группы в производных α-амирина вызывает противовоспалительное иантиноцептивноеторментоловойдействие.кислот.ТаковоеСогласноотмечено[84]дляэускафиковойпротивовоспалительнаяииантиноцептивная активности торментоловой кислоты значительно выше, чемэускафиковой за счет β-ориентации ОН-групп при С-3 (в молекулеэускафиковой 3αОН).В ряде последних работ прослеживается перспективное направлениебиологическойдействиемтрансформациимикроорганизмов.пентациклическихВходетритерпеновреакции,подкатализируемоймикроорганизмами, используются мягкие условия.Процесс проходит часто водну технологическую стадию, что очень важно для количественного выходапродукта [53].

К настоящему времени существует большой объемэкспериментальных данных по биотрансформации олеаноловой кислоты изначительно меньший – по урсоловой. Одно из основных направлениймикробиологического катализа – реакции гидроксилирования по положениям1β, 2α, 6β, 7β, 11β, 15α, 21β. Так биотрансформация олеаноловой кислоты поддействием Penicillium melinii дает 21α-гидроксиолеаноловую кислоту,обладающую выраженной антимикробной активностью против золотистогостафилококка и его форм, устойчивых к метициллину [53].ИспользованиеСunninghamellablaresluanaдлямодификацииолеаноловой кислоты дает 7β-гидроксиолеаноловую кислоту с высокойантимикробной активностью [53].

Помимо антимикробной активностиокисленных форм олеаноловой кислоты под действием микроорганизмов42(грибки, бактерии) получены соединения с противоопухолевой активностью(30гидроксипроизводное), с ингибирующей активностью α-глюкозидазы, чтоимеет значение при лечении сахарного диабета [53].Врядеслучаевпримикробиологическомгидроксилированиитритерпеноидов процесс идет дальше с превращением гидрокси- в оксогруппу. Такая способность микробиологических реагентов выявлена уMucorrouxii (Amylomycesrouxii) NRRL 1894, катализирующего превращениеолеаноловой кислоты в 3-оксо-7β-гидроксиформу.