Диссертация (Влияние структуры агликона на иммунотропную активность гликозидов мурамилдипептида), страница 11

В сравнении с контролем: * – p=0,022 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,539 (критерий Данна) илиp=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни). В сравнении с МДП: # – p=0,539(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).92Через 8 часов отмечено повышение концентрации GM-CSF в сывороткекрови контрольных животных с отсутствием значимых изменений в другихгруппах. В результате уровень GM-CSF в группах мышей, получавшихмурамилпептиды, становился ниже такового в контрольной группе (Рис.

39).18*#16&141210864Гептилгликозид МДПМДП0Контроль2MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 39. Концентрация GM-CSF (пг/мл) в сыворотке крови мышейчерез 8 часов после внутрибрюшинного введения МДП или βгептилгликозида МДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,027 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,539 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,022 (критерий Данна) илиp=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни). В сравнении с МДП: # – p=0,539(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).93Через 24 часа от начала эксперимента выявлено исчезновение значимыхотличий между группами по концентрации GM-CSF в сыворотке крови (Рис.40).16141210864Гептилгликозид МДПМДП0Контроль2MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 40.

Концентрация GM-CSF (пг/мл) в сыворотке крови мышейчерез 24 часа после внутрибрюшинного введения МДП или βгептилгликозида МДП94Через 1 час после внутрибрюшинного введения β-гептилгликозида МДПконцентрация IL-4 в сыворотке крови мышей превышала таковую в другихгруппах (Рис. 41).76*#5&4321Гептилгликозид МДПМДПКонтроль0MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 41. Концентрация IL-4 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 1час после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,027 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,539 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,022 (критерий Данна) илиp=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни). В сравнении с МДП: # – p=0,539(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).95К 8-му часу после введения соединений концентрации IL-4 в группахреференс-контроля и контроля не имели статистически значимых отличий, вто же время содержание исследуемого цитокина в сыворотке крови животныхэкспериментальной группы снизилось и было достоверно ниже такового вдругих группах (Рис.42).76*#5432Гептилгликозид МДПМДП0Контроль1MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 42.

Концентрация IL-4 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 8часов после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,061 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,076 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).

В сравнении с МДП: # – p=0,221(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).96Через 24 часа после введения соединений показатели группы референсконтроля были достоверно выше показателей других групп (Рис.43).&5#432МДПКонтроль0Гептилгликозид МДП1MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 43. Концентрация IL-4 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через24 часа после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,063 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: & – p=0,092 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни) или p=0,085 (t-критерий Стьюдента).В сравнении с МДП: # – p=0,221 (критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерийМанна-Уитни) или p=0,034 (t-критерий Стьюдента).Таким образом, введение β-гептилгликозида МДП вызывало через 1 часповышение концентрации IL-1β, IL-6, IFN-γ, TNF-α, GM-CSF и IL-4 всыворотке крови, при этом β-гептилгликозид МДП в большей степениувеличивалуровеньIL-1β,немодифицированным МДП.GM-CSFиIL-4посравнениюс97Через8часовпослевведенияисследуемыхсоединенийвэкспериментальной группе концентрации IL-5, IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α, GMCSF, IL-4 и IL-17 превышали таковые в группе контроля.

В этот период βгептилгликозидМДПиндуцировалбольшийподъемсывороточногосодержания IL-5, IL-10, TNF-α и GM-CSF, чем референс-препарат.Через 24 часа после введения β-гептилгликозид МДП вызывалповышение концентрации IL-5, IL-6 и IL-17 в сыворотке крови. Уровень IL-6в экспериментальной группе была выше, чем в группе референс-контроля.2.2. Действие β-гептилгликозида МДП на рост меланомы B16 ипродолжительность жизни мышей-опухоленосителейОднократное внутрибрюшинное введение β-гептилгликозида МДП вдиапазоне доз от 1 до 25 мкг/животное за 24 часа до прививки меланомы B16не вызывало статистически значимого изменения средней продолжительностижизни мышей-опухоленосителей (табл.

4).Статистически значимое увеличение продолжительности жизни на 28%было зарегистрировано в группе мышей с привитой меланомой B16,получавших β-гептилгликозид МДП в дозе 5 мкг/животное в терапевтическомрежиме.Вдругихдозахисследуемыйгликопептидневлиялнапродолжительность жизни мышей-опухоленосителей (табл. 4).Однократное профилактическое введение β-гептилгликозида МДП вдозах 1, 5 и 25 мкг/мышь не изменяло объем растущего опухолевого узла нина 10-е, ни на 15-е, ни на 20-е сутки после инокуляции клеток меланомы (рис.44, 45, 46).98Таблица 4Влияние β-гептилгликозида МДП на среднюю продолжительностьжизни животных с привитой меланомой B16Группа/доза препраратаСредняяИзменениепродолжительность продолжительностижизни (сутки)жизни (%)β-гептилгликозид МДПКонтроль27,3±1,6–Профилактический режим1 мкг/мышь (50 мкг/кг)27,8± 1,3+15 мкг/мышь (250 мкг/кг)26,9 ± 0,9‒1,425 мкг/мышь (1,25 мг/кг)28,0± 1,7+2Терапевтический режим1 мкг/мышь (50 мкг/кг)27.6 ± 1,2+15 мкг/мышь (250 мкг/кг)38,4 ±3,0*+28*25 мкг/мышь (1,25 мг/кг)25,2 ± 1,1‒7* – р<0,05 по сравнению с контролем99Рисунок 44.

