Диссертация (Научное обоснование технологии совместного получения аммифурина и анмарина плодов амми большой (Ammi Majus L.)), страница 4

Результатомэтих исследований явились лекарственные препараты, содержащие в качествеактивногокомпонентавеществакумариновойприродыиполучившиепрактическое применение в медицинской практике [2,3,6,38,79]. К числу такихпрепаратов можно отнести следующие:- «Бероксан» (ксантотоксин, бергаптен), получаемый из плодов пастернакаPastina casativa L.;- «Аммиифурин» (ксантотокси, бергаптен, изопемпинелин), получаемый изплодов амми большой Ammi majus L.;- «Псорален» (псорален, ангецин), получаемый из плодов и корней псоралеикостянковой Psoralea drupaceae Bge.;- «Псоберан», «Фурален» (псорален, бергаптен), получаемый из листьевинжира обыкновенного Ficus carica L.;21- «Фловерин» (дигидросамидин, виснадин), получаемый из корнейвздутоплодника сибирского Phlodicarpus sibiricus L.- «Пеуцедонин» из корней горичника Морисона Peucedanum morisonii Bess.В настоящее время согласно данным Госреестра лекарственных средствноменклатуралекарственныхсредствфотосенсебилизирующегодействияпредставлена 7 наименованиями, из которых два (амифиурин и оксорален) вкачестве активного компонента содержат природные кумарины амми большой(Таблица 1) [22].Таблица 1- Лекарственные препараты фотосенсебилизирующего действияна основе амми большой№ Наименование ДействующиеЛек.формыЛСвещества1 АммифуринКсантотоксин, Таблетки,бергаптен,0,3% растворизопимпинелин для наружногоприменения2 ОксароленМетоксаленКапсулы 0,01 гКонтролькачествалекарственныхсредствПроизводительЗАО«ФармцентрВИЛАР»(Россия)R.P.Scherer(Австрия)наосновеНДФС 423765-99НД 4213560-05кумариновосуществляется в соответствии с требованиями действующих фармакопейныхстатей (ФС) для отечественных и НД для зарубежных препаратов.Дляподтвержденияподлинностиданныхпрепаратовиспользуетсякачественные реакции с диазореактивом, ангидридом, концентрированной сернойкислотой, кроме того применяется метод хроматографии в тонком слое сорбента(ТСХ) и приводится спектр поглощения.Количественное определение кумаринов в препаратах проводится методамиспектрофотометрии, газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ).221.3 Амми большая – источник получения лекарственных средств1.3.1.Ботаническая характеристика амми большойАмми большая (Ammi majusL.) - однолетнее или двулетнее травянистоерастение, относящееся к семейству сем.

Сельдерейные (Зонтичные) Apiaceae(Umbeliferaceae).Корневая система стержневая, слабовитвистая; корни беловатые. Стебельветвистый, малооблиствененный, прямой, округлый, полый, бороздчатый.Первые3-4листапростые,последующиедважды--триждыперисторассеченные; доли листьев широкие или узкие, по краямострозубчатые. Соцветие - сложный зонтик 10-15 см в диаметре. Лучи зонтикамногочисленные, голые, 2-7 см длиной, с оберткой из многочисленныхзаостренных листочков, во время цветения распростертые, при плодах сжатые.

Листочки обертки перисто- рассеченные, листочки обёрток - цельные.Цветки белые, до 3 мм в диаметре. Тычинок 5, чередующихся с лепестками.Пестиков 2, с нектарным диском у основания. Завязь нижняя, двугнездная.Плод (вислоплодник) - яйцевидный или продолговато-яйцевидный, сжатый сбоков, голый, гладкий двусемянной, распадающаяся на два слегка изогнутых,красновато-бурых, реже серовато-коричневых, с 5 продольными, болеесветлыми ребрами полуплодика (мерикарпия). Цвет зрелых мерикарпиевкрасновато-коричневый, реже серовато-коричневый, ребра более светлые; цветнедозрелых плодов зеленовато-коричневый. Двусемянки ребристые, 1,5-3 ммдлиной, 0,5-2,0 мм шириной. Масса 1000 семян 5 г.Цветет в июне-июле; плодоносит в августе-сентябре [37] (Рисунок 2).1.3.2.Ареал произрастания и возделывание амми большойВ диком виде амми большая произрастает на европейском побережьеСредиземного моря и в Северной Африке.

Редко встречается, как одичавшая,тольконаЮжномберегуКрыма.Культивируетсявосновномвспециализированных совхозах в Молдавии и Украине, в Российской Федерации вБелгородской области и Краснодарском крае [10,18].23В пределах природного ареала растет на песках, в пустынях, по сухимсклонам. Легко переносит недостаток влаги в почве и в воздухе. Обилие осадковвпериодцветенияаммибольшойотрицательносказываетсянаееплодообразовании.

Светолюбивая и теплолюбивая культура, всходы переносятзаморозки только до - 6 °С. Сравнительно нетребовательна к почвам ипредшественникам, но предпочитает нейтральные почвы. В культуре растет налюбых почвах и элементах рельефа, кроме низинных, часто затопляемыхучастков. При застое воды и переувлажнении почвы амми большая растет плохои часто посевы ее погибают [105,103,132].Рисунок 2 – Амми большая (Ammi majusL.)Промышленное возделывание амми большой было сконцентрировано вКрыму, Южном Казахстане, Северном Кавказе. В настоящее время успешно24культивируется в Краснодарском крае в Белгородской области. Селекционныесорта амми большой в нашей стране отсутствуют, поэтому в производствевозделывалипопуляцию,характеризующуюсязначительнойгетерозиготностью по основным хозяйственно-полезным признакам. Врезультате проводимых в настоящее время селекционных исследованийустановлено, что для амми большой характерна разнокачественность семян.Семена разных сроков формирования неравноценны по посевным ихозяйственнымсвойствам.