Влияние профилактического введения β-гептилгликозидаМДП на объем опухолевого узла на 10-е сутки после прививки меланомыB16100Рисунок 45 Влияние профилактического введения β-гептилгликозидаМДП на объем опухолевого узла на 15-е сутки после прививки меланомыB16101Рисунок 46. Влияние профилактического введения β-гептилгликозидаМДП на объем опухолевого узла на 20-е сутки после прививки меланомыB16При использовании β-гептилгликозида МДП в терапевтическом режимеобнаружено статистически значимое и при этом дозозависимое торможениеопухолевого роста на 10-е (рис.

47) и 20-е сутки (рис. 49) после имплантацииопухоли. Наиболее выраженное уменьшение объема узла меланомы (-57% и 74%)установленона10-есуткипритерапевтическомвведениииммуностимулятора в дозах 5 мкг и 25 мкг/животное, соответственно. На 20е сутки угнетающее действие этих доз β-гептилгликозида МДП на ростопухоли несколько снижалось (-48% и -48%, соответственно). Любопытно, чтопри промежуточном измерении объема опухолевого узла (15-е сутки) необнаружено противоопухолевого действия, исследуемого гликопептида (рис.48).102**** – р<0,05 по сравнению с контролемРисунок 47.

Влияние введения β-гептилгликозида МДП втерапевтическом режиме на объем опухолевого узла на 10-е сутки послепрививки меланомы B16103Рисунок 48. Влияние введения β-гептилгликозида МДП втерапевтическом режиме на объем опухолевого узла на 15-е сутки послепрививки меланомы B16104*** – р<0,05 по сравнению с контролемРисунок 49. Влияние введения β-гептилгликозида МДП втерапевтическом режиме на объем опухолевого узла на 20-е сутки послепрививки меланомы B16Такимдозозависимыйобразом,β-гептилгликозидпротивоопухолевыйМДПэффектприпроявилзначимыйиспользованиивтерапевтическом режиме.2.3. Влияние β-гептилгликозида МДП на динамику поискового иноркового рефлексов у мышей C57BL/6 с привитой меланомой B16Поисковый и норковый рефлекс отражают функциональную активностиЦНС лабораторных животных. Подавление или усиление этих рефлексовможет свидетельствовать, с одной стороны, о прямом или опосредованномнейтротропном действии испытуемых соединений на животных с привитойопухолью, а с другой – критерием клинического состояния животных иэффективности экспериментальной профилактики или лечения.105Известно,чтомурамилпептидыобладаютнепосредственнойнейрофармакологической активностью.

Более того, некоторые иммунныемедиаторы, выработку которых стимулируют мурамилпептиды, обладают втой или иной степени нейротропными эффектами.Введение гептигликозида МДП не оказало влияния на динамикуноркового и поискового рефлексов у животных экспериментальных групп посравнению с животными контрольной группы (табл.16).Таблица 5Динамика норкового и поискового рефлексов у животных-опухоленосителейГруппа1-е сутки10-е сутки20-е суткиНорковыйрефлексПоисковыйрефлексНорковыйрефлексПоисковыйрефлексНорковыйрефлексПоисковыйрефлексИнтактныеживотные19 ± 38±417 ± 38±217 ±39±2Мышиопухоленосители18 ± 46±28±13±14±21±2β-гептилгликозид МДП – профилактический режим1 мкг/животное17 ± 29±16±24±33±12±25 мкг/животное18 ± 18±27±33±12±21±225 мкг/животное18 ± 27±15±13 ±12±11±1β-гептилгликозид МДП – терапевтический режим1 мкг/животное16 ± 27±27±12±14±21±15 мкг/животное18± 38± 16± 22±25±11±125 мкг/животное19 ± 16±29±15±26±13±3107ЗАКЛЮЧЕНИЕОсновным механизмом иммунотропного действия производных МДП,не содержащих в своем составе остаток мезо-диаминопимелиновой кислоты,является стимуляция цитоплазматических рецепторов NOD2 с дальнейшейактивацией RIP2-зависимого сигнального пути [59].

До конца не ясно, какиеструктурные,стереохимическиеифизико-химическиесвойствамурамилпептидов обеспечивают оптимальную комплементарность к этомувнутриклеточному рецептору.Вместе с тем существенное значение для контактов с цитозольнымисенсорамиимеетнепосредственноепроникновениесоответствующихлигандов внутрь клетки через плазмалемму, а в случае первичного попаданияв клетку в результате эндоцитоза – выход из эндосом в цитоплазму.

Известно,чтоприсоединениелипофильныхмодифицирующихкомпонентовкопределенным участкам МДП придавало молекуле способность лучшепроникать через биологические мембраны, длительнее задерживаться ворганизме и, в конечном итоге, оказывать более выраженные иммунотропныеэффекты, в том числе усиление противоопухолевого иммунного ответа [171,226].Целесообразность использование гликозидного центра молекулы МДПдля введения липофильного «хвоста», или «якоря», принципиально доказана[3,4].Известно,чтоβ-гликозилированиеприводиткповышениюбиологической активности молекулы МДП в различных моделях in vitro [11,13, 15].