Растения,полученныеизсемян,созревшихпервыми, отличаются более интенсивным ростом и развитием, и приодинаковомсодержаниидействующихвеществобеспечиваютдополнительную прибавку урожайности плодов 1518 кг с га. Наряду с этимопределено, что семена амми большой имеют период покоя. В лабораторныхусловиях период послеуборочного дозревания завершается через шестьмесяцев после уборки семян.Явление матрикульной разнокачественностисемянцелесообразноиспользуют в семеноводстве, при этом уборку растений на семена необходимопроводить после созревания их в центральном зонтике и в сложных зонтикахдвух последующих порядков [54,56,71].Наряду с использованием нативного сырья изучается возможностьбиотехнологического сырья амми большой использования культуры клеток.

Врезультатепроведенныхфурокумаринов,исследованийустановленыизучаютсяпредшественники,механизмысинтезасвидетельствующиеобобразование фурокумаринов в культуре тканей амми большой [49,62,66,70].1.3.3. Химический состав амми большойПлоды амми содержат фурокумарины: бергаптен, ксантотоксин,изопимпинеллин,метоксален,эммоидин,изоимператорин,гераклеинмармезин (Рисунок 3); эфирное и жирное масло; соли К, Ca, Fe, В, Se, тиннина0,45%, протеинов 13,83%, целлюлозу 22,4%. В плодах амми большой,25произрастающей в Египте выделены 6-гидрокси-7-метокси-4-метилкумарин и6-гидрокси-7-метоксикумаринустановленоналичиеумбеллипренин,гликозиды кверцетина и лютеолина, В жирном масле идентифицированыметиловые эфиры линолевой 9%, олеиновой 5,6% кислот, пальмитиноваякислота 3,98% и линоленовая 1,42%.

В плодах, листьях и корняхаккумулируются Cu, Zn, Мп [12,18,35,63,72,81,].ОСН3ОСН3ОООООСН3ООООООСН3КсантотоксинБергаптен(±)-5I-изопропенил-4I, 5I-дигидропсораленаИзопемпенеллин5I-изопропилпсораленРисунок 3 – Формулы основных фурокумаринов амми большойСледуетотметить,чтонаибольшееколичествофурокумариновнакапливается в плодах. В связи с этим плоды являются лекарственнымрастительным сырьем и используются при получении лекарственныхсубстанций.261.3.4. Аммифурин и способы его полученияЛекарственная субстанция «Аммифурин» разработана во Всероссийскомнаучно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений,прошладоклиническоеиклиническоеизучениеибыларазрешенакмедицинскому применению в качестве фотосенсебилизирующего средства.ПромышленныйэкспериментальнымвыпускпрепаратазаводеВИЛАР.осуществлялсяКачествонасубстанциипроизводственнорегламентировалосьтребованиям ФС 42-509-72 «Аммифурин».

Однако, в связи с постоянными колебаниямисоотношенияфурокумаринов,входящихвсостав aммифурина,производство было прекращено.Первоначально аммифурин получали по способу, предложенному НиконовымГ.К. [2]. Семена амми большой экстрагируют этиловым спиртом при слабом кипениии постоянном перемешивании. Спиртовое извлечение концентрируют примерно до 2% от первоначального объема, смешивают с двукратным объемом воды и оставляютна кристаллизацию. Выделившуюся в виде смолки сумму фурокумаринов обрабатывают 20 % раствором уксусной кислоты, нагретым до 95 - 100°.

Приохлаждении полученных извлечений выпадают кристаллы технического aммифуринa,который перекристаллизовывается из метилового спирта, а затем из бензола. Выходаммифурина составляет 0,23% от массы воздушно-сухого сырья или 38 % отсодержания суммы фурокумаринов в сырье.Позднее технология получения аммифурина была усовершенствованаНиконовым Г.К. и Токаревой Н.В.. В основу был положен метод Шпета вупрощенномварианте.Осадоксуммыфурокумаринов,полученныйвышеописанным способом, смешивают с водой, нагретой до 82 - 85°C, после чегообрабатывают суспензией окиси кальция в воде с той же температурой.

Спустячасотфильтровываютне растворившийсяосадок, фильтрат подкисляютхлороводородной кислотой до рН = 2 и извлекают аммифурин хлороформом.Извлечение сушат над сульфатом натрия и затем сгущают до полного удаления27растворителя. Кубовый остаток растворяют при кипении в двукратном объемеэтиловогоспиртаиохлаждают.Выпавшийвосадокдваждыперекристаллизовывают из этилового спирта. Выход препарата составляет 0,27%от массы воздушно-сухого сырья или 50,2 % от содержаниясуммыфурокумаринов в сырье.ПорезультатамдальнейшихисследованийсприменениемЯМР-спектроскопии было установлено, что аммифурин содержит близкий по строениютретий фурокумарин - ксантотоксин, при этом их соотношение составляет 1 : 1 : 2 .Известно,чтоксантотоксинявляетсяоднимизактивныхфотосенсибилизаторов.В связи с уточнениемразработкеновойсостава аммифурина возникла необходимость внормативно-техническойдокументациинапрепарат.Одновременно были проведены исследования по усовершенствованию технологииполучения аммифурина и разработке методов анализа сырья и готового продукта.Лабораторией фитохимии ВИЛАРа (Скляр Ю.Е., Соколова А.И.